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目的了解新疆石河子地区动物性食品中单核细胞增生李斯特氏菌(LM)污染状况。方法在石河子地区选取5个具有代表性动物性食品零售点,对最常食用的生鲜猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、冻鸡肉、冻虾和冻带鱼8类动物性食品进行随机采样,采用病原分离培养和PCR法对样品中的单核细胞增生李斯特氏菌进行检测。结果检测8类249份食品样品,细菌分离鉴定阳性样品12份,平均阳性率4.82%;PCR法检测阳性样品36份,平均阳性率为14.46%。结论石河子动物性食品中LM的污染比较普遍,尤以冻鸡肉和冻虾LM污染较重,新鲜猪肉、牛肉和羊肉LM污染程度较轻。 相似文献
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应用PCR检测单核细胞增生性李斯特氏菌 总被引:1,自引:0,他引:1
单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria Monocytogenes,LM0)简称单增李氏菌,是一种重要的人畜共患病和食源性病原菌之一,可引起人和多种动物的脑膜炎、败血症及流产等症状,死亡率达30%~40%,对畜牧业生产和人类健康构成严重威胁。传统的分离鉴定方法检测周期长、操作繁琐,不能满足食品快速检测和疾病暴发时诊断的需要。而PCR方法具有检测速度快、操作简便和特异性强等优点。本试验通过扩增hly基因部分片段,建立单增李氏菌PCR检测方法。 相似文献
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单核细胞增生李斯特菌ActA单克隆抗体的制备 总被引:1,自引:1,他引:0
原核表达单核细胞增生李斯特菌(Lm)ActA蛋白并进行亲合层析纯化,以Lm全菌为免疫原、以纯化的表达蛋白为检测抗原制备Lm单克隆抗体,共获得4株抗Lm ActA单克隆抗体。其中3G6、4E10和2B9为IgG1亚类,2B4为IgM亚类;检测腹水抗体效价,3G6和4E10为1∶64 000,2B9为1∶32 000;3G6、4E10和2B9的亲和常数分别为6.62×107L/mol、5.67×107L/mol和7.15×106L/mol;3G6、2B4和4E10为Lm ActA特异性单抗,2B9为致病性李斯特菌特异性单抗。所制备的单抗为Lm检测方法的建立奠定了基础。 相似文献
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应用环介导等温扩增技术快速检测单核细胞增生李斯特菌的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立环介导等温扩增技术快速检测单核细胞增生李斯特菌。方法根据单核细胞增生李斯特菌(LM)hlyA基因序列中的保守区域,采用在线引物设计软件Primer Explorer4.0进行设计,获得一套特异性的环介导等温扩增(LAMP)引物,对单核细胞增生李斯特菌hlyA基因进行LAMP扩增,并与常规PCR方法进行比较。结果建立的LAMP方法能成功扩增出梯形条带,LAMP检测单核细胞增生李斯特菌纯培养物和人工染菌的灵敏度为5.44×102cfu/mL,而对照PCR检测的灵敏度为5.44×104cfu/mL。对10株细菌进行LAMP扩增,仅单核细胞增生李斯特菌得到阳性结果。从DNA提取到报告结果,耗时仅1h。结论 LAMP检测单核细胞增生李斯特菌灵敏度高,特异性强,耗时短,方法简便,有望发展成为快速检测食品中单核细胞增生李斯特菌的有效手段。 相似文献
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为建立单核细胞增生李斯特氏菌(Lm)的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测方法,本研究以Lm的iap基因为目的片段设计特异性引物,建立了可在65℃恒温扩增快速(90 min)检测Lm的HDA检测方法,分别对反应体系中的MgAc2、Bst聚合酶、UvrD解旋酶、dNTPs以及引物等的浓度进行优化,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明,所建立起的检测法最低检测限为7.8×103 cfu/mL,灵敏度与普通PCR方法相当。Lm的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,具有良好的应用前景。 相似文献
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《中国兽医杂志》2017,(8)
单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)作为四大重要食源性病原菌之一,对人类及多种畜禽健康威胁极大。LM细胞胞壁表面分布多种毒力蛋白,在感染机体过程中发挥重要作用,其中有一类至关重要的表面蛋白其C末端含有保守基序LPXTG,分选酶A能够识别基序LPXTG,共价结合到肽聚糖上,呈现在细胞表面发挥毒力作用。本试验以不同食品中分离得到的24株单增李斯特菌为试验对象,设计合成了41对预测含LPXTG基序表面蛋白的引物,利用PCR技术进行扩增,凝胶电泳成像系统检测扩增产物片段大小,计算24株食品源单增李斯特菌LPXTG基序表面蛋白的携带。结果表明,不同LM分离株LPXTG蛋白基因的携带率不同:其中仅有12.5%(3/24)的分离株携带率在85%以上;不同LPXTG蛋白基因的检出率不同,在41个检测对象中,有8个基因的检出率100%,有3个基因的检出率不足20%,Lmo1115基因在所有分离株中均未检测到。本研究对了解食品源LM分离株的LPXTG蛋白基因的分布以及探明食品源LM的致病性具有重要意义。 相似文献
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《中国兽医学报》2019,(12):2380-2385
单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)作为四大重要食源性病原菌之一,对公共安全及畜牧业发展威胁极大。其毒力岛4(LIPI-4)是新发现的一个潜在毒力因子,与LM的神经感染和母胎感染密切相关。以54株食源性LM的DNA为模板,针对LIPI-4的6段基因设计特异性引物,利用PCR的方法检测LIPI-4的携带情况并对携带株的LIPI-4基因进行生物信息学分析。结果表明,54株LM中有5株携带LIPI-4基因,携带率为9.26%;5株食源性LM LIPI-4基因的同源性均为100%,与CC1代表株LM09-00558 LIPI-4基因的同源性99%以上;对LIPI-4中EIIC结构域分析表明5株食源性LM LIPI-4均为PTS~(Lac)家族。食源性LM携带LIPI-4基因且属于PTS~(Lac)家族,研究LIPI-4基因对进一步了解LM的致病性具有重要意义。 相似文献
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单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
为建立单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)的快速检测方法,本研究以LM iap基因为靶基因设计合成引物及TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR快速检测LM的方法。结果显示,对15株试验菌株进行实时荧光定量PCR检测,只有LM菌株检测为阳性,表明该检测方法特异性强;该方法的灵敏度为6.5 CFU/mL;稳定性和重复性试验结果表明,同一样品重复检测4次Ct值的变异系数均小于2%;利用该检测方法对采集的139份样品进行检测,共计检出3份LM阳性样品,与国标法(GB 478930-2010)检测结果一致。该检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,具有良好的实用性。 相似文献
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LI Dan-dan XU Yi-gang LI Meng-yuan WANG Yu QIU Suo-ping GAO Hui-jiang GAO Shen-yang 《中国畜牧兽医》2016,43(6):1453-1457
To establish a rapid assay for Listeria monocytogenes(LM) detection,a Real-time PCR method was developed targeting iap gene of LM.The results showed that the test for 15 bacteria strains,only LM was positive,indicated that the method had high specificity.In addition,the sensitivity of Real-time PCR was 6.5 CFU/mL.Stability and reproducibility of the test showed that the coefficient of variation for the same sample repeat the Ct values were less than 2%.Furthermore,a total of 3 positive samples for LM were detected from 139 clinical samples by the method,which was in accordance with the testing result by GB 478930-2010 standard detection protocol.Therefore,the Real-time PCR method provides a novel rapid,sensitive and good repeatability detection method for LM infection. 相似文献