圈养东北虎源猫杯状病毒的巢氏PCR检测及ORF2基因遗传进化分析

为了解猫杯状病毒(Feline calicivirus, FCV)在圈养东北虎中的流行情况,试验在黑龙江省海林市横道河子东北虎林园与哈尔滨市东北虎林园共采集东北虎血液样本40份,采用巢氏PCR对FCV进行检测,并对阳性PCR产物进行测序和遗传进化分析。结果表明：40份样品中共有4份检测为FCV阳性,阳性率为10%。4株测序毒株分别命名为HB-1516、HD-068、HD-079、HD101,与FCV参考株的核苷酸相似性为76.6%～88.3%;4株测序毒株处在同一分支,且与猫源FCV亲缘关系最近,但与常用疫苗株(F4、F9、F65、FCV2024株)处在不同分支。说明可能存在FCV由猫传染虎的情况,提示目前使用的疫苗不能起到完全保护作用。     

北京地区猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的遗传进化分析

猫泛白细胞减少症病毒(FPV)对猫科动物危害较大,病毒VP2基因在决定其抗原性和宿主范围中起重要作用。为了解FPV的流行状况及其VP2基因遗传变异和进化方向,本研究对北京地区宠物医院疑似感染FPV的猫采样,共采集到16份粪便样品;对FPV VP2基因进行PCR扩增和测序,得到12条长度1 755 bp的VP2序列;利用软件将获得的VP2基因序列与国内外报道的流行株进行同源性比对、遗传进化分析,结果显示,12条VP2序列均属于G1基因群,与参考株M38246相比亲缘关系较远。本研究为北京地区猫泛白细胞减少症的有效防控提供理论依据。     

猪流感病毒的分离及NA基因的遗传进化分析

通过鸡胚接种分离到3株猪流感病毒,经HI、RT-PCR鉴定,其中GXHZ株为H1N2亚型毒株,GXLZ、GXXY株为H3N2亚型毒株,并对分离株进行EID50测定及GXHZ株的猪体攻毒试验。所扩增分离到3株SIV病毒NA基因与A/Sw/Hainan/1/2005(H1N2)的核苷酸和氨基酸序列同源性最高。3株SIV分离株的NA基因在氨基端胞浆尾区均由K6→R6,在非极性跨膜区均由V20→M20。系统发育分析表明本试验所分离的3个SIV毒株与H1N2亚型毒株亲缘性最相近,且来源于猪源H1N2亚型流感病毒。从时间上也发现,3个分离株的NA基因与1996年以后获得的H3N2毒株亲缘关系很近,都隶属于一个亚分支。     

猫传染性腹膜炎病毒的检测及ORF 7ab、N和S基因遗传进化分析

采用剖检、组织病理学和免疫组织化学的方法检测并确诊了2例猫传染性腹膜炎(FIP)病例,并通过RT-PCR扩增2例组织样品中猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的ORF 7ab、N和S基因,测序后进行基因遗传进化分析,阐明病毒的遗传进化特征。结果显示,2个病例均表现典型的混合型FIP的大体病变,腹腔积满浆液纤维素性渗出物,在腹腔浆膜面散在或弥漫分布细小的灰白色结节。组织病理学显示腹膜表面上附着大小不等的炎性细胞浸润灶,以及坏死性肠炎、间质性胰腺炎和间质性肺炎。免疫组织化学染色结果显示,FPIV特异性的强阳性信号见于炎性细胞浸润灶、脾脏和胰腺内。基因同源性和遗传进化分析结果显示,2例基因均属于FCoVⅠ型。IMAU No.11685与浙江杭州ZJU1709毒株(MT239440)同源性最高,亲缘关系最近;IMAU No.11824与湖北武汉QS毒株(MW030108)同源性最高,亲缘关系最近。说明2例FIPV与国内流行毒株起源于共同祖先,其中ORF 7ab、N基因相对保守,变异不明显,S基因发生一定的变异。研究结果可为我国FIP的分子流行病学研究和防控提供参考。     

果子狸源细小病毒分离鉴定及VP2基因遗传进化分析

【目的】探究果子狸源细小病毒流行特点及其VP2基因遗传变异情况,为细小病毒防治提供理论依据和技术支撑。【方法】采用猫肾细胞(CRFK细胞)对患有肠炎的果子狸肠道组织样品进行病毒分离,通过血凝试验、免疫荧光试验鉴定分离的病毒,并对病毒VP2基因进行PCR扩增和遗传进化分析。【结果】分离到的毒株在CRFK细胞中培养出现细胞脱落、崩解和破碎等典型细小病毒细胞病变效应(CPE);血凝试验结果显示,此病毒可凝集猪红细胞,血凝效价为1∶512;免疫荧光试验结果显示,在接种分离毒株的CRFK细胞内可观察到亮绿色荧光,而对照细胞没有荧光。将分离毒株命名为MPCPV-SX。VP2基因进化树分析发现,其与犬细小病毒处于同一分支,位于CPV-2和CPV-2a型之间,同时VP2氨基酸的87和101位显示为CPV-2型,而300和305位氨基酸则与CPV-2a型一致。【结论】本研究成功从果子狸肠道组织样品中分离出1株细小病毒MPCPV-SX,其VP2基因是介于CPV-2和CPV-2a之间的中间型,表明细小病毒通过果子狸等野生动物跨越宿主流行传播,可能在细小病毒遗传进化方面起到一定的过渡作用。     

鸭圆环病毒ORF-C1基因的扩增及遗传进化分析

鸭圆环病毒(DuCV)感染能够引起鸭的免疫抑制,引起多种病原的继发性感染,在我国鸭群中广泛流行。为了解DuCV的遗传变异情况,对采自山东、江苏和贵州3个省份的19个鸭场的样品进行了PCR测定,并对DuCV的ORF-C1基因进行测序和遗传进化分析。PCR测定结果显示,19个鸭场中有9个鸭场的样品为DuCV阳性,总体阳性率为47.4%;ORF-C1基因序列测定结果显示,9株DuCV之间的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为93.4%～100%和82.2%～100%,与NCBI中已公布的DuCV毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为77.8%～99.5%和71.5%～-99.6%;遗传进化分析显示,9株DuCV全部属于DuCV-1b亚型,其中有7株在同一分支上,与D11-JW-001等韩国毒株遗传距离较近,另外2株则与山东、广西的毒株遗传距离较近;此外,与已公布的毒株相比,9株DuCV都在158位发生了氨基酸突变,由E/D变为L/P。上述结果表明,DuCV-1仍然为我国鸭群中的优势流行基因型,但病毒的基因也在不断地发生变异,应该对其进行持续监测。     

猪流行性腹泻病毒河南流行株S基因的克隆与遗传进化分析

近年来,我国大多省市暴发新生仔猪严重流行性腹泻,给养猪业造成巨大经济损失。为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)在河南省的流行和遗传变异情况,本研究对2014—2015年收集的30份临床腹泻样品,进行RT-PCR检测,对检测为阳性的PEDV样品进行S基因的克隆与序列分析。结果表明,30份临床腹泻样品中,RT-PCR检测出22个PEDV阳性样品,克隆的22条PEDV S序列与GenBank中发表的29条PEDVS基因序列核苷酸同源性为93.1%~99.2%。与经典毒株相比,22株河南流行株在S1区域存在碱基的插入、缺失现象;S基因遗传进化树表明,PEDV分为2群,河南流行株均属于PEDVП群,与近年国内分离株和韩国野毒株有较近亲缘关系,而与欧洲株以及中国目前使用的疫苗株亲缘关系较远,基因差异较大。     

鸡传染性喉气管炎病毒贵州株gD基因的遗传进化分析

为了解在贵州省开阳县某养鸡场分离的1株鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV贵州株)的遗传进化情况,试验设计、合成1对鸡传染性喉气管炎病毒gD基因引物,并通过扩增、克隆、测序该基因,分析其遗传进化情况.结果:PCR扩增基因为1134 bp.基因测序显示,ILTV贵州株与国内黑龙江、江苏、上海和国外澳大利亚、突尼斯、美国、意大利...     

东北虎中暑的诊治与预防

哈尔滨北方森林动物园位于黑龙江省黄金旅游线哈牡公路46 km处。公园占地面积558 hm~2,是国内占地面积最大的森林动物园。园区生态环境优良,植被丰富,森林覆盖率达95.8%以上。2010年6月24～27日期间哈尔滨遭遇了50 a以来最炎热的天气,最高温度在36℃以上。哈尔滨北方森林动物园同笼饲养2只1周岁的东北虎,相继发病,1只在6月24日下午发生急性死亡,从出现症状到死亡只有18 min,未经抢救和治疗就已经死亡,主要临床表现为神经症状和呼吸障碍。另1只东北虎在6月28日也发病,表现出与死亡的虎有类似的临床症状,根据前1只东北虎的剖检症状以及该东北虎的临床表现,初步诊断为中暑,制订了治疗方案,采取了有效措施降低体温、消除脑水肿、调整机体酸碱平衡、增强机体抵抗力,经过3d的静脉输液治疗以及接续的15 d恢复性治疗,该虎的临床症状消失,基本痊愈。     

猪流感病毒H1N1广东分离株HA基因的克隆与进化分析

采用常规的血清学试验和特异性RT-PCR,从广东不同地区猪场分离鉴定出8株H1N1亚型猪流感病毒(SIV)。用流感病毒血凝素(HA)基因通用引物扩增了8株病毒的血凝素(HA)基因,经克隆测序,HA基因全长1 757 bp,编码566个氨基酸。8个毒株的HA基因推导氨基酸序列分析表明,均含有8个潜在的N糖基化位点,且糖基化位点相同,其HA1、HA2之间切割位点序列为IPSIQSR↓G,从分子水平推论,此8株H1N1 SIV均属于非高致病性毒株。同源性分析表明,此8株病毒的氨基酸序列与经典SIV之间的同源性在92.3%~94.7%之间;与2009年甲型H1N1流感病毒同源性在80.4%~92.4%之间;与欧洲类禽SIV分离株同源性在80.4%~84.1%之间。进化关系表明,该8株SIV与A-swine-Shanghai-3-2005-H1N1同处一分支,与2009年甲型H1N1流感病毒和经典SIV分离株亲缘关系较近,与欧洲类禽SIV分离株亲缘关系较远。     

猫免疫缺陷病毒在医学中的应用

猫免疫缺陷病毒（Feline immunodeficiency virus，FIV）是一种主要感染猫的反转录病毒。FIV与人的免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）有许多相似性，可作为HIV的研究模型，如测量FIV病毒在动物体内的感染曲线，可为了解HIV在人体内的传播细节提供蓝图；利用FIV偏好感染发展中的神经系，可以帮助人们了解艾滋病（Acquired immure deficiency syndrome，AIDS）对神经系统的致病机理。FIV疫苗的研究获得成功，可为HIV疫苗的研制提供提示。FIV在基因治疗方面有重要的应用价值，目前应用FIV传递CFTR（cystic fibrosis transmembrane conductance regulator）的cDNA到呼吸系统表皮细胞治疗囊肿性纤维化（cysticfibrosis，CF）的研究已经取得了很大进展。     

猫免疫缺陷病毒在医学中的应用

猫免疫缺陷病毒(Feline immunodeficiency virus,FIV)是一种主要感染猫的反转录病毒.FIV与人的免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)有许多相似性,可作为HIV的研究模型,如测量FIV病毒在动物体内的感染曲线,可为了解HIV在人体内的传播细节提供蓝图;利用FIV偏好感染发展中的神经系,可以帮助人们了解艾滋病(Acquired immure deficiency syndrome,AIDS)对神经系统的致病机理.FIV疫苗的研究获得成功,可为HIV疫苗的研制提供提示.FIV在基因治疗方面有重要的应用价值,目前应用FIV传递CFTR(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator)的cDNA到呼吸系统表皮细胞治疗囊肿性纤维化(cystic fibrosis,CF)的研究已经取得了很大进展.     

江苏省羊口疮病毒的分离鉴定及B2L基因的遗传进化分析

为了解江苏省近年来羊口疮病毒（Orf virus,ORFV）的流行情况,更好地控制江苏地区的羊口疮病,2013~2015年采集江苏部分地区羊口疮疑似病料121份,进行病毒分离鉴定及其B2L基因的遗传进化分析。结果显示,样品中ORFV PCR检测阳性4份,用胎羊鼻甲骨细胞（OFTu）和MDBK细胞进行病毒分离,分离到4株病毒。这4株病毒分别命名为ORFV/Ovis/XZ/Jiangsu/2015/China、ORFV1/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China、ORFV2/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China和ORFV/Ovis/SL/Jiangsu/2015/China。扩增ORFV的B2L基因全长并绘制遗传进化树。B2L基因序列分析显示,4株分离株之间的核酸同源性为98.5%~100.0%。遗传进化树显示,ORFV/Ovis/XZ/Jiangsu/2015/China株、ORFV1/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China株和ORFV2/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China株与SC-JY、GX-YB、JS-FX株聚成一簇,核苷酸同源性为97.8%~100.0%。ORFV/Ovis/SL/Jiangsu/2015/China与LiaoNing、HuB、Gansu株亲缘关系接近,核苷酸同源性为98.8%~98.9%。4株分离株与中国疫苗株的核苷酸同源性为96.8%~98.1%。结果表明,江苏地区的ORFV来源可能不同,有必要开展更为深入的流行病学调查,为防控江苏地区的羊口疮奠定基础。     

Isolation and Identification of Orf Virus from Jiangsu Province and Phylogenetic Analysis of Their B2L Gene

The study was aimed to investigate prevalence of Orf virus (ORFV) in Jiangsu province in recent years and control Orf better. A total of 121 tissue samples were collected in some farms from 2013 to 2015 and subjected to PCR detection, viral isolation and phylogenetic analysis of B2L gene. Four samples were ORFV positive by PCR. The viruses were isolated by passaging in ovine fetal turbinate (OFTu) cells and MDBK cells, and were named as ORFV/Ovis/XZ/Jiangsu/2015/China, ORFV1/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China, ORFV2/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China and ORFV/Ovis/SL/Jiangsu/2015/China,respectively. The B2L gene was amplified and sequenced for the phylogenetic study. The nucleotide homology of these 4 strains was 98.5% to 100.0%. ORFV/Ovis/XZ/Jiangsu/2015/China, ORFV1/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China and ORFV2/Ovis/DT/Jiangsu/2015/China, gathered into a cluster with SC-JY, GX-YB, JS-FX isolates and the nucleic acid homology of these strains was 97.8% to 100%. ORFV/Ovis/SL/Jiangsu/2015/China gathered into a cluster with LiaoNing, HuB and Gansu isolates, the nucleic acid homology was 98.8% to 98.9%. The nucleic acid homologies of 4 strains and ORFV strain China vaccine was 96.8% to 98.1%. The result showed that the ORFVs in Jiangsu province might be from different source. For controlling the spreading of this virus, it was necessary to carry out deep epidemiological survey in Jiangsu province.     

东北虎主要消化腺的组织学研究

通过光镜对东北虎主要几种消化腺的H.E染色石蜡切片进行观察,结果表明,东北虎肝小叶间的结缔组织不发达,小叶的界限不清晰,肝细胞体积较大,核位于细胞一侧,肝细胞多呈索状排列,窦状隙不明显;胰腺外分泌部由腺泡和导管组成,腺泡形状不一,由单层锥状腺上皮细胞组成,胰岛是一些大小不等的细胞团和细胞索,分散于外分泌部之间,胞质染色较外分泌部浅;腮腺为纯浆液腺泡,胞质着色呈嗜酸性,颌下腺是以黏液性细胞为主,含少量的浆液性细胞半月。     

虎源猫瘟热病毒VP2蛋白特异性单克隆抗体的制备

以原核表达的虎源猫瘟热病毒(FPV)VP2蛋白作为免疫抗原,免疫6周龄BALB/c小鼠,用FPV全病毒作为筛选抗原,采用淋巴细胞杂交瘤技术,经过有限稀释法获得了1株可稳定分泌抗虎源FPVVP2蛋白的杂交瘤细胞株3C4。间接ELISA方法测定3C4株单抗腹水效价为1∶12800,亚类鉴定为IgG2a类型,间接免疫荧光试验显示该株单抗能与虎源FPV发生反应,而免疫印迹试验该株单抗未见特异性反应带。     

貉源犬瘟热病毒血凝素基因的克隆及序列分析

为了对1例貉源犬瘟热(CD)进行病毒检测并分析其血凝素H基因变异情况,本研究从1只疑似犬瘟热病死的貉采病料进行研磨,利用RT-PCR方法扩增犬瘟热病毒H基因,对扩增出的H基因片段进行克隆测序,并对得到的H基因序列进行分析。结果表明,该貉感染犬瘟热病毒,得到的H基因核苷酸和氨基酸序列与CDV野毒株同源性较高,分别为89.1%~98.0%和85.4%~97.5%。遗传进化分析表明其属于Asia-1型野毒株,N连接糖基化位点分析结果表明,该毒株在542aa处比参考野毒株多了1个潜在的N糖基化位点,在525aa-550aa间多出了1个抗原表位。