IFNGR在山羊腹腔肠系膜前神经节的表达

【目的】为了解山羊腹腔肠系膜前神经节（celiac cranial mesenteric ganglion, CCMG）是否具备接受γ-干扰素（interferon-γ, IFN-γ）作用的条件,即是否有IFN-γ受体（interferon-γ receptor, IFNGR）存在。【方法】取健康雌、雄性成年山羊的CCMG,经40 g·L^-1多聚甲醛磷酸缓冲固定液固定4 h后,用自来水冲洗10 h,经梯度酒精脱水、二甲苯透明、石蜡包埋后,制作石蜡切片。石蜡切片分4套：第1套做H.E.染色;第2套经脱蜡复水,抗原热修复后,再进行免疫组化SP法染色;第3套经免疫组化SP法染色后用苏木精复染;第4套用作阴性对照组。染色后在光学显微镜下观察记录切片,使用Motic数码显微镜下拍照后,对图片分析处理,计算CCMG的IFNGR相对表达量。将相对表达量数据用SPSS18.0软件分析处理,并利用单因子方差分析（One-way ANOVA, LSD）进行显著性检验。取健康雌性、雄性成年山羊的CCMG,经充分研磨后,使用总RNA提取试剂盒提取总RNA,再以牛的IFNGR1 cDNA序列为模板设计IFNGR1的引物,克隆山羊IFNGR1 cDNA序列并进行扩增。将扩增产物使用琼脂糖凝胶电泳检测是否有目的条带,并进行DNA双向测序。将测序结果在NCBI上进行比对和确认,并与其他的物种的序列进行了同源性比对。【结果】免疫组化染色显示,在CCMG内IFNGR免疫阳性产物分布广泛,在神经元胞体、卫星细胞及神经纤维中均有不同程度的着色。其中神经元均为IFNGR免疫阳性。几乎所有的神经元胞质为黄褐色,IFNGR呈中等阳性,仅有少数神经元胞质染色弱为淡黄色,IFNGR呈弱阳性;在神经元细胞核中,核质部分明显呈棕褐色,IFNGR为强阳性,而核仁染色相对较弱或无着色,IFNGR为弱阳性或阴性。在非神经元结构中,卫星细胞染色呈棕褐色或棕色,IFNGR为强阳性或中等阳性。神经纤维和血管内皮细胞为黄褐色或淡黄色,IFNGR为中等阳性或弱阳性。图像分析表明与其他非神经元结构成分相比,神经元胞体IFNGR的相对表达量差异性极显著（P＜0.01）。PCR检测结果显示,IFNGR1 PCR产物的泳道在300 bp与400 bp处看到一个清晰的白色条带。测序结果显示,在山羊CCMG中克隆出了376 bp的IFNGR1的部分cDNA序列。通过在NCBI上与其他物种的基因序列同源性比对显示,这段序列与绵羊的同源性最高（98%,XM_004011371.1）,其次为牛（97%,NM_001035063.1）,野猪（84%,NM_001177907.1）,家兔（73%,XR_085137.1）,与褐家鼠（66%,NM_053783.1）的同源性最低。【结论】在山羊CCMG中有IFNGR的表达与分布,并且IFNGR主要在交感节后神经元表达与分布。所以CCMG具备对IFN-γ刺激做出反应的条件,CCMG的交感节后神经元可能是 IFN-γ作用的主要靶细胞,提示山羊CCMG可能作为IFN-γ对胃肠道免疫调节途径和自主神经对胃肠道调节的神经途径之间相互协调的关键点。     

催产素受体在雌性山羊颈前神经节中的分布

【目的】研究催产素受体(Oxytocin Receptor,OTR)在雌性山羊颈前神经节中的分布情况。【方法】以健康未怀孕的成年雌性山羊为研究对象,采用SP免疫组织化学染色法研究雌性山羊颈前神经节中OTR的分布特点。【结果】OTR在雌性山羊颈前神经节中分布广泛,OTR免疫阳性产物主要分布在神经元胞质,有的呈黄褐色,为中等阳性,有的呈棕褐色,为强阳性;细胞核呈空泡状,着色极淡或不着色,为阴性。支持细胞和血管内皮细胞内也有少量OTR阳性产物存在,呈淡黄色,为弱阳性。图像分析表明,颈前神经节内神经元细胞OTR的相对表达量与非神经元差异极显著(P0.01)。【结论】在雌山羊颈前神经节中,OTR主要分布于神经元中,说明颈前神经节的交感节后神经元具备接受OT调节的条件,提示颈前神经节的交感节后神经元可能是OT对头颈部内脏器官进行内分泌调节以及颈前神经节对颈部内脏器官进行神经调节2种途径相互协调作用的节点。     

雌激素α、β受体在雌性山羊腹腔肠系膜前神经节的分布

为探讨山羊腹腔肠系膜前神经节在雌激素影响胃肠道机能活动中的作用和意义,取雌性山羊腹腔肠系膜前神经节,经免疫组化SP法染色后,在数码显微镜下拍照、测量,用高清晰图像分析系统对雌激素受体(ER)的分布特点进行分析,并计算相对表达量。雌激素受体在腹腔肠系膜前神经节的神经元、支持细胞和过路纤维均有ERα、ERβ受体免疫阳性产物分布,但主要分布于神经元胞体。在神经元胞体中,细胞膜和细胞质为强阳性染色,而细胞核为弱阳性染色。ERα在神经元胞体的相对表达量显著高于非神经元胞体结构(P0.05),ERβ在神经元胞体的相对表达量极显著高于非神经细胞结构(P0.01)。雌性山羊腹腔肠系膜前神经节神经元具有对雌激素刺激反应的受体,提示腹腔肠系膜前神经节可能作为雌激素作用于胃肠道的内分泌途径和自主神经对胃肠道调节的神经途径之间相互协调的网络节点。     

FSH受体在雌山羊腹腔肠系膜前神经节的分布

为探讨雌山羊腹腔肠系膜前神经节是否具备FSH调控胃肠功能活动的条件,取成年雌山羊的腹腔肠系膜前神经节各5对,经免疫组织化学SP法染色后,观察FSH受体在腹腔肠系膜前神经节的分布特点。结果显示,在腹腔肠系膜前神经节内,FSH受体免疫阳性产物主要存在于神经元的细胞质,为强阳性或中等阳性染色,而细胞核呈空泡状,不着色。另外,在神经节内过路纤维、施万细胞中FSH受体呈弱阳性染色。图像分析表明,该神经节内神经元胞体的FSH受体相对表达量极显著高于其他非神经元胞体结构(P0.01)。说明雌山羊腹腔肠系膜前神经节神经元是FSH作用的主要靶细胞,提示FSH可能通过影响腹腔肠系膜前神经节的神经元活动,从而影响其发出的交感节后神经,对胃肠器官功能活动进行调控。     

雌激素α、β受体在雌性山羊星状神经节的分布

【目的】研究雌性山羊星状神经节中雌激素受体(Estrogen receptor,ER)的分布特点,探讨雌性山羊星状神经节神经元对雌激素是否具有反应性。【方法】取雌性山羊星状神经节,制作石蜡切片,经免疫组化SP法染色后,在数码显微镜下拍照,用高清晰图像分析系统对ER的分布特点进行分析,并计算相对表达量。【结果】在星状神经节的神经元胞体、卫星细胞和过路纤维中均有ERα、ERβ免疫阳性产物分布,但主要分布于神经元胞体。在神经元胞体中,细胞膜和细胞质为强阳性染色,而细胞核为弱阳性染色。ERα在神经元胞体中的相对表达量显著高于非神经细胞结构(P0.05),ERβ在神经元胞体中的相对表达量极显著高于非神经细胞结构(P0.01)。【结论】雌性山羊星状神经节神经元具有对雌激素刺激反应的受体,提示星状神经节可能作为雌激素作用于心血管的内分泌途径和自主神经对心血管调节的神经途径之间相互协调的网络节点,从而对心血管系统起调节作用。     

孕激素受体在雌性山羊肠系膜后神经节的表达

【目的】探究肠系膜后神经节是否对孕激素具有反应性。【方法】试验选取雌山羊肠系膜后神经节,经免疫组织化学SP法,检测孕激素受体（progestogen receptor,PR）在肠系膜后神经节的表达及分布情况。【结果】孕激素受体阳性神经元在雌山羊肠系膜后神经节广泛存在,强阳性产物存在于神经元胞核中,阳性产物存在于整个神经元胞体以及神经元核仁中。在神经节中神经纤维,微血管及毛细血管内皮细胞中也出现了阳性产物。【结论】在雌山羊肠系膜后神经节中存在孕激素受体。     

催产素受体在山羊结状神经节的分布

为研究山羊结状神经节（Nodose ganglion,NG）的神经细胞内是否具备接受催产素（Oxytocin,OT）调节的条件。选取成年山羊结状神经节,采用免疫组化 SP 法检测催产素受体（Oxytocin receptor,OTR）在结状神经节内各种结构上的分布特点,用Image-pro plus 6.0分析结状神经节神经细胞和非神经细胞结构的催产素受体表达差异性。结果表明,结状神经节内OTR免疫阳性产物分布广泛,神经细胞、过路神经纤维、血管内皮细胞、支持细胞和雪旺细胞均有不同程度的着色。神经细胞胞核和支持细胞着色最深,为棕褐色,OTR分布强阳性。大部分神经细胞胞质着色为黄褐色,OTR分布中等阳性,这部分神经细胞胞质约占神经细胞总数的78%。血管内皮细胞、细胞膜,以及一小部分神经细胞胞质着色较浅,为淡黄色,OTR分布弱阳性。神经细胞胞核的核仁呈圆形,着色极浅或不着色,OTR分布阴性。图像分析表明神经细胞胞体的相对表达量与其他非神经结构差异极显著。OTR免疫阳性产物在山羊NG中广泛表达,且主要分布在NG内脏感觉神经细胞内,提示催产素有可能作用于NG内脏感觉神经细胞,从而通过内脏反射弧传入神经纤维影响内脏器官活动,而NG可能成为OT对内脏器官进行内分泌调节和通过自主神经对内脏器官进行神经调节两者相互协调作用的节点。     

LHR在雌性山羊颈前神经节中的分布

采用免疫组织化学SP法检测促黄体生成素受体(LHR)在雌性山羊颈前神经节(SCG)中的分布特点及表达情况。结果显示,在雌性山羊SCG中,LHR免疫反应阳性物质主要分布在神经元胞体的胞膜和胞质中,为LHR强阳性或中等阳性。部分神经元胞体可见其突起,为LHR中等阳性。图像分析表明,LHR在神经元和非神经元中的表达量呈极显著差异(P0.01)。研究表明,SCG具备接受LH作用的条件,提示LH可能会影响SCG交感节后神经元胞体对其支配的头面部腺体、血管以及眼睛、咽喉等器官的调控作用。     

LH受体在雌性山羊肠系膜后神经节中的分布

【目的】探讨促黄体生成素(LH)是否可以通过影响雌性山羊肠系膜后神经节(CMG)参与动物机体生殖活动的调节。【方法】取5只未怀孕健康成年雌性山羊肠系膜后神经节,于多聚甲醛中固定,经石蜡包埋并制作厚度7μm的连续石蜡切片后,采用免疫组织化学SP染色方法观察雌性山羊CMG中LH受体(LHR)的分布特点,并计算LHR免疫反应阳性细胞的相对表达量。【结果】在CMG中,神经元细胞均为LHR免疫阳性反应,多数细胞呈中等阳性,少数细胞呈强阳性,LHR免疫阳性产物主要分布在神经元的细胞膜、细胞质和细胞核膜上,但细胞核为阴性反应。神经纤维和卫星细胞中的LHR免疫阳性产物为弱阳性表达。神经元细胞上LHR的相对表达量(7.057±0.797)极显著高于其他非神经元细胞(1.497±0.690)(P<0.01)。【结论】CMG中神经元细胞是LH发挥作用的主要靶细胞,提示CMG神经元细胞中存在的LHR可能是协调LH对生殖器官的内分泌调节和自主神经对生殖器官的神经调节的中转站。     

IFN-γ在怀孕早期山羊下丘脑-垂体-性腺轴的表达

为了探讨γ-干扰素(in terferon-,γIFN-γ)在下丘脑-垂体-性腺轴(hypotha lam ic-p itu itary-gonada lax is,HPG轴)中的免疫调节作用,应用免疫组织化学SP法对IFN-γ免疫反应阳性产物在怀孕早期山羊HPG轴的分布特点进行了研究。结果显示,IFN-γ分布于乳头体内侧核、视前内侧核、下丘脑前区、腹内侧核、连接核、室旁核、视上核等20个核团中,各部分核团细胞着色程度深浅不一;在视上核、室旁核分泌部、乳头体内侧核等有大量的阳性神经纤维;同时在室周核、视前外侧核、视前内侧核等13个核团中散布有一些阳性星形胶质细胞,与阳性神经细胞交错共存;腺垂体中腺细胞和神经垂体中神经纤维均有IFN-γ表达;卵泡和黄体中也有IFN-γ存在。表明IFN-γ与动物的神经内分泌活动关系密切,参与了免疫-神经-内分泌网络中的生殖免疫调节。     

LCGR在山羊星状神经节的分布及其意义

【目的】检测促黄体激素/绒毛膜促性腺激素受体（luteinizing hormone/choriogonadotropin receptor,LCGR）在山羊星状神经节（stellate ganglion,SG）中是否存在,探讨促黄体激素（luteinizing hormone,LH）和绒毛膜促性腺激素（choriogonadotropin,CG）是否可以影响星状神经节的活动。【方法】取雄性和雌性成年山羊的星状神经节各5对,经免疫组织化学SP法后,观察LCGR在星状神经节的分布特点,Image-Pro Plus 6.0 (IPP 6.0)软件图像半定量分析技术,分析星状神经节中的神经元和非神经元的LCGR分布差异。【结果】山羊星状神经节的神经元和非神经元均有不同程度的阳性染色。LCGR强阳性产物分布于神经元的胞质中和神经突起上,但细胞核中无LCGR分布;卫星细胞、血管内皮细胞的胞质中有弱阳性产物,LCGR在神经元和非神经元中的表达量呈极显著性差异（P＜0.01）。【结论】LCGR受体广泛分布于山羊星状神经节中,且主要分布于神经元的细胞质中和细胞膜上,星状神经节具备接受LH和CG调节的条件。     

山羊白细胞介素-18成熟蛋白的表达

 【目的】为了阐明重组蛋白的活性，置备具有生物学活性的重组白细胞介素18，应用于畜牧业生产。【方法】将含有山羊白细胞介素（gIL）-18基因的重组质粒pET-32a（+）在大肠杆菌BL21（DE3）中以1mmol•L-1 IPTG诱导4h或者更长时间进行表达。【结果】经SDS-PAGE试验检测到了gIL-18与pET载体融合表达的重组蛋白。以该重组蛋白与佐剂混合后，免疫小鼠制备多克隆血清。经Western-blotting 试验证实该重组蛋白具有免疫原性。经过包涵体变性、层析柱纯化和复性，证实该蛋白具有诱导MDBK细胞分泌IFN-γ和刺激PBMC增殖的生物学活性。这表明重组蛋白保留了天然蛋白大部分的生物学活性。另外，该重组蛋白还可以保护小鼠抵御PRV强毒的攻击。【结论】这为gIL-18作为免疫佐剂和免疫治疗剂的实际应用奠定了基础。     

山羊不同组织中IGFBP-5 mRNA的发育表达模式

[目的]探讨IGFBP-5基因在山羊出生后不同组织的发育性表达模式。[方法]采用荧光定量PCR,分析了出生后0、15、30、60、90和120d36只南江黄羊（公、母羔各18只）的心脏、肝脏、脾、肺、背最长肌、半膜肌、臂三头肌和股二头肌样品中IGFBP-5mRNA水平。[结果]母羔的IGFBP-5mRNA表达丰度显著高于公羔。各组织IGFBP-5mRNA表达量呈现肝脏〉肺〉脾（心脏）〉肌肉的趋势（P〈0.01）,脾与心脏间差异不显著（P〉0.01）,肌肉的表达值最低。随着日龄的增加,各组织中IGFBP-5mRNA丰度均呈现下降-上调-下降的发育性表达模式,而肝脏和肺中的表达模式具有明显的性别差异。[结论]IGFBP-5mRNA主要在内脏,尤其是肝脏中合成,但在各组织的发育性表达模式一致,性别是一个重要的影响因素。     

孕激素受体在雌性山羊颈动脉体的分布

为了证实孕激素受体是否存在于雌性山羊颈动脉体。取雌性山羊的颈动脉体,经免疫组织化学SP法染色后,观察孕激素受体在颈动脉体的分布特点。结果表明,在雌性山羊的颈动脉体的Ⅰ型细胞、Ⅱ型细胞、血管内皮细胞均有不同程度的阳性染色。Ⅰ型细胞中PR强阳性产物分布于细胞膜,中等阳性产物分布于整个细胞质中;Ⅱ型细胞和血管内皮细胞有强阳性产物分布。证实孕激素受体在雌性山羊颈动脉体中分布广泛,提示颈动脉体可能接受孕激素的调节,这为研究孕激素非生殖调节功能及颈动脉体的神经内分泌调节机制提供了形态学依据。