银耳多糖浸泡肉鸡种蛋对肉鸡鸡胚尿囊膜血管生成、雏鸡生长性能和抗氧化性能的影响

旨在探讨银耳多糖溶液浸泡种蛋对肉鸡鸡胚尿囊膜血管生成、雏鸡生长性能和抗氧化性能的影响,为银耳多糖在禽类养殖中的应用提供一定理论依据。选取大小相近的132枚肉鸡种蛋,进行常规孵化,随机分为3组,每组44枚。在7～9胚龄时,每天用0、20、40 mg/kg银耳多糖溶液浸泡3组种蛋6 min,浸泡后继续孵化。13胚龄时,固定其尿囊膜,采用Image-Pro Plus 6.0图像分析软件测量鸡胚尿囊膜血管生成面积和小血管数量;14胚龄时采集鸡胚尿囊膜,测定鸡胚尿囊膜上血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor 2,FGF2)基因表达量;其余种蛋孵化至出雏并采集1日龄雏鸡血清及胸肌、肝脏、脑组织、小肠,并称质量。测定肝脏和血清抗氧化指标,及肝脏生长激素受体(growth hormone recepter, GHR)、胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor-1,IGF-1)的基因表达量。结果表明,与对照组相比,高、低浓度组银耳多糖溶液浸...     

鸡胚尿囊液量与种毒接种日龄及接种剂量的相关性研究

选择9、10、11日龄非免疫的罗曼蛋鸡胚各180个,随机分成9组,每组60个,分别接种NDVLasota种毒液0.05、0.10、0.20ml/个于鸡胚尿囊腔中。试验结果表明:所采收的尿囊液量与不同的接种剂量及接种日龄有很大的联系。     

贝氏隐孢子虫在鸡胚绒毛尿囊膜上发育过程的研究

 借助微分干涉显微镜（NIC）对贝氏隐孢子虫（C. Baileyi）在鸡胚CAM上的发育过程进行了研究。整个发育周期为96小时，全部发育过程包括：脱囊 — 裂殖生殖 — 配子生殖 — 孢子生殖，共4个阶段。裂殖生殖共产生3代裂殖体，在第Ⅰ、Ⅲ代裂殖体中分别含有8个裂殖子，在第Ⅱ代裂殖体中含有4个裂殖子。孢子化过程在CAM内胚层上皮细胞表面的带虫空泡内完成，并产生薄壁型和厚壁型两种卵囊。首次提出虫体具有群体寄生现象和同步发育特征；描述了C. Baileyi的运动期虫体离开母体和发育为滋养体的动态变化过程；应用由粪便中纯化的卵囊直接感染鸡胚成功 。并用37℃水浴脱囊，脱囊率达60%左右，表明温度对隐孢子虫的脱囊具有重要作用，无需胰酶和牛胆酸钠的参与。动物回归试验表明：C. Baileyi不能经胚胎途径造成感染，在CAM上发育的C. Baileyi卵囊对雏鸡具有较强的感染性。     

聚肌胞诱导鸡胚成纤维细胞和鸡胚及肉鸡抵抗新城疫病毒感染的研究

为探讨多聚核苷酸(聚肌胞)对新城疫病毒(NDV)的抑制作用,本研究通过聚肌胞对感染NDV的鸡胚成纤维细胞、SPF鸡胚和肉鸡进行了病毒抑制试验.结果显示:125和250 靏穖L-1的聚肌胞溶液能明显抑制100倍 TCID50的NDV在鸡胚成纤维细胞上的繁殖;5 mg·mL-1的聚肌胞溶液(每个胚0.1 mL)能明显抑制NDV在SPF鸡胚中的繁殖,减轻NDV对鸡胚生长的抑制作用,降低病毒血凝效价和鸡胚死亡数.聚肌胞对肉鸡抵抗NDV感染试验结果显示,肌肉注射0.01 mg·kg-1的聚肌胞注射液能明显提高治愈率和显效率.但反映细胞活性状态的中性红染色(D570值)随着聚肌胞浓度的增大而变小的结果说明,聚肌胞对鸡胚成纤维细胞的增殖有一定程度的抑制.     

氟哌酸对鸡胚和雏鸡毒性的观察

本文对10日龄鸡胚采用尿囊腔注射和3日龄雏鸡采用经口服一次给药的方法,观察了氟哌酸的急性毒性。结果表明,氟哌酸对鸡胚的最小致死剂量为320mg/kg胚重;对3日龄雏鸡的LD_(50)为4985±753.18mg/kg体重。对雏鸡的毒性主要表现为严重的胃肠道反应和中枢神经症状。蓄积毒性试验表明,本品无明显蓄积毒性,不影响雏鸡增重,未见其它不良反应。     

鸡胚成纤维细胞cDNA T7噬菌体表达文库的构建和鉴定

构建鸡胚成纤维细胞(CEF)T7噬菌体表达型cDNA文库,为筛选和研究CEF上病毒受体分子奠定基础。提取纯化CEF的mRNA,反转录合成双链cDNA,补平末端,连接EcoRⅠ/HindⅢ接头,双酶切,凝胶过滤层析除去小于400bp的cDNA片段,合成双链cDNA定向与T7噬菌体左右臂连接,体外包装后建成cDNA表达文库。测定文库大小、重组率,并以PCR鉴定cDNA插入片段的大小。结果表明,构建的cDNA文库滴度为2.2×107pfu/mL、扩增后滴度为3.5×1010pfu/mL,重组效率达98%、插入片段多在0.4～3kb之间,平均插入片段长约1.3kb。表明所建文库具有很高的质量,从而为筛选目的cDNA克隆奠定了基础。     

血管内皮生长因子对缺血性脑血管病血管生成的作用研究

血管内皮生长因子是血管特异性生长因子,有促进内皮细胞增生、转移,增加血管通透性和促进血管生成的作用.阐述了血管内皮生长因子的生物学特性和功能,以及血管内皮生长因子与缺血性脑血管病的关系.     

复方白头翁汤抑制鸡胚死亡的研究

随着人们饮食结构和消费水平的提高,禽肉生产得到了迅速发展。然而疫病的多发和药物的滥用,畜禽产品中药残问题以及对人类健康的影响越来越引起人们重视。中药制剂以其安全、绿色、药物残留低．具有提高动物机体免疫力、抗菌、抗病毒的作用,因而在中兽医中的应用日益广泛。     

鸡法氏囊中血管活性肠肽的表达特点

运用免疫组织化学超敏SP法对鸡不同生长阶段法氏囊中血管活性肠肽(VasoactiveIntestinal Peptide,VIP)的表达特点进行了研究。结果显示,法氏囊中VIP的表达范围广泛,涉及黏膜、黏膜下层和肌层,尤以黏膜上皮细胞和法氏囊小结髓质的表达为典型;随着日龄增加,黏膜上皮细胞VIP表达逐渐减弱,囊小结髓质一直保持较强的VIP阳性着色,囊小结皮髓质交界处上皮细胞层内VIP强阳性细胞有逐渐增多的趋势。鸡法氏囊中VIP阳性反应物质的广泛分布,提示法氏囊是神经系统以外产生VIP的又一个重要部位,法氏囊中的VIP可参与鸡免疫器官的功能调节,可作为一种信号分子介导神经内分泌系统和免疫系统间的相互作用。     

鸡肠道组织中血管活性肠肽的分布特点

为探讨鸡肠道组织中肽能神经支配的途径及其功能,运用免疫组织化学超敏SP法,对不同生长阶段鸡肠道中血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)的分布特点进行了研究。结果显示,肠壁中VIP的表达范围较为广泛,涉及黏膜上皮和固有层、肌层和外膜,尤以固有层和肌层最为典型;随着日龄增加,黏膜上皮间VIP阳性细胞数量逐渐增多;从肠道不同部位的分布来看,十二指肠中VIP的表达强于同时期其他部位,空肠中的表达次之,回肠和盲肠的表达相对较弱。黏膜固有层和肌层一直分布有染色较深的VIP阳性神经纤维,呈串珠状、细线状或膨体状。提示鸡肠道是产生VIP的又一个重要部位,肠道中的VIP可参与鸡免疫器官的功能调节,并作为一种信息分子介导神经内分泌系统和黏膜免疫系统之间的相互作用。     

鸭呼肠孤病毒人工感染SPF鸡胚的病理学研究

【目的】前人研究表明禽呼肠孤病毒可以经卵垂直传播, 禽呼肠孤病毒能引起雏禽的病毒性关节炎、呼吸道和肠道疾病、肝炎、心肌炎、免疫抑制等。以实验室分离的鸭呼肠孤病毒HP080421株为研究对象,该毒株引起病变主要以鸭软脚为主要临床特征,病鸭肝脏和脾脏表面有大量的白色坏死灶、肾脏肿大、出血为主要病变特点。研究了鸭呼肠孤病毒对鸡胚的致病性,通过雏鸡的病理变化特点,探讨所分离的HP080421鸭呼肠孤病毒株是否也可感染鸡群,旨在为鸡场鸭呼肠孤病毒感染的防控提供理论依据。【方法】运用华中农业大学兽医病理学实验室分离鉴定的HP080421株鸭呼肠孤病毒通过尿囊腔接种SPF鸡胚,建立SPF鸡胚鸭呼肠孤病毒感染模型,培养鸡胚至雏鸡出壳,运用临床观察、病理剖检、H.E染色和免疫组织化学染色等病理组织学检查方法,对鸭呼肠孤病毒感染SPF鸡胚进行病理学研究和致病性分析。【结果】研究发现病毒感染鸡胚孵化培养至22-23日龄均啄壳,但不能自主出壳,需人工剥壳。病理剖检可见雏鸡的肝脏、脾脏肿胀质脆,表面及实质分布有黄白色坏死灶;脑部组织肿胀,并可见出血点和出血斑。H.E染色的组织病理学观察可见接毒组雏鸡肝脏、脾脏的坏死灶周围有大量淋巴细胞浸润;法氏囊的滤泡髓质部和胸腺的髓质部淋巴细胞减少、缺失;脑、肺脏、肾脏存在不同程度的淤血、出血和水肿;免疫组织化学染色结果表明：病毒阳性信号主要分布于肝脏、脾脏、肺脏和法氏囊等器官,并且位于上皮细胞和巨噬细胞的细胞质和胞核内。【结论】鸭呼肠孤病毒株HP080421 能够在SPF鸡胚中复制增殖,并使雏鸡主要器官发生明显的病理变化,病理变化主要集中在肝脏和淋巴器官,因此鸭呼肠孤病毒可通过垂直传播感染鸡群,还可导致雏鸡免疫抑制。本研究通过SPF鸡胚鸭呼肠孤病毒感染模型,阐述了鸭呼肠孤病毒感染鸡群的可能性,因此在实际养殖过程中,养殖户要防止鸭呼肠孤病毒对鸡胚的污染,切断传播途径,以达到预防鸡群感染鸭呼肠孤病毒的目的。     

Screening for Monoclonal Antibodies Against the Membrane Proteins of Chicken Embryo Fibroblast Blocking the Infection of IBDV

This article aims to establish an efficient assay for screening monoclonal antibodies （McAbs） against the membrane proteins of chicken embryo fibroblast （CEF） for further studies of the cellular receptors of infectious bursal disease virus （IBDV）. McAbs against the membrane proteins of CEF were prepared by cell fusion. The monolayer CEF pre-incubated with the CEF-specific McAbs for 2 h were infected with IBDV and incubated with F22-EA6-biotin postinfection. Then, the cells were reacted with streptavidin-horseradish peroxidase （HRP） and finally stained by 3-amino-9-ethylcarbazole （AEC）. The inhibitive percentage of IBDV infection was calculated by counting the IBDV-infected cells to determine the inhibition efficiency of the CEF-specific McAbs. Compared with the control cells, the IBDV-infected cells pretreated with CEF-specific antibody significantly decreased; supernatant fluids of a total of 768 hybridomas were analyzed. The results of immunohistochemistry assays showed that six of them （1A5, 1H11, 2B 12, 3G1, 4D10, and 4B8） have the abilities to block the infection of IBDV to CEF, among which 4B8 can perfectly block the infection. This novel method is a sensitive and specific assay for the screening of CEF membrane protein-specific McAbs, which can block the infection of IBDV to CEF, and these McAbs can be used for the further investigations of the cellular receptors of IBDV.     

空气对X期鸡胚原壳发育的影响

通过抽蛋清、延长空气与胚胎接触时间的方法,就空气对X期鸡胚原壳发育的影响进行了研究.种蛋开孔0.5 cm,用蛋壳皿立即封口后进行孵化,X期鸡胚和3日龄鸡胚的孵化率呈现出极显著的差异(P＜0.01),X期鸡胚的孵化率为0,而3日龄鸡胚的孵化率高达80.0%.种蛋抽取1.0 mL蛋清后,X期鸡胚和3日龄鸡胚的孵化率也呈现出极显著的差异(P＜0.01),X期鸡胚的孵化率为31.3%,3日龄鸡胚的孵化率为81.3%.开孔后在空气中暴露2 h,然后封口孵化,结果孵化鸡胚的死亡明显加快(P＜0.01),7日龄鸡胚的存活率立即封口组为51.6%,2 h后封口组为25%.上述实验表明,开孔与空气接触、抽蛋清使蛋内进入空气或延长空气与X期鸡胚接触的时间都可使鸡胚在孵化过程中的死亡加快,从鸡胚死亡的幅度来看,空气可能是影响鸡胚体外培养的最重要因素.     

醋酸甲羟孕酮(MPA)人工抗原的合成与单克隆抗体的制备

为研制检测醋酸甲羟孕酮（MPA）的免疫学检测技术进行MPA单克隆抗体的制备与鉴定,研究分别采用碳二亚胺法、混合酸酐法将MPA偶联到牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）上制备免疫原（MPA—BSA）与包被原聊PA—OVA）,通过BALB／c小鼠免疫、细胞融合、间接ELISA和阻断ELISA筛选、有限稀释法克隆亚克隆获得分泌MPA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、敏感性、亚类及稳定性进行鉴定。结果表明：成功合成2种人工抗原,MPA与BSA、OVA的偶联比分别为8：1、12：1;获得1株稳定分泌MPA单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞株2G4H9,McAb腹水的间接ELISA效价为1：8×10^4,IgG1亚类,K型轻链,腹水抗体IC50为5．0ng·mL^-1,与甲地孕酮、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和己烯雌酚交叉反应率为12．5％、〈0．01％、〈0．01％和〈0．01％。作者认为：MPA单克隆抗体特异性和敏感性良好,杂交瘤细胞株性能稳定,为进一步研究MPA相关免疫学分析技术奠定了基础。     

减量使用静松灵麻醉剂在山羊胚胎移植手术中效果的观察

应用静松灵麻醉制剂0.4 mg·kg-1对300只健康山羊肌肉注射,记录麻醉的起效时间与麻醉时间,以观察减量使用静松灵麻醉制剂在山羊胚胎移植手术中的麻醉效果.结果表明,0.4 mg· kg-1的注射剂量可以满足胚胎移植手术的需要,并且使用安全,在300只山羊的手术中无一例死亡.     

鸡胚体外培养影响因素的研究

以种鸡蛋为实验材料 ,分别在孵化 0、3和 6d后 ,抽取 1mL蛋清 ,用石蜡或自配封口胶封闭针孔 ,以探索抽蛋清和不同封口方法对不同日龄鸡胚发育的影响。实验结果表明 ,抽取蛋清对 3日龄鸡胚的发育和孵出的影响较小 (P <0 .0 1) ,孵化率达 76 .3% ,而对 0日龄、6日龄鸡胚发育和孵出的影响较大 ,孵化率只有 30 .6 %和 4 1.2 %。与石蜡封口相比 ,自配封口胶封口组的鸡胚孵化率明显提高 (P <0 .0 1) ,自配封口胶封口组的鸡胚孵化率为 76 .3% ,石蜡封口组的鸡胚孵化率只有 2 1.4 %。     

鸡传染性法氏囊病胚胎免疫研究

用ＩＢＤＢＪ８３６免疫接种１８ｄ龄鸡胚，雏鸡在１，３，６周龄用ＩＢＤ强毒攻毒，获得显著保护，其保护率分别为６６．７％，８７．５％和１００％，且早期免疫保护率高于雏鸡免疫。ＩＢＤ胚胎免疫安全，不影响孵化率和健雏率，对新城疫苗的免疫应答没有抑制作用。     

细菌毒力与细菌数量对鸡胚致死率的影响

将不同来源的鸡大肠杆菌梯度稀释后进行鸡胚致死率试验,探讨细菌毒力与细菌数量对鸡胚致死率的影响。结果表明,大肠杆菌菌数在100~1 000 CFU范围内,菌数与其致病力间相关性不显著(P0.05),鸡胚死亡率表现为菌株毒力的影响。     

酸雨胁迫对番茄叶片细胞膜透性的影响

采用番茄品种‘倍盈’为材料,运用人工模拟酸雨研究不同强度酸雨(pH3.0、pH3.5、pH5.6)胁迫对‘倍盈’叶片细胞质膜透性的影响。结果表明:酸雨处理使番茄叶片超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)的含量及细胞质膜透性显著上升,可溶性蛋白的含量显著下降。胁迫停止后SOD的活性逐渐下降,停止胁迫后20d,pH3.0与pH3.5处理均显著低于pH5.6(CK);可溶性蛋白的含量pH3.0与pH3.5多呈现波动性的上升,至停止胁迫后15d,pH3.0、pH3.5与pH5.6处理之间无显著差异。丙二醛的含量则呈现波动式上升,停止胁迫后20d,pH3.5与pH5.6差异不显著,而pH3.0显著高于pH5.6;细胞质膜透性pH3.5表现先上升后下降的现象,pH3.0表现下降趋势的现象,但至停止胁迫后20d,pH3.0、pH3.5与pH5.6之间无显著差异;pH值3.0和pH值3.5的叶片伤害率均随时间的延长而呈现下降的趋势,至停止胁迫后10d以后基本处于一个较稳定的水平;从番茄植株的外部形态来看,pH3.0酸雨处理在胁迫停止后20d,仍呈现叶片黄化、枯萎状态,说明pH3.0酸雨胁迫产生不可逆的伤害;而pH3.5酸雨胁迫处理下‘倍盈’表现出较好的自我修复能力。     

鸡胚成纤维细胞感染马立克氏病病毒后部分染色体上微卫星不稳定性研究

研究鸡胚成纤维细胞（CEF）感染马立克氏病毒（MDV）后部分染色体（5,6,7,8,9）微卫星的变化。CEF感染马立克氏病超强毒RB1B株后,提取正常鸡胚成纤维细胞和感染病毒的成纤维细胞DNA,应用5,6,7,8,9号染色体上的43个微卫星引物进行PCR扩增,产物采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测。结果表明43个微卫星标记有38个表现出不同程度的微卫星不稳定性,ABR0262发生率最高,为38．10％,ABR0048,ABR0041和MCW0183也较高,为33．33％。21组样品中全部检测到微卫星不稳定性,9号样品微卫星不稳定性发生率最高,为41．86％。11号样品的发生率也较高,为32．56％。表明马立克氏病病毒感染鸡胚成纤维细胞后,可以导致广泛的宿主基因组变化。这些变化是随机的,但是也有一定的规律,而且这些变化可以用微卫星标记来检测。