甜樱桃S基因型PCR鉴定技术研究

绝大部分甜樱桃品种自交不亲和,因此自交不亲和基因型的鉴定对于生产具有重要的意义。以甜樱桃主栽品种为试材,建立基于PCR技术的甜樱桃品种S基因型鉴定技术。试验根据已发表的樱桃S基因序列设计了2对引物组合BFP73/74,BFP93/94,结合S1、S5基因的特异扩增引物,利用扩增片段长度的不同,就可以对樱桃品种的S基因型进行鉴定。通过对已知S基因型品种基因组的扩增,最终建立了基于PCR技术的甜樱桃品种S基因型鉴定技术。     

63份柚类资源S基因型鉴定

以‘晚白柚’等63份柚类资源为材料基础,通过RNA-seq和序列特征分析发掘新的S-RNase,并结合前期已有的9个S-RNase基因信息,设计21对特异性引物,扩增鉴定63份柚类资源的S基因型。结果发掘到12个新的S-RNase,按顺序分别命名为S₁₀-RNase～S₂₁-RNase。特异扩增结果显示：鉴定的63份材料中,有59份材料得到完整的S基因型,4份仅鉴定到1个S-RNase基因,其中S₂-RNase扩增频率最高,达34.92%(22/63),S₄-RNase和S₆-RNase在63份材料中均未扩增出。结果还显示许多品种具有相同的S基因型。     

利用基因芯片鉴定梨品种自交不亲和基因型

根据东方梨中已鉴定的46个S基因序列和S基因的结构特点,设计了86条寡核苷酸探针并制备成S基因寡核苷酸检测芯片,采用Cy3荧光修饰引物标记被检测品种的PCR产物并与芯片杂交,以检测不同品种的S基因型。结果表明：利用芯片与华梨2号、秀玉和德胜香等已知S基因型的品种杂交,杂交信号显示与各品种已知基因型相符合。利用芯片鉴定了丽江黄酸梨等27个未知S基因型的梨品种,获得了各品种的S基因型,随机选取部分品种进行DNA测序和序列分析,结果与芯片杂交结果完全一致,证明利用S基因寡核苷酸芯片鉴定梨品种S基因型结果准确可靠。     

甜樱桃自交不亲和研究进展

自交不亲和是被子植物雌蕊细胞分泌识别物质分子来认识和拒绝同源花粉的一种分子过程。是植物防止自交衰退的一种有效途径。这为物种的生存、发展以及种群的相对独立性提供了一定的保障,但给果树育种和果树     

白梨品种4个新S基因的分离与鉴定

利用S_1-8-RNase氨基酸保守序列‘FTQQYQ’和‘IIWPNV’设计兼并引物, 对白梨4个品种冬黄、新梨一号、红皮酥和博山池的基因组DNA进行PCR扩增。PCR产物限制性酶切分析显示: 新梨一号和冬黄各含有一个S₈ - 等位基因。DNA序列测定和生物信息学分析表明, 这4个品种中含有与已报道的S_1-19等位基因有差异的S基因, 经分析鉴定为新的S 等位基因, 分别命名为S₂₀ - 、S₂₂ - 、S₂₆ - 、S₂₇ - 等位基因(GenBank登录号分别为: AY250988、AY250990、AY339396、AY339397) 。冬黄、新梨一号、红皮酥和博山池的S基因型分别为S₈ S₂₀、S₈ S₂₂、S₁₂ S₂₆和S₁₉ S₂₇。     

雪花梨及其亲缘品种S基因型的确定

梨是典型的自交不亲和性果树,自然授粉结实率低,品质差。通过确定梨品种S基因型可寻找简便快速克服自交不亲和性,提高产量,改良品质的方法。根据梨S基因的一级结构特点,利用S基因的保守序列设计特异引物,并对雪花梨及其亲缘品种的基因组DNA进行PCR扩增。将基因组特异扩增电泳只显示一条S基因带雪花梨的特异扩增片段回收并与T载体连接,转化至大肠杆菌中。取其中1个阳性克隆进行测序,并通过生物信息学软件分析确定其核苷酸序列,推导出氨基酸序列,经网上Blast比较,确定该雪花梨S基因片段的S基因型,然后就该S基因进行酶切系统分析,有针对性地挑取另一个阳性克隆测序分析。另外,通过品种间的亲缘关系并经过酶切检测以分析雪花梨亲缘品种的S基因型,并确定各品种的S基因型分别为:雪花S4S16、冀蜜S1S16、雪青S3S16、雪峰S4S16、雪英S3S16、雪芳S4S16。     

北京地区66个甜樱桃品种花期调查和S基因型列表

总结了北京地区2008—2022年66个甜樱桃品种花期的调查结果,在此期间,同一品种花期因春季气温的不同而有明显的变化,初花期最早的年份是2020年,最晚的是2010年,相差21～23 d。大部分品种多数年份初花期均在4月上旬。初花期和盛花期间隔相对稳定,基本为1～2 d,花期长度因品种和年份而异,相差2～5 d。以2018—2020年3年的数据为基准,对66个甜樱桃品种的初花期进行了排序,罗亚明（Minie Royal）最早,黑金（Black Gold）最晚。从开花最早的品种初花期到最晚的品种末花期共持续了26 d,各品种花期长度为11～14 d。此外整理了这些品种的S基因型,以供科研生产中授粉品种选择和搭配时参考。     

11个延边地区栽培梨品种的S基因型鉴定

鉴定梨品种的S基因型可为合理配置授粉树、杂交亲本选配提供理论依据。为鉴定11个延边地区栽培梨品种的S基因型,利用梨的自交不亲和基因（S-RNase）特异引物FTQQYQ和anti-IIWPNV,对11个梨品种的基因组DNA进行S基因特异扩增,并对扩增片段进行回收、克隆、测序,使用生物信息学软件对各序列进行分析和同源性搜...     

4个枇杷品种S基因型鉴定及新基因S_(31)-RNase序列分析

【目的】鉴定‘黄密’、‘贵妃’、‘早红’和‘软条白沙’4个枇杷品种的S基因型,为其生产栽培合理选择授粉树及杂交育种亲本选择提供科学依据。【方法】以苹果S基因高度保守区设计兼并引物对4个品种的基因组DNA进行PCR扩增,片段回收、克隆及测序,分别采用Blast软件和Bioedit软件进行同源性检索和结构分析。【结果】从参试的4个品种中共分离了4个S等位基因,分别为S2、S5、S6和S31,其中S31-RNase为新分离的枇杷S-RNase基因,Gen Bank登录号为:KC131133。所克隆获得的4个枇杷S-RNase基因均克隆到4个保守区(C2、C3、RC4和C5)和1个高变区(HV),具有与苹果S基因相同的氨基酸序列结构。【结论】确定了参试4个枇杷品种S基因型分别为:‘贵妃’S2-S6、‘黄密’S2-S5、‘早红’S5-S6、‘软条白沙’S6-S31。     

20个苹果品种的S基因型鉴定

以‘富士’、‘华瑞’、‘华硕’和‘华星’等20个苹果品种为材料,利用S等位基因高度保守氨基酸序列FTQQYQ和anti-1/MIWPNV设计的S基因通用引物,以及S等位基因多态性序列设计的19对特异引物,PCR扩增、测序以鉴定20个品种的S基因型;并用‘华瑞’和‘华硕’分别与‘美八’、‘锦秀红’、‘华冠’和‘富士’进行授粉试验验证S基因型的准确性。PCR结果表明:通用引物扩增S等位基因时,仅‘富士’、‘华瑞’、‘华硕’、‘华星’、‘美八’和‘红脆宝’6个品种有效地扩增出2条特异的S等位基因条带,其S基因型有S1S_9、S_9S_(24)、S_5S_9和S_5S_(24)等4种;19对特异引物扩增S等位基因时,‘华帅’等14个品种扩增得到2条特异性条带,S基因型有S_(10)S_(19)、s_2s_3、s_2S_5、s_3S_(10)、s_2S_9、S_5S_(24)、S_9S_(10)、s_3S_(10)和S_5S_9等9种。因此,20个苹果品种的S基因型分别为:‘富士’S1S_9,‘华瑞’和‘华硕’S_9S_(24),‘华星’、‘美八’和‘红珍珠’S_5S_9,‘红脆宝’、‘华玉’和‘99-1-29’S_5S_(24),‘华帅’S_(10)S_(19),‘金玉’s_2s_3,‘早红’、‘华美’和‘嘎拉’s_2S_5,‘Seokwang’s_3S_(10),‘锦秀红’、‘蜜玉’和‘华冠’s_2S_9,‘绿佳’S_9S_(10),‘信浓红’s_3S_(10)。2015和2016年‘华瑞’与‘华硕’的正反交组合坐果率较低(低于15.52%);而‘华瑞’和‘华硕’分别与‘美八’、‘锦秀红’和‘华冠’、‘富士’品种的正反交组合坐果率较高(高于46.30%)。因此,本试验中相同S基因型的授粉组合其坐果率较低,不同S基因型的授粉组合其坐果率较高,授粉试验支持S基因型鉴定结果。     

甜樱桃优良品种"萨米脱"

萨米脱,原名Summit,也称萨米特,加拿大大不列颠哥伦比亚省夏地太平洋农业食品研究中心1986年推出,亲本为Van(先锋)×Sam(萨姆)(1973年)。1989年烟台市芝罘区农林局从加拿大引入,在芝罘区苗圃(驻地小沙埠)栽植,后苗圃倒闭,品种流入社会。烟台市农科院果树研究所在进行“国内外大     

Determination of self-incompatible genotypes in 21 cultivated sweet cherry cultivars in Greece and implications for orchard cultivation

Summary

Sweet cherry is self-incompatible due to having a gametophytic self-incompatibility system. S alleles in the style and pollen determine possible crossing relationships. Knowledge of the S allele constitution of cultivars is important for sweet cherry growers and breeders. Recently, molecular methods have been developed to distinguish between S alleles in sweet cherry.The S allele genotypes of 21 sweet cherry cultivars widely grown in Greece, including 19 not previously genotyped, were determined based on their S-RNase gene sequences using PCR analysis. Eight different S alleles in ten combinations were distinguished and two new S-genotypes (S₁S₁₃ and S₄S₃₀) were documented. Four alleles, S₁, S₃, S₄, and S₉ were widespread and together were responsible for 85% of the S-haplotypes. Therefore many of the cultivar combinations were semi-compatible. In Greece, semi-compatibility was shown to correlate with low yields. However, the cultivar ‘Hybrid Tragana Edessis x Unknown’ (S₃S₁₃) and the cultivar ‘Kapsiotika’ (S₂S₅) carry rare S-haplotypes and are therefore fully cross-compatible with most of the cultivars analysed.     

甜樱桃不同品种贮藏性的研究

通过试验,在常规栽培管理条件下,采用自行研制的甜樱桃专用保鲜剂和专用保鲜袋,预冷48h,于0±0.5℃下冷藏,拉宾斯、雷尼、巨红表现为最耐贮藏,红灯、佳红、红艳较耐贮藏,萨米脱和斯坦勒最不耐贮藏。     

Determining the S-genotypes of several sweet cherry cultivars based on PCR-RFLP analysis

Summary

Based on the cDNA sequences encoding sweet cherry self-incompatibility associated ribonucleases (S-RNases), a PCR-based S-allele typing system for sweet cherry cultivars has been recently developed. Using this technique, we determined S-genotypes of the three newly released Japanese cvs Kouka-Nishiki, Beni-Sayaka and Beni-Shuho and one British cv Merton Glory that was classified as a Universal Donor, which is able to be used as a pollen donor for all cultivars in pollen incompatibility groups I to XIII. Furthermore, we also determined the partial sequences of the S-RNase genes of ‘Rainier’ (S¹S⁴)‘ and ‘Sato-Nishiki (S³S⁶)’,which leads to the development of a more reliable S-allele identification method of PCR-RFLP for sweet cherry cultivars. Total DNA isolated from leaves of the four cultivars along with those from ten cultivars with known S-genotypes were PCR amplified with two sets of primers that were designed from DNA sequences encoding the signal peptide (Pru-T2) and two conserved domains (Pru-C2 and Pru-C4R) of sweet cherry S-RNases. By comparing the size of PCR products on agarose gel, the 5-genotypes of ‘Kouka-Nishiki’, ‘Beni-Sayaka’, ‘Beni-Shuho’ and ‘Merton Glory’ were suggested to be S¹S³, S¹S⁶, S⁴S⁶, and S⁴S⁶, respectively. Two of these three S-genotypes (S¹S⁶ and S⁴S⁶) were found for the first time. DNA sequencing of PCR products from S-alleles of ‘Rainier’ and ‘Sato-Nishiki’ revealed that Ban II, Nru I, Apa LI and Ava I sites, respectively, were unique in the S¹-, S³-, S⁴- and S⁶- sequences flanked by Pru-T2 and Pru-C4R primers. RFLP analysis of the PCR products using these enzymes confirmed that S¹-, S³-, S⁴- and S⁶-alleles of the four cultivars contained the respective restriction enzyme recognition sites.     

66个甜樱桃品种需冷量的评价与聚类分析

【目的】研究不同甜樱桃品种需冷量。【方法】2008—2013年应用7.2℃模型、0~7.2℃模型和犹他模型对11个甜樱桃品种的需冷量进行比较分析后认为,0~7.2℃模型作为需冷量的评价标准比较适宜,利用此模型对中国农业科学院郑州果树研究所樱桃种质资源圃保存的66个甜樱桃品种的花芽和叶芽需冷量进行评价,采用系统聚类法对甜樱桃品种进行分类,K-S检验法进行正态性检验。【结果】供试的66个甜樱桃品种需冷量值介于516~852 h,51个品种花芽的低温需求量低于叶芽;聚类结果显示,≤549 h的品种属于低需冷量品种,573~716 h的品种属于中需冷量品种,≥740 h的品种属于高需冷量品种,其中中需冷量品种占比约为88%;K-S检验结果显示,需冷量性状符合正态分布。【结论】以0~7.2℃模型评价国内各甜樱桃栽培区广泛栽培的品种大多属于中需冷量品种,需冷量值主要集中于550~720 h,甜樱桃品种需冷量的评价为国内栽培区的引种以及设施栽培确定扣棚控温时机提供了关键依据。     

甜樱桃新种质种内及与中国樱桃种间杂交效率分析

【目的】探索甜樱桃新种质种内及种间杂交育种规律,提高南方甜樱桃杂交育种效率。【方法】以适宜浙江省种植的甜樱桃新种质为母本,以甜樱桃和中国樱桃为父本开展甜樱桃种内及种间杂交试验,调查坐果率、有胚率、胚败育率和F0果实品质等指标,进行杂交效率分析。【结果】授粉7 d后,供试母本的种内及种间坐果率都比较高,随果实发育,至授粉后28 d及成熟期都有不同程度较大幅度的下降。同母本种内杂交坐果率高于种间的。供试母本中‘朝阳一号’的种内、种间杂交坐果率均最高;坐果率最低的为‘长丰一号’的种间杂交组合。同一母本种内组合比种间组合有胚率高、败育率低。杂种胚成熟时败育率高,仅有4个组合可以得到未败育胚。杂交果未成熟胚败育率低这为胚培养提供了可能。供试母本‘朝阳一号’未成熟胚最好,坐果率高有胚率高败育率低‘;江南红’有胚率低,败育程度最高‘;长丰一号’及‘先锋’居中,母本优选‘朝阳一号’;供试父本未成熟胚中‘朝阳一号’和‘紫晶’较好。F0果实成熟期推迟,颜色及形状均表现出了母本果实开放授粉的色泽及形状;可溶性固形物种含量间杂交果低于种内的,均低于开放授粉的母本果实。为获得杂交后代,南方甜樱桃杂交育种可以采用3种方法:利用主产区的杂交后代在南方进行筛选;在南方杂交后进行胚挽救或者尝试混合花粉的开放授粉。【结论】甜樱桃种新种质种内及种间组合不同坐果率、杂种胚发育均存在较大差异。同一母本种内杂交坐果率高且败育率低。供试种质中‘朝阳一号’是较好的父母本。     

The influence of paclobutrazol on the growth and cropping of sweet cherry cultivars.

Paclobutrazol (1.6 g a.i.), applied to the soil beneath nine year old trees of two sweet cherry cultivars in 1983, controlled shoot growth better in the year of treatment than foliar sprays (1500 followed by 750 mg l^-1) of the same chemical applied in late May and early June. Although no further treatments were applied, extension growth was strongly inhibited by both treatments in the two subsequent years and some inhibition persisted for four years after treatment. Inhibition of the shoot growth of both cultivars was more severe and persisted for several years longer for trees on ‘Colt’, compared with F. 12/1 rootstock. Paclobutrazol foliar sprays reduced yields in the year of treatment, and the residual effects of both soil and foliar treatments on yields were also negative in some years, particularly on the cv. Van. The reasons for these negative effects on yields were sought in studies of flowering density, flower quality and the efficiency of fruit set and retention.     

大樱桃常见优良品种及其配套高产优质栽培技术

大樱桃是欧洲甜樱桃、欧洲酸樱桃及其杂交种的总称,属蔷薇科樱桃属植物.在北方落叶果树中,大樱桃是继中国樱桃之后春季上市最早的果品,素有"春果第一枝"的美称,在调节鲜果淡季市场供应,满足人们生活需要方面,有着特殊的作用.其果实色泽鲜艳,晶莹美丽,营养丰富,外观和内在品质俱佳,被誉为"果中极品",具有极高的经济价值.近年来,随着市场经济的发展及人们消费水平的提高和饮食结构的变化,使水果生产的结构也发生了变化,小杂果不断升温,发展大樱桃热潮迭起,一些历史上很少栽培大樱桃的地区把发展大樱桃作为重点,规划果园,大批量从大樱桃生产区调入苗木,或在当地大面积育苗.为此现将生产上推广应用的品种及其配套高产优质栽培技术介绍如下,以方便广大果农.     

樱桃不同基因型再生植株的比较

对甜樱桃(PrunusaviumL.)、杂种优系F系(P.avium L.×P.pseudocerasusL.)和H系(P.cerasus L× P.pseu-docerasusL.)等不同基因型的离体再生植株方式进行了比较研究。结果表明,不同遗传背景的樱桃试材,其再生方式和途径存在差异。其中甜樱桃品种美早的离体叶片在WPM+6-BA2.0mg·L-1+IAA2.0mg·L-1+GA30.1mg·L-1培养基上,不定芽再生率可达到90%,H10、萨米脱、F10、F8在6-BA(2～2.5mg·L-1)、IAA(1.0～2.0mg·L-1)的激素配比,也获得了76%、86%、80%、64%的再生率;杂种H10叶柄接种于改良MS+6-BA2.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+2,4-D0.5mg·L-1的培养基,可以得到40%的再生率,其他品种仅有H8的叶柄获得了少量的再生植株;杂种F10的幼嫩节间接种于LS+6-BA1.0mg·L-1+NAA2.0mg·L-1+CH100mg·L-1培养基,最高再生率为40%,6-BA(1～2mg·L-1)和NAA(1～2mg·L-1)配比,H8、H10的离体节间再生率最高分别为25%和30%;杂种H8整体根在MS+6-BA1.0mg·L-1+2,4-D2.0mg·L-1+IBA0.05mg·L-1+NAA0.05mg·L-1的培养基上,再生率为96.7%,6-BA(0.5～2mg·L-1)和2,4-D(0.5～2.0mg·L-1)配比,H10、F8、F10离体根再生率分别为93.3%、96.7%和93.3%。     

山东省甜樱桃产业现状与发展建议

结合山东省甜樱桃产业发展现状,分析了影响产业可持续健康发展的制约因素,提出了发展建议。