利用一步法RT-PCR检测柑橘裂皮病类病毒

 柑橘裂皮病(CEVd) 是限制柑橘产量的一种重要类病毒病害, 国内外已经建立了多种方法检测该病害的病原。本研究初步建立了快速灵敏检测CEVd的一步法RT-PCR技术。经过与生物学鉴定和双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(sPAGE) 方法的比较检测, 表明该RT-PCR方法检测周期短, 灵敏度高, 有利于对类病毒在春季和冬季浓度低时进行快速准确的检测。应用该技术对大量田间寄主进行了检测。     

柑橘黄龙病、裂皮病和衰退病病原的多重RT-PCR检测

 建立了一种同时检测柑橘黄龙病病原类细菌(Candidatus L iberibacter asiaticus, HLB) 、柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis viroid, CEVd) 、柑橘衰退病病毒(Citrus tristeza virus, CTV) 的多重RT-PCR技术体系。运用根据3 种病原核苷酸保守区序列设计的特异性引物, 成功的对同一样品中的HLB、CEVd、CTV进行多重RT2PCR扩增, 得到1 160 bp、371 bp、273 bp 3条特异性大小与试验设计相符的条带。就影响多重PCR 的主要因素引物浓度和退火温度进行了一系列优化, 建立了能同时检测HLB、CEVd、CTV的多重RT2PCR技术体系。该体系最低能从10 pg总RNA中检测出黄龙病类细菌和柑橘裂皮类病毒, 从1 pg总RNA中检测到柑橘衰退病毒。对采自田间37份材料的实际检测表明: 存在两种或3种病原的复合侵染。     

柑桔裂皮类病毒RT-PCR检测体系的建立及优化

柑桔裂皮类病毒(CEVd)是严重危害柑桔生产的一种世界性病害.本研究以感染CEVd的柑桔叶片为材料,提取总RNA,采用RT-PCR进行检测,并对PCR反应体系进行优化.结果表明:rTaqDNA聚合酶和Hotstart TaqDNA聚合酶能有效排除非特异性带的干扰;使用PCR增强剂,能有效解决CEVd非特异性带的干扰,提高了PCR的扩增效率.     

柑桔裂皮类病毒研究进展

<正>柑桔裂皮病是柑桔的主要病害之一,严重影响世界范围内柑桔的生产。起初认为柑桔裂皮病是由病毒引起的,但是进一步的研究表明该病的病原是类病毒。柑桔裂皮类病毒(citrusexocortis viroid,CEVd)属于马铃薯纺锤块茎类病毒属(Pospiviroid),大小一般为370-375nt(核苷酸),1994年Semancik等报道了一个大小为463 nt的该类病毒突变株,具有棍棒状二级结构。它的热钝化温度高,110℃下保持10-15分钟,仍不丧失其侵染力,到140℃热致死点时,感染性才呈线性下降。     

一步法RT-PCR检测柑橘鳞皮病毒

柑橘鳞皮病是一种极具破坏性的柑橘病害,广泛分布于南美及地中海地区。我国目前缺乏对该病害的快速检测技术。以柑橘鳞皮病毒(CPV)的外壳蛋白基因(CPG)为靶标,初步建立了一步法RT-PCR快速检测体系,扩增产物与NCBI数据库中已知CPVCPG的核苷酸序列进行比对,2者序列间同源性超过99%。     

柑橘黄龙病和衰退病的同步PCR和RT-PCR检测

柑橘黄龙病(HLB)和衰退病(CTV)是2种危害严重的世界性柑橘病害,国内外对其病原检测的研究相当多。研究建立了同时检测HLB和CTV的多重RT-PCR体系,从影响多重RT-PCR扩增的引物浓度、Mg2+浓度、Taq酶浓度、dNTPs浓度、退火温度等方面进行体系优化。结果表明,多重PCR反应的退火温度应优先考虑退火温度高的引物,退火温度高的引物所需浓度要大于相应退火温度低的引物。该体系实现了DNA病原和RNA病原的统一检测,进一步体现了多重RT-PCR的优越性。     

柑桔裂皮类病毒江西分离物(CEVd-RJ)全长cDNA序列分析

运用RT-PCR技术对柑桔裂皮类病毒江西分离物CEVd-RJ的全长cDNA序列进行扩增、克隆,并对其片段进行序列测定。将获得的371bp的全长cDNA序列与GenBank登录的11个柑桔裂皮类病毒相应序列进行比对分析,结果发现CEVd-RJ与湖北分离物CEVd-HB的同源性为99.7%,与广东分离物CEVd-YC的同源性为90.8%,同国外9个分离物间的同源性在89.0%～98.6%之间。序列差异分析发现,CEVd-RJ的全长cDNA序列比CEVd-YC少一个碱基,有36个位点碱基发生了变化,与CEVd-HB只存在一个碱基位点的差异。     

茂谷柑裂皮病及防控技术

茂谷柑裂皮病使枳砧或枳橙砧的茂谷柑树势衰退,产量和品质下降,严重时落叶,花小、畸形,落花落果,植株死亡,是目前茂谷柑的主要病害之一。种植无病苗、规范操作,可以避免裂皮病的发生,对于已出现典型性症状的果园,如果发病率在3%左右,原则上把病株清除掉,如果超过10%,但仍有产量,暂时可以通过靠接技术延缓病情的发展,减少经济损失。     

苹果锈果类病毒新疆分离物的克隆和序列分析

利用自行设计的方法分离提取总RNA,通过一对特异引物,扩增出苹果锈果类病毒的全长片段,该片段通过回收、克隆和测序,结果发现该片段全长330bp,与已发表的NC_001340同源性为99.7%,仅在第126有一个碱基差异。由此证明该片段是苹果锈果类病毒的全长序列,进一步证明该反应体系能很好地用于苹果锈果类病毒的RT-PCR检测,为快速鉴定类病毒奠定了良好基础。     

6个甜樱桃品种ACO基因多态性的检测

乙烯在植物果实成熟过程中起着重要的作用,ACC合酶(1-aminocyclop ropane-1-carboxylic acid synthase,ACS)和ACC氧化酶(1-aminocyclop ropane-1-carboxylic acid oxidase,ACO)是植物乙烯生物合成途径的限速酶。通过DNA序列分析,以不同果实成熟期的6个甜樱桃品种(Prunus avium L.)为材料,检测ACO基因的多态性。获得甜樱桃ACO基因约1 kb,与桃(P.persica)ACO基因(GenBank登录号:AF532976)序列的同源性达96%,其预测的氨基酸序列与桃、梅(P.mume)、美洲李(P.armeniaca)和欧洲李(P.domestica)等ACO的氨基酸序列同源性超过95%。该片段包括4个外显子和4个内含子,内含子符合GT-AT规律。用DNAMAN进行多序列比对分别在内含子2和内含子4内发现2个多态性简单重复序列(AT)n。内含子2有3种片段:即(AT)6、(AT)7和(AT)8;内含子4有2种片段,即(AT)5和(AT)6,组合后共得到4种ACO单倍型。研究在甜樱桃ACO基因座上发现2个SSR标记,为进一步研究ACO基因多态性与果实成熟期相关性奠定基础。     

滴灌施肥对‘特罗维它’甜橙生长结果的影响

 以卡里佐枳橙砧‘特罗维它’甜橙为材料,以每年撒施10次肥料为对照,研究了年施肥总量一定,不同滴灌施肥频率（每年4次、10次和16次）对树体生长、产量和品质的影响。2002—2007年的结果显示,仅个别年份的处理与对照的树干粗度、树高和冠径存在显著差异以外,到试验结束时,不同滴灌施肥频率对树干粗度、树高和冠径大小无显著影响,滴灌施肥与对照间的树体生长无显著差异。滴灌施肥可显著提高果实产量,处理的累计产量比对照高29.4% ~ 36.5%;增加滴灌施肥频率无显著增产作用;滴灌施肥对果实品质无显著影响。建议碱性紫色土柑橘园滴灌施肥频率为每年4次。     

锦橙叶片镁质量分数与若干光合指标的相关性

选用缺镁程度不同的北碚447锦橙,采用缺镁黄化分级方法,测定不同级别叶片的镁质量分数、叶绿素各成分质量分数和净光合速率,探讨叶片镁质量分数与后2者的相关性。结果表明,不同缺镁级别叶片的镁质量分数存在极显著差异;叶片的叶绿素a(Chla)、叶绿素b(Chlb)、叶绿素(Chl)和类胡萝卜素(Car)与镁质量分数呈显著的线性正相关关系,而与Car/Chl呈显著的指数负相关关系;叶片镁质量分数与净光合速率(Pn)也呈极显著的正相关关系,二项式回归方程为:y=0.0135x2+0.0484x+0.056(n=100,R2=0.9255)。因此,可以采用缺镁黄化分级法对柑橘叶片缺镁程度作定性分析,并通过测定叶片的Chla质量分数、Chlb质量分数、Chl质量分数、Car质量分数、Car/Chl或Pn值,建立与镁质量分数相关的数学模型,定量换算得到叶片的镁质量分数。     

Production and evaluation of transgenic sweet orange (Citrus sinensis Osbeck) containing bivalent antibacterial peptide genes (Shiva A and Cecropin B) via a novel Agrobacterium-mediated transformation of mature axillary buds

Transgenic plants of Jincheng orange (Citrus sinensis Osbeck) and Newhall navel orange (C. sinensis Osbeck) containing antibacterial peptide genes Shiva A and Cecropin B were successfully obtained by a novel Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of the mature axillary buds. PCR and Southern blot analysis of the transgenic plants verified that the Shiva A and Cecropin B genes were integrated into the citrus genome. The transgenic plants began to blossom and bear fruit in the 2nd year after grafting on trifoliate orange (Poncirus trifoliata Raf) rootstock in greenhouse. Water-soluble extracts from transgenic citrus leaves exhibit in vitro suppressive effects on Xanthomonas axonopodis pv. citri, suggesting that the expressed products of Shiva A and Cecropin B in citrus retain their native antibacterial activities. Artificial inoculation in greenhouse and open field further indicates significantly increased resistance of transgenic plants to X. axonopodis pv. citri when compared with non-transgenic lines. No significant difference was found in the content of total soluble solids, total acidity, reduced sugar content and other fruit characteristics between transgenic and non-transgenic plants. In this present study, 11 transgenic lines were obtained from 40 transgenic lines, showing enhanced resistance to citrus canker disease.     

红肉脐橙果肉中主要色素的定性及色素含量的变化

 运用薄层层析法及二极管阵列检测器与高效液相色谱联用的方法, 确定红肉脐橙果肉中含有番茄红素和β- 胡萝卜素两种主要色素, 它们在液相色谱图中占总峰面积(计溶剂峰) 的73. 57 %～77. 78 % , 番茄红素占55. 36 %～58. 49 % , β- 胡萝卜素占18. 21 %～19. 93 %。利用反相高效液相色谱仪以及番茄红素和β- 胡萝卜素标样制作标准曲线, 测定果实发育及室温贮存过程中色素的变化动态, 结果表明, 该脐橙果肉中的番茄红素在成熟期含量最高, 达109. 67μg·g^-1DM, β- 胡萝卜素此时也达到最高值(15. 52μg·g^-1DM) ; 番茄红素的含量在采收后基本呈下降趋势(但采后30 d 有显著升高) , 说明果肉中存在类胡萝卜素采后合成的现象; 贮存4 个月后, 番茄红素含量急剧降低至最高时的1/ 10。     

Flavonol and phenolic acid composition of sweet cherries (cv. Lapins) produced on six different vegetative rootstocks

The effect of rootstock (‘MaxMa 14’, ‘Weiroot 13’, ‘PiKu 1’, ‘Weiroot 158’, ‘Gisela 5’ and ‘F12/1’) on phenolic acid and flavonol content of “Lapins” sweet cherry was investigated. Phenolic acids and flavonols were isolated from sweet cherries and analyzed by using reversed phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). The major phenolic acids in sweet cherries were neochlorogenic acid (18–50 mg kg⁻¹), chlorogenic acid (19–62 mg kg⁻¹) and p-coumaric acid derivatives (15–125 mg kg⁻¹). The amount of flavonol quercetin-3-rutinoside (8–37 mg kg⁻¹) was significant as well. There are significant variations in the phenolic compound content among sweet cherry fruits grown on trees grafted on different vegetative rootstocks. The significantly higher chlorogenic acid, neochlorogenic acid, p-coumaric derivative and quercetin-3-rutinoside contents were found in sweet cherry fruits grown on trees grafted on ‘Weiroot 13’ and ‘PiKu 1’ rootstocks. Sweet cherries produced on trees grafted on other rootstocks had significantly lower phenolic compound content.