CTAB法抽提香榧种子胚乳DNA的改进

香榧种子胚乳DNA抽提是RAPD和AFLP分子标记构建遗传图谱的基础性工作。经多次实验，我们对CTAB法抽提香榧种子胚乳DNA进行了改进，即先将胚乳冷冻，抽提时加入β－巯基乙醇，抽提过程中用高盐TE重悬DNA－CTAB沉淀，最后用异丙醇沉淀DNA。OD260／OD280比值检测结果为平均1．824，而且DNA得率也较高，证明用此法抽提的DNA能完全满足RAPD和AFLP的分析的要求。     

刺五加AFLP分子标记技术体系的建立

用改良的的试剂盒法提取刺五加叶片的基因组DNA,可以获得高质量的刺五加基因组DNA,DNA降解较少、污染低、电泳条带清晰,可以用于PCR扩增反应,可以被内切酶EcoRⅠ和MseI彻底消化。通过优化酶切反应、引物连接、预扩增、选择扩增,建立了优化的刺五加AFLP分析技术体系,从64对引物中筛选到5对高效扩增引物,并利用这5对引物在6个刺五加种源中获得了89个多态性AFLP分子标记。建立了利用红外荧光检测技术和Li-Cor4300DNA分析系统,进行刺五加AFLP分析的分子标记技术。     

香榧不同部位DNA提取效果研究

分别对香榧胚乳、新老叶片以及1年生幼果进行DNA的提取,经比较分析发现,以香榧嫩叶为实验材料提取DNA的效果最好。     

枣叶片DNA的提取以及AFLP反应体系的建立

扩增片断长度多态性(AFLP)实验过程中,DNA提取质量和适合的PCR扩增反应体系是2个关键因素.利用CTAB法对枣树叶片DNA的提取方法进行探讨.结果表明:改良CTAB法抽提到了较高质量的枣基因组DNA,可用于AFLP实验分析;通过对酶切-连接体系和PCR扩增体系中的关键因素实验分析,建立了适合枣AFLP荧光反应体系,并得到清晰的DNA指纹图谱.     

木麻黄AFLP分析体系的建立及引物筛选

采用CTAB法改良技术提取木麻黄基因组DNA,在提取液中加入2%β-巯基乙醇防氧化和2%的PVP去除酚类等物质,获得高质量的基因组DNA,以满足AFLP对模板DNA高质量的要求;采用分步酶切和连接后,进行预扩和选扩,摸索建立和优化了木麻黄AFLP分析体系,探讨了木麻黄AFLP分析的影响因素;从64对AFLP核心引物组中筛选出了8对适合木麻黄分析的引物组合.同时探讨了AFLP技术在木麻黄研究领域的应用前景.     

银杏16个主要栽培品种的分子鉴别

以16个银杏栽培品种的单倍体胚乳DNA为材料,用筛选出了高效引物进行RAPD分析,确定了各品种的标记基因型.在此基础上,可利用单倍体种子胚乳或二倍体叶片等材料实现对银杏无性系品种的有效分子鉴别,为银杏的良种鉴别、保护和登录提供了科学依据.     

刺槐AFLP分析体系的建立与优化

以10份刺槐种质资源为试材,通过对影响AFLP反应体系关键因素的优化,建立了刺槐AFLP分析的反应体系,即15ng/μL模板DNA在37℃下双酶切(MseI、EcoRI各0.15U/μL)2h,0.075U/μL T4DNA连接酶连接12h,连接产物、预扩增产物稀释10倍后扩增效果最佳。并利用该体系筛选出引物E+3/M+3,构建了刺槐种质资源的AFLP指纹图谱。     

山苍子AFLP反应体系的建立及其引物筛选

通过对山苍子幼嫩叶片、顶芽、花蕾3种组织的DNA提取效果分析和对影响酶切及选择性扩增效果的4个主要因素(酶切时间、Mg²⁺浓度、dNTPs浓度、引物浓度)的比较研究,建立了适合于山苍子AFLP分析的技术体系。结果表明,山苍子的顶芽是较好的DNA提取材料;山苍子基因组DNA经5 U EcoR I和5 U Mse I酶切1 h即可完全酶切;最佳的选择性扩增体系为20 μL反应体系中含有1.0 U rTaq聚合酶、2.0 μL 10×PCR缓冲液、1.8 μL 25 mmol·L^-1MgCl₂、1.4 μL 2.5 mmol·L^-1dNTP、100 ng·μL^-1引物各1.0 μL。使用该反应体系获得了清晰、稳定的DNA指纹图谱,并筛选出10对多态性较好的AFLP引物组合,为利用AFLP标记技术进一步开展山苍子种群遗传结构、遗传分化等研究奠定了基础。     

马尾松胚乳DNA高效提取及SSR-PCR体系优化

以马尾松胚乳为试验材料,用CTAB-SDS法提取单粒胚乳DNA,对其浓度和纯度进行检测。结果表明:运用CTAB-SDS法提取的马尾松胚乳DNA浓度高、纯度好,琼脂糖凝胶电泳条带清晰,点样孔干净。此外,还对影响PCR结果的Mg2+、dNTP、模板DNA、引物浓度、TaqDNA聚合酶5个因素进行了正交设计试验,建立了适合马尾松SSR-PCR的反应体系:即在10μL反应体系中,Mg2+浓度为2.80 mmol/L,dNTP浓度为0.35 mmol/L,引物浓度为0.075μmol/L,模板DNA浓度为20 ng/10μL,TaqDNA聚合酶浓度为0.50 U/10μL。     

AFLP标记在毛新杨×毛白杨BC1群体中的分离

利用AFLP分子标记技术 ,以毛新杨×毛白杨BC1群体中的 12 0个单株为材料 ,在整个基因组水平上研究AFLP标记在该群体中期望的孟德尔分离情况 .4 1对AFLP引物组合共检测到 2 70 7个位点 ,其中在分离群体的亲本毛新杨和毛白杨间具有多态性的位点有 712个 .经卡方检验后得到在P <0 .0 1水平上 ,符合期望孟德尔 1∶1分离的位点共有 5 71个 ,占多态性位点的 80 .2 % ,该结果表明AFLP标记技术很适合用于毛白杨指纹分析和遗传连锁图谱构建     

香榧种子胚乳DNA抽提

本文采用改良的ＣＴＡＢ法抽提香榧种子胚乳ＤＮＡ,获提成功。所提ＤＮＡ浓度较高。单个种子所抽提的ＤＮＡ量也较多,其纯度完全可以满足常规分子生物学实验的需要。     

香榧天然群体遗传多样性的AFLP分析

利用AFLP分子标记技术,采用8对引物对6个香榧天然群体的92个个体进行了总基因组DNA水平上的多态性检测,共检测出364个位点,其中多态性位点63个.方差分析表明:基因谱带频率在群体间差异不明显,方差分量贡献率在群体间占11.14%,群体内占88.86%.6个群体均具有丰富的遗传多样性,多态位点百分率为79.73%～98.41%,其中绍兴>东白湖>磐安>钟家岭>嵊州>黄山,且群体内遗传多样性大于群体间遗传多样性.等位基因数为1.7939～1.9841,有效等位基因数为1.5416～1.6759,Shannon信息指数为0.4548～0.5471.群体分化系数为0.1136,群体内遗传多样性为0.3512,基因流为3.8997.遗传一致度平均值为0.9174,遗传距离平均值为0.0797.根据遗传一致度进行了UPGMA聚类分析.     

提取技术对香榧假种皮提取物组成影响的研究

采用水蒸气蒸馏法、溶剂提取法和两步提取法对新鲜的和风干的香榧假种皮原料进行提取,从提取物得率、性状、组成成分和各成分含量等方面进行了研究。新鲜原料所得提取物得率高于风干原料,两步提取法所得提取物总得率高于另外两种方法。采用水蒸气蒸馏法,新鲜原料的提取得率为5.54%,风干原料为1.98%,GC和GC-MS分析结果表明新鲜原料主要成分为单萜类化合物,风干原料主要成分为倍半萜类化合物。新鲜原料的溶剂提取物得率高于水蒸气蒸馏法,且随着溶剂不同,得率略有变化,其中使用甲苯时得率为21.84%,使用正己烷时得率为16.01%,主要成分皆为二萜类物质;新鲜原料的两步法提取所得组分分为精油和提取物两部分,其中精油的得率、性状、组成与水蒸气蒸馏方法一致,提取物的得率、性状、组成接近于溶剂提取法,只是组分含量略有变化。对香榧假种皮进行两步法提取比较有利于精油和提取物的有效分离及利用。     

基于气候-地形-土壤因子和GIS技术的浙江省香榧种植综合区划

根据香榧的生物学特性及其对环境条件的需求,构建香榧种植综合区划评价体系,提出香榧综合区划指标为3个气候因子、2个地形因子和2个土壤因子,建立区划指标的空间分布模型。应用混合插值法完成区划指标的细网格化。应用加权指数求和法,建立综合区划评估模型。考虑土地利用现状,屏蔽不宜种植地域,把浙江省香榧种植区域划分为适宜、较适宜和不适宜3个等级。借助GIS技术制作香榧种植精细化的专题区划图,空间精度为100m×100m。综合区划结果可为浙江省香榧生产提供科学依据。     

岩泉自然保护区香榧调查初报

通过调查,基本摸清了区内野生香榧自然分布状况和生态环境特征.由于区内的榧树皆为实生林起源,且数代同堂,品种、品质混杂,初定为野生香榧.     

浙江香榧种植业的分类经营

通过对浙江香榧的生产现状进行分析,提出了浙江香榧种植业分类经营的构想及具体措施,可供浙江香榧种植业的可持续发展作参考。     

枣优良品种分子鉴别系统的开发

利用荧光AFLP分子标记技术对26个枣优良品种及1个酸枣品种进行分子鉴别.8对引物共扩增得到886条带,其中特征性条带(某品种特有)112条,缺失条带(某品种缺少)60条,利用这些特殊性条带可有效地对供试材料进行鉴别.从3对引物中选择21条多态性丰富的DNA条带,将其转换成1、0数据,在此基础上开发出了用于枣优良品种鉴别的计算机应用软件.     

香榧新造林地抚育管理现状和发展对策

从诸暨市的实际出发,对香榧新造林地的现状和存在的问题进行调查,并就如何促进香榧的发展提出相应对策。