不同家畜品种毛绒角蛋白组分与相对含量分析

为了解不同家畜品种毛绒角蛋白的组成与差异,选择细毛羊、绒山羊、粗毛羊、羊驼、骆驼和牦牛的毛绒,利用还原法提取毛绒角蛋白,电泳分析其角蛋白的组分和相对百分含量。结果显示:细毛羊、绒山羊和粗毛羊都检出7种角蛋白组分,不同品种细毛羊角蛋白组分含量比较一致,低硫蛋白与高硫蛋白比例最大为3. 22,最小为2. 31;不同品种绒山羊角蛋白组分的相对百分含量差异较大,低硫蛋白与高硫蛋白比例最大为4. 18,最小为1. 52;不同品种粗毛羊角蛋白组分的相对百分含量差异也较大,低硫蛋白与高硫蛋白比例最大为6. 46,最小为3. 44;安哥拉山羊和羊驼分别检出5种和3种角蛋白组分;牦牛、骆驼都检出4种角蛋白组分,但是角蛋白组分的分子量大小不同。结果表明:毛发角蛋白组分和相对含量具有品种特异性,可为衣物中纤维的来源鉴别提供依据。     

采用3种光谱技术鉴别天然靛蓝染色蚕丝织物

探究采用近红外漫反射光谱、荧光光谱和拉曼光谱技术,建立快速、准确鉴别天然靛蓝与合成靛蓝染色蚕丝织物的方法。在近红外漫反射光谱测试中,天然靛蓝染色蚕丝织物在940 nm、1 172 nm处有特征反射峰,而合成靛蓝染色蚕丝织物在940 nm、1 042 nm和1 240 nm处有特征反射峰;在拉曼光谱测试中,天然靛蓝染色蚕丝织物在1 573 cm~(-1)和189 cm~(-1)处有明显特征峰,而合成靛蓝染色蚕丝织物仅在1 573 cm~(-1)处有吸收峰;天然靛蓝染色蚕丝织物萃取液在发射波长为495 nm处有明显的荧光峰,而合成靛蓝染色蚕丝织物萃取液却没有出现荧光峰。研究结果表明,天然靛蓝染色蚕丝织物与合成靛蓝染色蚕丝织物或其萃取液在上述3种光谱中都存在可用于区分的特征峰,因此可通过这3种光谱技术快速、准确鉴别天然靛蓝染色蚕丝织物。     

绵羊高硫角蛋白启动子表达活性研究

角蛋白是羊毛主要结构蛋白,为了筛选在绵羊毛囊中具有高表达活性高硫角蛋白的内源启动子,本研究以绵羊基因组为模板,克隆得到高硫角蛋白基因启动子B2C,将B2C与去除CMV启动子的pAcGFP1-N1载体连接,构建了重组真核表达载体。采用阳离子脂质体法转染传代培养的绵羊成纤维细胞和去除透明带的小鼠4细胞期胚,分析其表达活性。结果表明,转染后48 h,在蓝光激发条件下可以检测到绵羊成纤维细胞核内及核周围绿色荧光蛋白的高表达,转染72 h后,在核内表达减弱,而细胞质内表达增加;此外,虽然利用病毒启动子构建的GFP表达载体能够在小鼠的早期胚胎细胞中表达,但由B2C启动子与GFP构建的表达载体转染小鼠早期胚胎后,未观察到绿色荧光,表明B2C启动子在绵羊成纤维细胞中具有表达活性,但不能在小鼠早期胚胎中表达。     

还原法从废弃兔毛中提取角蛋白的研究

废弃兔毛是一种重要、廉价的角蛋白资源之一,具有极高的研究利用价值。采用还原C法从兔毛纤维中提取角蛋白,并对制备方法进行了优化。在最佳提取条件:兔毛、尿素和亚硫酸氢钠的质量比为1:20:10,反应温度为95℃,反应时间为4h时,溶解液通过透析、冷冻干燥后,得到的角蛋白产率为58.43%。     

家兔葡葡球菌病血清诊断的研究 Ⅱ.免疫扩散抗原活性组分的测定

乙醇抽提抗原经 SDS-PAGE 测定,分子量约为12kd;扫描图与 SDS-PAGE 蛋白区带位置一致;该组分具有抗原活性.     

角蛋白降解菌分离、鉴定及其降解机制研究

实验旨在筛选具有高效角蛋白水解活性的微生物,并对其降解羽毛角蛋白机制进行研究,为提高角蛋白生物降解率提供理论指导。采用透明圈和完整羽毛降解相结合的方法,从废弃羽毛中筛选角蛋白降解菌,并进一步研究其羽毛角蛋白降解过程。获得一株可高效降解角蛋白菌株,基于形态观察和16S rDNA分子鉴定,该菌被命名为Bacillus licheniformis CP-7,其5 d可将天然完整羽毛完全降解。CP-7发酵过程产生大量巯基、可溶性蛋白和亚硫酸盐。分离发酵48 h菌株胞内、胞外粗酶液,发现胞外酶液具有较高的角蛋白酶活性,而胞内酶液具有一定二硫键还原酶活性。胞内酶液能够极显著地促进胞外酶液水解角蛋白活性(P<0.01),但对酪蛋白水解活性无影响(P>0.05)。筛选菌CP-7为具有高二硫键还原能力的角蛋白降解菌,二硫键还原酶可能是高效降解羽毛角蛋白的关键。     

鹿科动物毛角蛋白组分的比较研究

角蛋白是动物毛发的主要结构蛋白,由3或7条多肽链以α螺旋扭曲成纤维束。不同种属的动物毛角蛋白组分不同。因此,对不同动物毛角蛋白组分进行研究用于动物种属差异鉴别、亲缘关系以及分类学方面已引起人们的重视。池田典昭等人(1986)、Marshall(1987)、严品华等人(1989)用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)分别对某些动物毛发角蛋白做了比较分析。关于鹿科动物毛发角蛋白组分研究尚未见报道。本文采用SDS-PAGE     

绵羊毛发角蛋白结合蛋白启动子的克隆与活性分析

以绵羊基因组DNA为模板克隆获得绵羊角蛋白结合蛋白基因KAP6.1启动子。将KAP6.1启动子插入到切除了CMV启动子的pAcGFP1-N1质粒中,构建了重组真核表达载体,并采用脂质体法转染传代培养绵羊皮肤成纤维细胞并检测其表达活性。结果显示：（1）KAP6.1启动子序列大小为830 bp,与GenBank上绵羊角蛋白结合蛋白的参照序列（M95719）有99.64%的同源性;与M95719相比,KAP6.1在349位点、726位点和246位点上分别存在1个C缺失、1个转换（G代替A）和1个颠换（A代替T）;在438位点上具有1个依赖DNA的RNA聚合酶结合位点TATA box,但未发现具有依赖DNA的RNA聚合酶识别位点CAAT box;（2）转染24 h后,在蓝光激发下检测到细胞核附近有绿色荧光蛋白的高表达,并在48 h后逐渐减弱,而细胞质内绿色荧光蛋白的表达量增加。这一结果表明,KAP6.1启动子在绵羊皮肤成纤维细胞的表达上可能具有特异性。     

高效液相色谱法检查不同厂家黄霉素中黄霉素A的相对量

用高效液相色谱法检查不同厂家生产的黄霉素标准品(相当于原料药)和预混剂中黄霉素A的相对量,色谱柱为YMC-Pack ODS-A C_(18)S-5μm,12nm,250mm×4.6mm,流动相为0.2％甲酸铵溶液(pH 4.9)∶乙腈(55∶45),检测波长258nm,流速0.5mL/min,进样量10μL。黄霉素组分1、组分2、组分3和组分4峰对黄霉素A峰的相对保留时间分别约为0.9、1.1、1.2、1.3。本方法操作简便,分离度好,结果准确可靠。     

副鸡禽杆菌荚膜多糖的提取及HPLC分析

为了研究副鸡禽杆菌的荚膜多糖的构成及生物学活性,本试验提取了B型副鸡禽杆菌的荚膜多糖,测定其含量,并分析单糖组分及分子量大小。用乙醇沉淀法在细菌培养液上清中提取了荚膜多糖,利用25%乙醇去核酸、苯酚抽提去蛋白,最后以苯酚-硫酸法测定其含量,高效液相色谱(HPLC)分析其组分及分子量大小。结果显示,每升菌液可以抽提得到荚膜多糖85mg,含量为59.6%,该多糖主要由L-鼠李糖、D-木糖、D-葡萄糖等单糖组成,总分子量约209Ku。     

福建地区三种蜂蜜的荧光特性研究

本文研究了福建地区三种蜂蜜(龙眼蜜、荔枝蜜、八叶五加蜜)的稳态荧光光谱,瞬态荧光寿命以及荧光量子产率。稳态荧光光谱研究表明,龙眼蜜和荔枝蜜显示出单一荧光发射峰,其最大发射波长分别为440 nm和430 nm,最大激发波长分别为340 nm和335 nm。八叶五加蜜则显示出双荧光发射峰,发射位置位于363 nm和460 nm,最大激发波长分别位于330 nm和350 nm。瞬态荧光寿命研究显示三种蜂蜜的四个荧光发射峰之间均存在显著差别,其中龙眼蜜和荔枝蜜的荧光寿命分别为8.20±0.13 ns和7.71±0.09 ns,八叶五加蜜的两个荧光发射峰则分别为3.13±0.66 ps和11.20±0.08 ns。量子产率的测定结果显示八叶五加蜜为5.80±0.35%,龙眼蜜和荔枝蜜分别为3.93±0.42%和3.07±0.15%。以上结果表明,不同的蜜种在稳态荧光光谱、荧光寿命、荧光量子产率三个主要的荧光性质上均表现出较大的差异,结合这三个荧光参数有望为蜂蜜的植物源性溯源提供更为丰富、稳定的信息。     

高效液相色谱法检测鸡肉组织中氟喹诺酮类药物

对高效液相色谱法检测鸡肉中的氟喹诺酮类违禁药物进行探讨,试样经过匀浆后,用磷酸盐缓冲溶液提取,C18萃取柱净化,流动相洗脱后,用高效液相色谱-荧光检测器测定,激发波长280 nm,在发射波长450 nm处测定其吸光度,同条件下测定氟喹诺酮类药物标准品相对应的峰面积响应值,氟喹诺酮含量与吸光度值在一定质量浓度范围内成正比,试样与标准品单标法比较定量。结果表明:此方法具有操作简单、回收率稳定和检测时间短等优点;标准品峰面积响应值稳定,变异系数(CV值)≤0.1%;环丙沙星的回收率为82%~97%,回收率标准偏差(RSD)≤2.55;达氟沙星回收率为92%~101%,RSD≤3.11;恩诺沙星回收率为85%~100%,RSD≤2.61;沙拉沙星回收率为79%~97%,RSD≤2.41。     

水溶性量子点标记空肠弯曲菌黏附蛋白的制备

为建立荧光免疫分析方法对空肠弯曲菌的快速检测,利用基因工程技术构建pET32a-peb1A原核表达载体,并对重组蛋白进行了抗原性分析。利用共价偶联的方法,在水溶性缩合剂EDC和催化剂DMAP的作用下,使水溶性量子点的羧基与重组蛋白的羟基结合,发生酯化反应,并通过磷酸盐缓冲溶液进行透析纯化得到目标偶联物。采用荧光分光光度法对偶联物进行表征,并利用荧光偏振免疫分析方法对空肠弯曲菌阳性血清进行检测。结果表明:空肠弯曲菌黏附蛋白PEB1A具有良好的抗原性,且量子点标记空肠弯曲菌黏附蛋白前后的荧光光谱发射峰由595 nm偏移至592 nm。示踪物与阳性血清混合前后荧光偏振值变化△80mP。由此证明,空肠弯曲菌黏附蛋白成功偶联到水溶性量子点上,且结构未受到破坏。通过荧光偏振法实现了对空肠弯曲菌的检测,所制备的示踪物具有良好的特异性,为建立荧光疫分析方法对空肠弯曲菌的快速检测提供依据。     

硫酸水解鹅毛杆制取氨基酸蛋白质溶液

羽毛是一种富含高蛋白的物质,它的下端角质部分蛋白质含量高达89%,羽杆的白色部分蛋白质含量约为68%,羽毛含蛋白质约为88%。这种蛋白质主要由硬蛋白类中的角蛋白组成。来经加工的羽毛蛋白不溶解于水,畜禽也难以消化吸收,其原因是羽毛蛋白中胱氨酸的二硫化物键阻碍了蛋白水解酶的作用。因此,为使禽畜能消化羽毛蛋白,必须破坏此化学键。羽毛饲料加工方法有高压加热水解法、酶处理法、化学法、膨化法。本试验采用稀硫酸水解鹅毛杆制取粗氨基酸蛋白质溶液,     

HPLC法同时测定磺胺二甲嘧啶含量和泰乐菌素组分

采用高效液相色谱法同时测定磺胺二甲嘧啶和泰乐菌素组分含量,采用C18(4.6×250 mm,5μm)色谱柱;以2 mol/L高氯酸钠溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0 m L/min;检测波长为280 nm。结果表明磺胺二甲嘧啶在10~200μg/m L范围内具有良好的线性,相关系数为0.9997,检出限为0.05μg/m L,定量限为0.15μg/m L,低、中、高3个浓度加标的平均回收率为99.7%~100.1%,RSD为0.3%~0.5%,泰乐菌素D峰与A峰的分离度≥3.2;泰乐菌素C峰与磺胺二甲嘧啶分离度≥30,该方法操作简便、准确、专属性强。     

渭北果园绿肥腐解溶解性有机物的释放特征

采用荧光激发–发射光谱和平行因子分析(EEM-PARAFAC)相结合的方法,分析了渭北黄土高原生草物质腐解过程中溶解性有机物(DOM)含量、组分和光谱特征,以期为果园生草翻压腐解和果园土壤管理评价提供数据和理论支持。结果表明,不同生草物质腐解的过程中,腐解速率大小为白三叶(Trifolium repens) (WC) > 小冠花(Securigera varia Lassenn) (CV) > 鸡脚草(Dactylis glomerata) (OG)。EEM-PARAFAC将各生草物质腐解的DOM荧光主要组分鉴定为1个类腐殖酸组分(C1)和2个类蛋白组分(C2、C3);各生草物质腐解的过程中类蛋白质组分的荧光强度远高于类腐殖酸组分,且C2组分占主导地位。豆科植物白三叶总荧光强度的值高于小冠花和鸡脚草处理;小冠花处理在腐解的过程中微生物源为DOM的主要来源,而白三叶和鸡脚草是混合来源,即陆生植物腐殖质和微生物源。各生草物质腐殖化系数(HIX)表现为小冠花 > 鸡脚草 > 白三叶;紫外指标(SUVA254)表现为鸡脚草 >小冠花 > 白三叶,且随着腐解天数延长依次增大。综合溶解性有机物含量、组分及光谱特征的变化以及主成分分析的结果,在渭北旱塬,豆科植物白三叶作为腐解材料时更易于分解和释放溶解性有机养分。     

一种快速高效制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法

家蚕微孢子虫孢子壁坚厚不易破碎,并对许多化学物质有很强的抵抗性,使用常规的核酸和蛋白抽提方法效果不够理想。研究建立玻璃珠破碎法快速制备家蚕微孢子虫基因组DNA和总蛋白的方法,采用琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE分析所得DNA的完整性和所得总蛋白的差异性,并对提取蛋白进行双向电泳试验。结果表明:使用玻璃珠破碎法对微孢子虫孢子壁的破碎率可达到90%以上,基因组DNA得率约为7.65 fg/粒,总蛋白得率约为788.3 fg/粒,均显著高于常用的发芽法和液氮冻融研磨法的得率。双向电泳结果显示玻璃珠破碎法能有效提取家蚕微孢子虫总蛋白,经考马斯亮蓝染色可检测到约350个蛋白点,蛋白信息丰富,可进一步用于质谱分析。     

饲料中氟喹诺酮类药物检测方法研究

建立高效液相色谱—荧光检测法同时测定饲料中4种氟喹诺酮类药物的方法。样品经1%甲酸甲醇提取后,C18柱分离,荧光检测器检测,激发波长280 nm,发射波长450 nm,流动相为0.05 mol/L磷酸(用三乙胺调节pH2.4)-乙腈=85:15(v/v)。3种氟喹诺酮类药物(环丙沙星、恩诺沙星和沙拉沙星)在0.05~50μg/mL质量浓度范围内,达氟沙星在0.01~10μg/mL质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均>0.999 6,方法精密度为1.81%~2.11%(迁移时间)和0.5%~0.92%(峰面积),在空白样品中进行3个质量浓度水平的添加,平均回收率在82.41%~103.17%,批内变异系数在0.33%~2.79%。结果表明:该法操作简便,快速准确,适合饲料中氟喹诺酮类药物的检测。     

家蚕蛹到蛾期蛋白SDS—PAGE电泳观察

蛹到蛾期蛋白SDS-PAGE电泳约有17条左右的蛋白带,蛋白组分有一定变化。主要观察到:1)分子量约为220kD的蛋白带在化蛹第2天出现,并随着蛹期发育至羽化,其浓度不断的增加。2)分子量约为70kD的蛋白带,化蛹第1天是一条带,第2天至羽化其蛋白组分有变化。3)分子量约为29kD的蛋白带随着蛹期发育到羽化,浓度逐渐减弱。     

EP2受体和FP受体对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的影响

采用免疫荧光法,使用角蛋白鉴定奶牛输卵管上皮细胞;采用荧光定量PCR法检测奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白mRNA的表达;采用Wsetern blot法检测了奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达。结果显示:加入butaprost(EP2受体激动剂,10~(-6) mol/L)能促进输卵管蛋白的表达,加入fluprostenol(FP受体激动剂,10~(-6) mol/L)能抑制输卵管蛋白的表达。结果表明:PGE2在奶牛输卵管上通过激活EP2受体上调输卵管蛋白的表达,PGF2α通过激活FP受体下调输卵管蛋白的表达。