不同酶标抗体稀释液对酶标抗体稳定性的影响

为筛选一种较好的酶标抗体稀释液,试验以磷酸盐缓冲液（PBST）为基础溶液,通过添加甘油、酪蛋白、海藻糖及防腐剂Proclin 300等试剂配制了4种不同组合的酶标抗体稀释液,分别在4℃和37℃条件下考察其对酶标抗体稳定性的影响。结果表明,处理5（0.01 mol/L PBST＋3%酶稳定剂M＋3%海藻糖＋0.05%Proclin 300）的保护效果最好,在4℃保存6个月,酶标抗体的活性仅降低18%。     

不同酶标抗体稀释液对酶标抗体稳定性的影响

为筛选一种较好的酶标抗体稀释液,试验以磷酸盐缓冲液(PBST)为基础溶液,通过添加甘油、酪蛋白、海藻糖及防腐剂Proclin 300等试剂配制了4种不同组合的酶标抗体稀释液,分别在4℃和37℃条件下考察其对酶标抗体稳定性的影响。结果表明,处理5(0.01 mol/L PBST+3%酶稳定剂M+3%海藻糖+0.05%Proclin 300)的保护效果最好,在4℃保存6个月,酶标抗体的活性仅降低18%。     

农残速测中应注意的几个问题

1.试剂的保存①酶的保存粉状的酶应储藏在冷冻室(约-18℃),使用时用提取试剂溶解,溶解后的酶液分成2～4小瓶.暂时不用的储存在冷冻室内,用时解冻;用后的酶液储存在冷藏室(0～5℃)内,在1周内用完.酶液反复解冻最多不超过两次,否则会影响酶活性.②底物和显色剂保存固体及溶解后的底物均应保存在冰箱的冷藏室内(0～5℃).③提取试剂的保存固体及溶解后的提取试剂只需在常温下保存.     

奶牛孕酮酶联免疫检测试剂盒的研制

为了掌握母牛孕酮水平变化信息,为发情鉴定、妊娠鉴别和卵巢疾病诊断提供参考依据,根据EHSA基本原理,研制了奶牛孕酮ELISA检测试剂盒。结果表明,采用孕酮-牛血清白蛋白（P4-BSA）交联物解决了在酶标板上包被抗原的问题,且抗原容易保存;而利用孕酮-卵清白蛋白（P4-OVA）交联物免疫兔子获得高效价抗体,能阻断1ng/mL孕酮水平;并以ELISA棋盘测定法确定P4-BSA 2000倍、血清500倍稀释为该试剂盒最佳工作浓度。该试剂盒以牛粪作为检测样品,即通过粪便中的孕酮水平变化可为奶牛发情鉴定、妊娠鉴别、繁殖障碍性疾病诊断提供可靠的技术支撑。     

口蹄疫病毒抗原保护剂的研究

[目的]研究几种(海藻糖、蔗糖、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、硫脲、明胶、L-精氨酸、抗坏血酸)保护剂,为口蹄疫抗原保护剂配方的形成提供参考。[方法]用三因素、三水平、双重复正交试验方法筛选出了对口蹄疫病毒(FMDV)抗原保护效果最好的I(4#)保护剂配方,以加保护剂A(已申请专利)的病毒为对照,比较其在不同条件下的TCID50和146s抗原的含量。[结果]通过方差分析4#保护剂保存病毒测得TCID50极显著的高于1、3、5、6、7、8号,显著高于2、9。将4#保护剂加入被保存的病毒抗原中,分别于4℃下保存90、120、150 d,其logTCID50分别为5.3、5.0和4.5,而加保护剂A(已申请专利)的对照病毒则为5.0、4.5和4.3;在37℃下保存40、50和60 h,其logT-CID50分别为4.5、2.5和1.0;而加保护剂A的对照病毒则为3.5、1.5和0.5,为了进一步验证保护剂对FMDV抗原的保护性能,进行了FMDV146s抗原含量的测定。分别于4℃下保存150 d,37℃下保存40 h,测得结果分别为0.796、0.462μg/ml,而加保护剂A的对照病毒则为0.602、0.307μg/ml。[结论]该复合配方保护剂I(4#)对FMDV有效抗原的保护作用优于保护剂A,尤其是病毒保护剂对提高FMDV的冷冻保存时间和耐热效能作用明显。     

奶牛孕酮—卵清蛋白交联物、孕酮—牛血清白蛋白交联物的制备

采用碳二亚胺法合成孕酮—卵清蛋白交联物(P4-OVA)、孕酮—牛血清白蛋白交联物(P4-BSA);用孕酮—卵清蛋白(P4-OVA)交联物作为抗原免疫兔子,获得高效价抗体;用孕酮—牛血清白蛋白交联物(P4-BSA)作为包被抗原,通过牛血清白蛋白将抗原牢固地连接在酶标板上,包被后的抗原在4℃保存一年使用效果良好。为奶牛孕酮检测ELISA试剂盒的研制奠定了基础。     

耐热保护剂提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗保存效果研究

为提高鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热性能,根据前期研究设计了3个耐热保护剂配方,比较不同配方对疫苗的抗原冻干损失、温度耐受性和保存期的影响.结果显示,保护剂TS11、TS37、TS51所制备疫苗的抗原冻干损失均在0.5 lg以下,相互之间差异不明显.但TS37所制备疫苗在37℃和45℃耐受后的抗原效价下降滴度明显低于TS11和TS51,这说明TS37具有更好的耐热保护效果.另外,25℃、2～8℃保存试验显示,配方TS37可使疫苗在室温下至少能保存1个月、冷藏条件下至少保存27个月而抗原含量和攻毒保护仍能达到质量标准要求.因此,本试验研制成功针对鸡新城疫-传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂TS37,该保护剂可使疫苗实现2～8℃下长期保存.     

口蹄疫病毒抗原保护剂的筛选和优化

用三因素、三水平、双重复正交试验筛选出对口蹄疫病毒(FMDV)抗原保护效果较好的4号保护剂配方,该保护剂保存的病毒在37 ℃静置40 h和50 h后毒价TCID50分别为4.5和2.0,而对照组病毒则分别降至1.5和0.通过方差分析4号保护剂保存病毒测得TCID50极显著的高于1、3、5、6、7、8号,显著高于2、9号.保护剂配方优化试验结果表明,加该保护剂的病毒,分别于-20 ℃和4 ℃下保存90 d、120 d、150 d,其㏒TCID50分别为6.0、6.0、5.8和5.3、5.0、4.5,而未加保护剂的对照病毒则为5.8、5.3、5.0和5.0、4.5、4.3;FMDV 146 s抗原含量测定结果表明,分别于-20 ℃和4 ℃下保存150 d,37 ℃下保存40 h,测得结果分别为1.116 μg·mL-1、0.896 μg·mL-1、0.888 μg·mL-1,而未加保护剂的对照病毒则为0.846 μg·mL-1、0.802 μg·mL-1、0.307 μg·mL-1;反复冻融试验表明对照组冻融6次即为临界点, 病毒保护剂组达10次;通过对主要保护性抗原VP1基因,试验病毒株(O/NX/99/1)、对照病毒株(O/NX/99/2)测序比对,结果表明保护剂不会使病毒产生基因突变.试验结果说明该保护剂对FMDV有效抗原确实有较好的保护作用.     

弓形虫病ELISA诊断抗原保存方法的研究

采用ELISA方法检测了不同蛋白质保护剂在4℃保存不同时间对弓形虫病ELISA诊断抗原的影响。结果显示,0．001％硫柳汞和0．01％叠氮钠可以长期保存抗原,但检测反应的D630nm值极显著降低,添加有15％甘油和对照组抗原检测反应的D630nm值分别在12月和6月内无显著变化。说明硫柳汞和叠氮钠不宜作为ELISA抗原的保护剂,而15％的甘油可长期稳定保存ELISA抗原。     

流感病毒快速诊断试剂中HA抗原热稳定性的研究

[目的]筛选流感病毒HA抗原保护剂。[方法]将H3N2和H1N1亚型流感病毒分别加入A～F组中,在37℃下进行加速试验,并通过血凝试验测定HA滴度。[结果]在28 d A组(添加PBS缓冲液)中H3N2和H1N1亚型流感病毒的HA抗原血凝滴度分别为20和32。F组(添加BSA、岩藻糖、Proclin 300、Triton 100)HA抗原的热稳定性最好,在28 d H3N2和H1N1亚型流感病毒HA抗原血凝滴度分别为48和96。[结论]F组成分对流感病毒HA抗原的保护作用最好,可作为保护剂候选配方。     

杀菌对生菜冷藏期间理化品质的影响

在4℃冷藏条件下,对分别存放在杀菌冰箱和普通冰箱中的新鲜生菜的细菌总数、汁液含量、维生素C含量和叶绿素含量进行研究。结果表明:与普通冰箱相比,杀菌冰箱杀菌效果显著,能降低生菜汁液含量损失,提高叶绿素的稳定性,减缓维生素C的氧化速率;存放10天后,杀菌冰箱中冷藏生菜的感官质量明显优于普通冰箱。     

昆虫细胞表达免出血症VP60蛋白间接ELISA方法建立及评价

采用Bac-to-Bac系统表达的兔出血症病毒(RHDV)结构蛋白VP60作为包被抗原,建立抗体检测间接ELISA方法,并对方法性能进行测定。试验以整合有VP60基因的重组杆状病毒接种Sf9昆虫细胞,感染细胞经裂解、离心初步纯化,作为包被抗原建立了检测RHD抗体的间接ELISA方法。经过对反应条件和试剂的优化选择,初步组装成间接ELISA试剂盒,并对其整体性能进行了评价。结果表明,含重组VP60蛋白的Sf9细胞裂解液最适包被稀释度为1:2000,换算为纯化VP60蛋白含量约为1.7μg·mL-1;待检血清最适稀释度为1:100;羊抗兔IgGHRP标记抗体最适使用浓度为1:30000。初步组装的ELISA试剂盒检测RHD阴性血清无假阳性反应,与其他常见兔病阳性血清无交叉反应,特异性良好;敏感性高于RHDV全病毒间接ELISA和血凝抑制试验,低于进口间接ELISA试剂盒;试剂盒批内和批间变异率在10%以内。37℃加速破坏试验和4℃保存期试验结果表明试剂盒保存期可以稳定在6个月。该方法可应用于兔出血症抗体水平监测及实验兔等级检测中。     

热处理蜂王浆对小白鼠巨噬细胞吞噬活力的影响

采用加糖保护和不加糖保护热处理的蜂王浆饲喂小白鼠,并以新鲜蜂王浆和冰箱中保存1a的蜂王浆作对照饲喂。结果表明,对小白鼠巨噬细胞吞噬活力的影响是,加糖保护热处理至56℃的蜂王浆与新鲜王浆对比无明显差异,却明显地高于冰箱中保存1a的蜂王浆;加糖保护热处理至63℃的蜂王浆,与冰箱中保存1a的蜂王浆对比无明显差异;而不加糖保护热处理至56—63℃的蜂王浆均明显地低于对照组。     

低温贮藏对康乃馨切花瓶插寿命的影响

[目的]探索延长康乃馨切花瓶插寿命的方法和条件。[方法]研究了低温贮藏(0±1)℃的冷柜内贮藏5 d和10 d、(4±1)℃的冷柜内贮藏5 d对康乃馨切花"马斯特"采后生理代谢和瓶插寿命的影响,测定了瓶插期间康乃馨的花茎、鲜重、可溶性蛋白含量以及不同温度下的呼吸强度。[结果]以0℃贮藏5 d处理组的瓶插效果最好,有效抑制了康乃馨的生理代谢,推迟切花鲜重和可溶性蛋白峰值的出现,使切花的瓶插寿命延长(4.7±0.3)d,而4℃贮藏组切花的瓶插寿命较对照组缩短了(2.3±0.3)d。根据不同贮藏温度下感官评分/时间的线性回归方程,可以获得不同瓶插时间的感官得分。[结论]紧蕾期的康乃馨切花最佳的贮藏温度是0℃,最佳的贮藏时间是5 d。     

沙门氏菌内标PCR快速检测试剂盒的研制与应用

 【目的】研制一种能有效指示假阴性的PCR检测产品,用于沙门氏菌快速、准确、灵敏的检测。【方法】针对沙门氏菌invA基因、stn基因序列分别设计引物与扩增内标,建立添加扩增内标的沙门氏菌PCR检测方法,组装试剂盒,并对试剂盒的各项性能进行评价。【结果】试剂盒对147株沙门氏菌和28株非沙门氏菌的检测结果显示,所有沙门氏菌均能扩增出362 bp的目标条带,非沙门氏菌仅扩增出520 bp的内标条带。试剂盒检测沙门氏菌基因组DNA的检测限为8.0 fg/PCR,检测染菌量为4—5 CFU/10 mL的牛奶样品,增菌8—10 h即得到阳性结果。反复冻融60次或-20℃下贮存1年,均不影响试剂盒的使用效果。对食品样品的检测结果显示,阳性检出率为2/30,与国标法的检测结果相符,比未添加扩增内标的PCR检测结果（阳性检出率为1/30）准确。【结论】采用添加扩增内标的PCR试剂盒检测沙门氏菌,特异性强、灵敏度高、稳定性好,并能有效指示假阴性,提高检测的准确性,适用于食品中沙门氏菌的快速筛检。     

甘蓝型油菜无菌苗培养方法的优化

以甘蓝型油菜种子为试验材料,研究了用于无菌苗培养的种子的不同消毒方法,及种子贮存时间和贮存温度对种子消毒效果的影响,最终确定适于组织培养和转基因用苗的油菜种子的最佳消毒方法和培养方法。结果表明:组织培养和转基因油莱无菌苗培养的最佳条件为:选用新收的油菜种子,4℃冰箱中保存,70%酒精表面消毒0.5~1 min后,用0.1%HgCl2消毒10 min,无菌水冲洗5~6次,无菌水浸泡种子4~5 h,接种至pH值为5.8的MS培养基,25℃暗培养1~2 d,转至16 h/d光照下生长4~5 d即可作为组织培养和转基因用无菌苗。     

不同保存温度下牛肉新鲜度变化规律的研究

[目的]研究牛肉在保存过程中新鲜度主要指标的变化规律.[方法]将分割好的牛肉分别保存在室温和4℃条件下,对其新鲜度主要指标(挥发性盐基氮,pH值、菌落总数)进行测定.[结果]牛肉的新鲜度指标在不同保存温度下有所不同,保存温度高,牛肉中的TVB-N数值增加的速度就越快、pH值回升的时间就越短,微生物繁殖的数目就越多,牛肉变质的速度就越快.[结论]4℃条件下保存的牛肉保质期比较长,达到了4d,所以在4℃条件下一定时间内保鲜牛肉是可行的.