植物染色体标本的制备和染色体核型分析研究进展

染色体是遗传物质的载体,植物染色体制片和核型分析技术是细胞遗传学中最基本、最常用的方法,在物种亲缘关系鉴定、染色体变异、杂种分析等方面得到广泛应用.文章从取材、材料预处理、材料固定、材料解离、染色体制片、染色与观察等方面综述了近年来植物染色体制片的改进方法,从传统手工分析、Photoshop软件分析、自动核型分析、流式细胞术等介绍了核型分析技术.并从提高制片技术,以获得更清晰可辨的中期染色体图像;在染色体制片中规范统一标准的仪器设备并建立一套统一的标准,便于比较不同研究者的结果,有利于植物分类和遗传的研究;提高数据统计和分析的方法,以降低实验成本等方面展望了今后植物核型分析的发展方向.     

高山葱类蔬菜染色体制片方法改进

以山韭菜(Allium japonicurn Regel)和红皮洋葱(A.cepa L.)的根尖为材料,参考常规制片方法,对传统的植物染色体制片方法进行了改进。结果表明,改进后的制片方法不仅提高了植物染色体的制片质量,而且节约了时间和成本。     

甘薯属物种根尖细胞涂抹制片方法的探讨(简报)

植物根尖细胞涂抹制片方法,是观察植物染色体最常用的方法,也是研究染色体组型染色体分带的基础。甘薯属包括有不同染色体数的物种,即二倍体、四倍体、六倍体。由于甘薯属物种的染色体小和染色体数目多,以及受染色体制片技术的局限,使得对甘薯属物种体细胞染色体形态、组型分析研究很少,仅见有关甘薯属物种染色体数目个别报道。这对从细     

植物染色体制片效果影响因素的解析

高质量的染色体制片是后续研究工作的基础,在实际操作中要获得理想的制片并不容易。本文综述取材时间与根尖长度、预处理、解离、染液的选择和制片方法等5项压片法中影响植物染色体制片效果的主要因素,其中预处理为关键环节。     

利用C基因组对高杆野生稻和宽叶野生稻基因组的比较分析

1材料与方法1．1植物材料和染色体制片药用野生稻稻株1589由广东省国家野生稻圃提供,宽叶野生稻IRW6和高杆野生稻IRW41由华南农业大学卢永根院士提供,试验材料情况见表1。染色体制片分别参照Yan等和Ren等的方法。     

植物染色体制片中疑难问题的解析

用传统和改进的染色体制片技术,以油菜、水稻和芝麻的根尖为材料,分析了染色体数目多、形态小和细胞质较浓植物的染色体制片过程中存在的常见疑难问题,如中期分裂相少、染色体不易着色等,并提出了解决方案。     

番木瓜根尖染色体压片技术的研究

<正>目前,有关番木瓜的研究已经拓展到分子水平、细胞学水平,研究内容广泛,但是关于番木瓜染色体方面的研究,仅见汪卫星等[1]有对番木瓜核型分析进行报道,采用的是改良去壁低渗—火焰干燥法进行染色体制片,整个制片过程费时、费力,而采用压片法进行番木瓜染色体观察的并未见报道。本试验参考蝴蝶兰、树莓、短柄草等植物根尖染色体制片方法~([2,3,4]),以番木瓜根尖为研究材料,通过对预处理、酸解和固定等对染色体制片质量有影响的环节进行研     

高质量花生根尖细胞染色体制片方法研究

为了能快速获得用于染色体分带或者荧光原位杂交的高质量花生根尖细胞染色体制片,通过选择适当粗细的花生侧根,经过对二氯苯浸泡预处理,卡诺氏固定液固定后,直接用45%醋酸烘烤压片,得到了细胞平整、染色体分散的根尖细胞染色体制片。与HCl解离压片的方法相比,该方法中试剂对染色体影响微小。与酶解去壁低渗法相比,该方法没有酶解去壁低渗的过程,不需要用果胶酶和纤维素酶等较贵重试剂,节约了时间和成本,提高了制片效率。该方法不仅适用于花生,也适用于芝麻、水稻、玉米、大豆、青豆、番茄等多种植物。     

‘正午’牡丹染色体预处理方法优化和在核型分析中的应用

  目的   染色体核型信息是植物遗传育种研究的重要基础。亚组间远缘杂交育种是现代牡丹育种的重要方向。牡丹组植物染色体形态相似度高,远缘杂种的核型分析需要大量高质量的染色体制片。预处理是影响染色体制片质量的关键环节,通过改良预处理方法,提高染色体制片质量和效率,对获得牡丹远缘杂种准确的核型数据、研究牡丹远缘杂交育种的遗传规律具有重要意义。   方法   本研究以‘正午’牡丹幼嫩花蕾中的雌蕊为材料,量化分析了4 ℃条件下不同预处理液和预处理时间对染色体收缩程度和分散程度的影响,统计了不同预处理效果下核型数据的差异。   结果   用对二氯苯饱和水溶液或对二氯苯-α-溴萘混合液进行预处理,均能取得良好的效果。在4 ℃下用对二氯苯饱和水溶液预处理36 ~ 72 h,或对二氯苯-α-溴萘混合液预处理24 ~ 48 h,可稳定获得大量收缩适度、分散良好的染色体制片。利用大量高质量的染色体制片获得了‘正午’牡丹更多的核型信息:其核型公式为2n = 2x = 10 = 8m（2SAT） + 2st（2SAT）,随体位于第4、8、9、10号染色体短臂上,其中9、10号染色体上的随体比4、8号染色体上的随体更容易观察到。   结论   通过改进预处理效果能有效提高‘正午’牡丹染色体制片质量和效率,获得更加丰富、准确的核型信息。本研究采用的量化方法能从染色体收缩程度和分散程度两个方面有效评价染色体制片质量,筛选出的预处理方法稳定、高效,为远缘杂种牡丹染色体核型分析和进一步遗传学研究奠定了良好的基础。      

梅花染色体周年性制片技术

为实现梅花染色体制片的周年取材,并在此基础上探索适宜的制片方法,以梅花品种"粉瓣"为材料,系统研究未成熟种子、种子组培胚根、1a生实生苗顶端生长点、水培接穗茎尖和正常萌动枝芽等分生组织的制片情况,改良去壁低渗火焰干燥法。结果表明,各时期分生组织均适宜进行染色体制片,对材料进行低温固定过夜、酶解、染色体制片,能够有效拉伸染色体长度,获得具有良好分裂相的染色体图像。试验克服木本材料染色体制片的季节限制,简化操作步骤,提高制片效率及品质。     

冬凌草染色体制片方法的初步研究

为寻找冬凌草染色体观察的最佳染色制片方法,并确定冬凌草染色体数目,采用丙酸-铁矾苏木精染色方法,对冬凌草的根尖及下胚轴进行染色制片,通过比较不同浓度的预处理液、不同取材时间对制片效果的影响,以探寻适宜于冬凌草染色体制片的有效技术。结果表明:进行冬凌草染色体数目观察适宜选取的材料为下胚轴,且取材时间8:00-9:00为最佳,将下胚轴用0.1%秋水仙碱溶液处理1h,并用丙酸—铁矾苏木精染色方法制片,观察到冬凌草染色体数目为16条。     

水稻染色体研究述评

水稻染色本的研究随着植物染色体制片技术的改进、计算机辅助识别系统的建立以及现代分子生物学技术的应用,已进入一个新的发展时期。本文简要概述了近年来水稻核型分析、显带和制片技术的研究进展,并就水稻中新近发展起来的细胞原位杂交（ＦＩＳＨ）、染色体涂染、染色体微切割、微分离等研究结果进行了评述。     

植物染色体核型分析常用方法概述

植物核型分析是指对植物细胞染色体的数目、形态、长度、带型和着丝粒位置等内容的分析研究,是植物分类和遗传研究的重要手段。对植物核型分析的基本方法,包括取材、预处理、固定、解离、染色、制片及结果分析进行了比较系统的介绍和评价。     

药用植物灵菊七的染色体核型研究

[目的]研究药用植物灵菊七(Gynura medica)的细胞染色体特点,并对其染色体核型进行分析。[方法]以灵菊七幼苗茎尖为材料,从上午6:30～10:30,每隔20 min取材一次,采用常规制片技术制片,显微镜观察中期分裂相细胞,对染色体完全分散开的细胞进行染色体计数及核型分析。[结果]在染色体分散良好的102个中期分裂相细胞中,有96.08%含20条染色体,3.92%含40条染色体;同时结果表明上午7:50～9:30取材较佳。[结论]G.medica为二倍体植物,体细胞含有10对染色体,核型公式为2n=2x=20 m,染色体核型属于1A型。该研究结果为国内首次报道。     

新疆紫草不同材料染色体制片技术研究

[目的]研究新疆紫草不同材料的染色体制片方法,为今后倍性鉴定奠定技术基础.[方法]以新疆紫草根尖及毛状根根尖为试验材料,采用常规制片法,分别考察培养方式及培养时间、取材时间、预处理方法、酸解方法、酸解时间、染色时间对染色体制片效果的影响.[结果]B5固体培养基培养4d的毛状根中期分裂相指数较大,且染色体清晰,制片效果较好;早上08:00取材的毛状根根尖的中期分裂相指数(124.2‰)最高,原植物根尖(115.4‰)在早上10:00取材较为适宜;毛状根根尖采用0.1;秋水仙素、温度15℃、预处理时间4h时的中期分裂指数为97.6‰～124.2‰,室温酸解法、10;盐酸、酸解时间为12 min、染色时间为20 min有利于毛状根根尖的制片.原植物根尖采用0.1;～0.2;秋水仙素、温度4 ～15℃、预处理时间3h、室温酸解法、10;盐酸、酸解时间为15 min时的中期分裂指数为128.6‰～128.9‰.[结论]材料不同则取材时间及秋水仙素预处理时间就有所不同.秋水仙素预处理时间、温度及酸解时间是影响新疆紫草染色体制片效果的关键因素.     

盐酸解离对果蝇唾腺染色体解聚与制片效果的影响

盐酸解离是果蝇唾腺染色体制片中的关键步骤,研究了盐酸浓度与处理时间对染色体解聚合与制片效果的影响.解离不充分时,压片后唾腺染色体仍团聚在一起;解离过度时,染色体结构受损,二者都达不到制片的要求.用2 mol/L盐酸处理20 min或者用3 mol/L盐酸处理15 min,染色体解聚适度,染色体分散,染色体臂及横纹均清晰可见,制片效果理想.用3 mol/L盐酸解离,所需时间短,更适合于制片观察.     

多倍体西瓜染色体制片技术改良及其核型分析

[目的]改良多倍体西瓜染色体标本制片技术,比较多倍体西瓜常规核型分析与荧光核型分析结果,为西瓜细胞遗传学研究及辅助构建西瓜物理遗传图谱提供参考依据.[方法]以多倍体西瓜为材料,以传统染色体制片方法去壁—低渗火焰干燥法为基础,去掉其前低渗和后低渗两个步骤,合并其再固定与火焰涂片两个步骤,用吉姆萨染色剂和荧光染料DAPI分别对多倍体西瓜染色体进行常规染色和荧光染色,并进行核型分析.[结果]使用改良型酶解去壁火焰干燥法进行多倍体西瓜染色体制片,比传统去壁—低渗火焰干燥法简化了用KCl溶液前低渗、后低渗及用卡诺固定液再固定3个步骤,可缩短制片时间1.0~2.0 h,提高制片效率,获得的染色体样本数目齐全、分散良好、形态清晰.用DAPI染色比用吉姆萨染色更容易检测到细胞中期分裂相,每张玻片可缩短检测时间0.5~1.5 h;染色体的着丝点、长臂及短臂形态更清晰.[结论]采用改良染色体制片方法可提高多倍体西瓜染色体的制片效率,对该制片进行荧光核型分析比常规核型分析更准确,效率更高.     

用于菊花品种核型分析的根尖压片技术研究

根尖压片技术是研究植物中期染色体数目和形态的一种重要方法。以2个大菊品种的根尖为材料,以典型中期分裂相的数目、中期染色体的分散程度、聚缩程度和中期染色体的清晰性为衡量制片效果优劣的标准,通过对比不同预处理药剂、取材时间、预处理温度、预处理时间长短以及解离时间条件下的制片效果,得出如下结论：当根长至1 cm时,在9：00~10：00取根,用饱和对二氯苯溶液在4℃条件下预处理4 h,然后用卡诺固定液固定22~24 h,用1 mol/L的HCl60℃下解离10 min,能够得到数量较多、染色体分散良好、染色体形态清晰以及染色体长度适中的中期分裂相。     

天然四倍体紫花地丁的体细胞染色体观察

[目的]了解药用植物紫花地丁的植物分类及区域分布,为其提供细胞学资料。[方法]分别随机采集50株野生紫花地丁的幼蕾及50株成熟野生紫花地丁的果实,经预处理后,对子房细胞及根尖细胞进行卡宝品红染色及染色体观察并计数。[结果]对50株野生紫花地丁的子房,用8-羟基喹啉溶液预处理,进行子房细胞染色体制片,经光学显微镜镜检后,共得到127个可染色体计数的子房细胞;50株野生紫花地丁的种子经发根培养,8-羟基喹啉溶液预处理,进行根尖体细胞染色体制片后,共得到92个可染色体计数的细胞。这219个可染色体计数的体细胞的染色体数目均为48。[结论]发现了一个紫花地丁的天然四倍体种群,其体细胞染色体数目为48。     

半微量全血培养法制备罗非鱼染色体标本的条件探索

鱼类染色体的制作方法最常用的是PHA体内培养肾细胞制片法,对野外没有良好设备的情况,此法尤为适用,但这种方法要求剖杀鱼,不利于鱼种的保存,尤其是对稀有鱼类和种鱼不太合适。因此建立一种一般实验室能够开展的方便稳定的染色体制片方法势在必行。大量研究证实采用鱼类外周血淋巴细胞培养制备染色体的方法能有效地解决这些问题 。本研究以罗非鱼为材料,对鱼类外周血淋巴细胞培养条件进行了探索,初步建立了能够制备优质染色体制片的方法,为进一步研究染色体的结构、基因定位、荧光原位杂交等奠定了基础。