枯草芽孢杆菌CS16诱导香蕉抗病性相关防御酶系的研究

以多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、β-1,3-葡聚糖酶等5种防御酶作为植物抗病性反应指标,研究枯草芽孢杆菌CS16发酵液及其上清液对香蕉体内防御酶活性的影响,探讨其诱导香蕉抗病性机理。结果表明:CS16发酵液和上清液处理香蕉苗后,均能诱导香蕉叶片中PPO、POD、SOD、PAL、β-1,3-葡聚糖酶等5种防御酶活性变化。CS16发酵液处理可诱导香蕉植株防御酶出峰数目多、持续时间长。说明CS16菌株及其胞外代谢物在一定程度上能够诱导香蕉抗病性,推测CS16菌株诱导香蕉抗病性是其生防机制之一。     

1株蜡状芽孢杆菌产脱毛蛋白酶的酶性质研究

从盐腌皮上分离、筛选得到1株蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus SZ-4),该菌株经发酵后得到的粗酶液可在12 h内、无硫化物的条件下,将猪皮、牛皮、羊皮等完全脱毛.对该菌株发酵所产脱毛蛋白酶的酶性质进行研究,结果表明:脱毛蛋白酶的分子量约40 kDa,最适作用温度为60℃,最适作用pH为10.0,在40℃以上时热稳定性较差,K+、NH+4、Mg2+、Zn2+和Ca2+对脱毛蛋白酶有不同程度的激活作用,其中NH+4、Mg2+、Zn2+在一定浓度内具有明显的激活作用,Cu2+和Ba2+对脱毛蛋白酶有抑制作用,Na+在不同浓度范围对脱毛蛋白酶有不同的作用.     

产脂肪酶蜡状芽孢杆菌菌株分离和鉴定

为筛选出产脂肪酶的菌株,从油茶枯饼发酵液中取样,用中性红油脂培养基进行初筛,改进铜皂—分光光度法测定酶活力进行复筛,获得1株产脂肪酶活性较强的菌株ck-01.结合形态学观察、生理生化试验、16S rDNA序列鉴定和系统发育分析等方法将其鉴定为蜡状芽孢杆菌.对菌株ck-01的酶学性质的研究结果表明,该菌株所产脂肪酶在35...     

蜡状芽孢杆菌TS-02防治草莓白粉病研究

在室外条件下进行了蜡状芽孢杆菌TS-02防治草莓白粉病的药效试验,并在室内条件下探讨了其防病机理.结果表明:蜡状芽孢杆菌TS-02可以防治草莓白粉病,活菌数大于3×107CFU/ml可达到理想的效果.抑制作用是活菌和菌分泌的抑菌物质共同作用的结果.其中活菌的作用更强;蜡状芽孢杆菌可抑制白粉病菌的定殖,从而达到防治草莓白粉病的效果.     

蜡状芽孢杆菌CLY07菌株的解有机磷特性研究

通过改良的NBRIP培养基,研究从南方红豆杉根际分离筛选得到的解有机磷蜡状芽孢杆菌CLY07的解磷能力,同时探究培养基中卵磷脂添加量、碳源、氮源、碳氮比及环境条件(培养基p H、温度、装液量及盐度等)对该菌株解磷能力的影响。结果表明:蜡状芽孢杆菌CLY07的解磷效果在改良NBRIP培养基中明显优于蒙金娜有机磷培养基。改良NBRIP培养基以葡萄糖为碳源,硫酸铵为氮源,碳氮比为60∶1,卵磷脂添加量为0.20 g,在其余组分不变条件下,该菌株显示出较高的解磷能力。该菌株最佳的解磷环境条件为培养基p H 7.0,温度30℃,不含Na Cl,装液量为1/5。研究显示与蒙金娜有机磷培养基相比,改良的NBRIP培养基在一定程度上更适合于蜡状芽孢杆菌CLY07解磷特性的研究。此外,培养环境能够影响蜡状芽孢杆菌CLY07的解磷能力。     

蜡状芽孢杆菌抗重金属性能及对镉的累积

所研究的蜡状芽孢杆菌RC可以在镉浓度为200mg·L-1的固体培养基平板上生长良好,表明菌株具有强抗镉的能力。该菌株在液体培养基中Cd2+、Cr3+、Pb2+浓度均为75mg·L-1和Mn2+浓度为100mg·L-1培养时,菌株生长正常。在重金属Cr3+、Pb2+、Mn2+存在时,采用红外光谱与原子吸收光谱分析菌株对Cd2+的积累,结果表明,培养基中其他重金属离子的加入,会影响菌株对Cd2+的积累率;当Cr3+存在时,Cr3+可以增加细胞壁上有效官能团活性,明显提高RC菌体对Cd2+的积累率,而其他重金属组合对Cd2+吸附积累能力影响不大;RC细胞壁上活性基团-OH、-NH-、-COOH、-PO34-和-M-O(O-M-O)活跃参与Cr3+、Pb2+、Mn2+和Cd2+多种重金属离子的络合作用。通过高温和十二烷基硫酸钠处理菌株进行质粒消除试验,未发现该菌株的抗镉性质与抗性质粒的存在相关。     

蜡状芽孢杆菌的分离培养与鉴定

从牛奶中分离到1株蜡状芽孢杆菌CO4-1,经生长特性培养、生化试验、灌服动物试验,证明该菌株具有营养要求低,生长快,合成蛋白能力强,耐高温,耐酸碱等特点;菌体及其产物对动物均安全,无任何不良反应;对肠道病原菌具有一定的抑制作用。     

蜡状芽孢杆菌深圳菌株754-1产磷酯酶C培养条件的优化研究

通过单因素试验和正交试验,以蜡状芽孢杆菌(Bacilus cereus)深圳菌株 754-1产磷酯酶C(PLC)在卵黄平板上形成的乳白色晕圈的直径大小作为考察指标,对影响754-1产PLC的各因素进行了初步研究.结果表明,754-1产PLC的最佳培养条件为:蛋白胨1.0%,牛肉膏0.3%,酵母膏0.2%,NaCl 0.5%,Zn2+0.1 mmol·L-1,卵黄5.0%,接种量0.5%,发酵温度32℃,培养时间12 h.     

培养条件对Bacillus cereus 357生长及产生拮抗物质的影响

为了了解Bacillus cereus 357菌株生长及产生拮抗物质的影响因子,对Bacillus cereus 357菌株在KMB、PDA、LB、Davis、SMA和淡薄培养基等6种培养基上的生长及产生的拮抗物质的生物活性进行检测和比较.结果发现在这六种培养基中,KMB培养基最适合该菌株的生长,所产生的拮抗物质生物活性最大;但相同菌量相应的拮抗物质生物活性却以Davis培养基为最高;同时研究发现利用液体培养基培养与固体培养基培养对拮抗物质的产生没有影响.另外,在不同温度、不同pH值等培养条件下对B.cereus 357菌株的生长及产生的拮抗物质活性进行测定,结果表明在37℃和pH 7.5的培养条件下,该菌株产生的拮抗物质抑菌活性最大.生长曲线分析表明该菌株在对数生长终期达到最大生物活性.为今后大量制备Bacillus cereus 357产生的拮抗物质和进行生长条件的深入分析提供了实验基础.     

溶菌酶快速诱导蜡样芽孢杆菌L型的研究

[目的]研究溶菌酶诱导蜡样芽孢杆菌L型的技术条件。[方法]利用溶菌酶诱导蜡样芽孢杆菌L型,观察其形成、形态、生长及其对渗透压的敏感性等特性。[结果]在培养基中加入2 mg/ml的溶菌酶能够较好地诱导蜡样芽孢杆菌L型的产生,通过连续的培养获得了稳定的L型蜡样芽孢杆菌。L型蜡样芽孢杆菌呈球状,革兰氏染色阴性,对渗透压敏感。[结论]确定了蜡样芽孢杆菌溶菌酶法诱导L型的最佳浓度。     

Differentiation Between Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus by 16S rDNA-PCR and ERIC-PCR

16S rDNA and ERIC （Enterobacteia Repetitive Intergenic Consensus Sequences） based on PCR method were tested for the effectiveness of the differentiation of B. thuringiensis and B. cereus. 16S rDNA-PCR primers were designed based on the sequence difference in variable regions of B. cereus 16S rDNA and B. thuringiensis 16S rDNA, 16S rDNA-PCR showed no obvious difference between B. cereus and B. thuringiensis. The only difference was that one 1600-bp amplificon could be obtained from all the three B. Cereus strains, and none amplificon from any B. thuringiensis strains. ERIC was optimized based on previous reports. The genonlic DNA was used for the template of ER1C-PCR, and the following DNA fingerprints were analyzed by the agarose gel electrophoresis. The results showed that DNA fingerprint of three B. thuringiensis strains had a unique amplicon less than 100-bp, while DNA fingerprint of three B. cereus＂ strains had none. Moreover, DNA fingerprint of B. cereus showed a 700-bp amplicon, but didn＇t have any DNA fingerprints ofB. thuringiensis genome. Therefore, ERIC-PCR technique should be able to be used for the differentiation of B. thuringiensis and B. cereus.     

基于Bacillus cereus 3BS1的生物肥研究

[目的]本研究主要目的是探索海藻酸钠细菌颗粒生物肥最佳基材配方,对此种生物肥在贮存及应用中的性质及土壤中降解特性进行研究。[方法]生物肥最佳包埋基材的筛选,细菌计数法研究生物肥在4℃和室温条件下贮存时细菌活性的变化情况,通过生物肥直径变化研究其在土壤中的生物降解情况。[结果]研究表明,基材配方为1.5%海藻酸钠+0.5%大米粉的生物肥,能够达到最佳构形及最高细菌活性,与未加入大米粉的1.5%纯海藻酸盐基材相比,细菌包含率最高,为112.3%,且在贮存过程中能够保持细菌的高活性。此生物肥埋在土壤中3 cm深时降解最快,11 d可完全降解。[结论]获得一种低成本、实用、高效的生物肥,基材最佳配方为1.5%海藻酸钠+0.5%大米粉。     

应用PCR方法检测蜡样芽胞杆菌的研究

采用PCR技术,通过扩增蜡样芽胞杆菌的gyrB基因来实现对蜡样芽胞杆菌的快速检测。结果表明,以gyrB为目的基因设计引物建立的PCR检测方法能特异性地扩增出蜡样芽胞杆菌,且与其他芽胞杆菌菌株均无交叉反应,其检测敏感性可达9 cfu/mL,能够应用于蜡样芽胞杆菌的鉴定。     

抗姜瘟病菌芽孢杆菌的诱变改良

为改良拮抗姜瘟病菌的芽孢杆菌,从未发病土壤分离得到1株对茄科雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)等8种病原菌具有较强拮抗能力的蜡状芽孢杆菌菌株L1.为进一步改进该菌的拮抗活性,采用紫外线(UV)、甲基磺酸乙酯(EMS)、吖啶橙等诱变因素对L1菌株进行诱变改良.结果表明:改良后菌株的拮抗性能显著提高,其中菌株EMS-2和UL-1的拮抗蛋白浓度分别比L1菌株提高30.38%和29.18%,其差异均达极显著水平;L1对UV照射十分敏感,尤其在前60 s,而90 s的照射处理正突变率最高,达24.8%;吖啶橙处理L1后,没有筛选到发生正突变的菌株;L1在EMS处理80 min后,致死率达到90%左右,因此,为大量获取正突变菌株,应采用较低剂量的EMS(0.16 mol?mL-1)、长时间处理程序(60 min为宜).     

微囊化蜡样芽孢杆菌的喷雾干燥工艺优化

[目的]提高蜡样芽孢杆菌在压力喷雾干燥过程中的存活率,优化喷雾干燥工艺。[方法]以微囊化的蜡样芽孢杆菌为材料,考察进风温度、进料流量、料液比、喷枪孔径等对喷雾细胞存活数的影响。[结果]当进风温度为140℃,进料流量为1.5 t/h,料液比为1∶5,喷枪孔径为2.5 mm时,蜡样芽孢杆菌的存活率最高,达81%。[结论]该研究确定了蜡样芽孢杆菌的最佳喷雾干燥工艺条件。     

1株益生蜡样芽孢杆菌发酵培养基优化研究

[目的]通过优化蜡样芽孢杆菌的发酵培养基,提高蜡样芽孢杆菌的生物量。[方法]在初始发酵培养基的基础上,通过单因素试验和正交试验确定蜡样芽孢杆菌发酵培养基的最适碳氮源和碳氮比。[结果]优化后的发酵培养基为:葡萄糖15.00 g/L,可溶性淀粉40.00 g/L,蛋白胨10.00 g/L,玉米浆干粉30.00 g/L,硫酸铵3.00 g/L,磷酸氢二钾5.00 g/L,磷酸二氢钠5.00 g/L,硫酸镁1.25 g/L,硫酸锰0.60 g/L,氯化钙2.00 g/L。优化后蜡样芽孢杆菌在50 L不锈钢发酵罐中的发酵液活菌数达1.6×1010cfu/m L,较优化前提高了1个数量级。[结论]优化后的蜡样芽孢杆菌发酵培养基大大提高了该菌的生物量,为工业化放大生产提供了参考。     

产异甘露聚糖酶菌株的复合诱变

利用紫外线照射法、硫酸二乙酯(DES)法、60Co-γ射线辐照法对蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)SKS4进行复合诱变处理,筛选到了1株产异甘露聚糖酶的蜡样芽孢杆菌SKS4360,使其发酵液酶活从1004U/mL提高到2026.6U/ML,而且其酶活力表现稳定.