免疫鸡群新城疫病毒强毒株感染的实验研究

ＳＰＦ试验鸡在８、２５日龄时接受了２次新城疫基础免疫，６０日龄时分别以标准新城疫病毒强毒株，中等毒力和弱毒疫苗株人工感染攻毒。应用单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒，对所有试验鸡泄殖腔棉拭样品进行了３０ｄ的连续检测。结果表明：从攻毒后第３ｄ起强毒株试验组检测出多例阳性，检出高峰分别在攻毒后第４￣６ｄ和１１￣１５ｄ，与鸡群症状表现的时间相一致；中等毒力和弱毒疫苗株对照组均呈检测阴性。本研究证明单抗ＥＬＩＳＡ试剂盒     

免疫鸡群感染新城疫强毒后群体带毒情况和对生产指标的影响

应用新城疫病毒单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ试剂盒对一新城疫强毒感染群连续监测，检测泄殖腔拭子带毒情况和ＨＩ抗体效价，结果在鸡群发病后３０７ｄ仍可以测出强毒。且随着时间的推移和鸡群ＨＩ抗体水平的下降，强毒感染率呈上升趋势，表明免疫鸡群感染新城疫强毒后，强毒可在群内循环传播和长期维持。     

免疫鸡群感染新城疫强毒后群体带毒情况和对生产指标的影响

应用新城疫病毒单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ试剂盒对一新城疫强毒感染鸡群连续监测,检测泄殖腔拭子带毒情况和ＨＩ抗体效价,结果在鸡群发病后３０７ｄ仍可以测出强毒。且随着时间的推移和鸡群ＨＩ抗体水平的下降,强毒感染率呈上升趋势,表明免疫鸡群感染新城疫强毒后,强毒可在群内循环传播和长期维持。采用疫苗免疫把强毒感染率控制在一定水平而不致暴发新城疫,则鸡群可以保持较好的生产性能。而当强毒感染率上升较大时,则生产性能下降明显,死淘率也上升。     

单抗夹心ELISA检测免疫鸡群新城疫病毒

用SPF鸡胚将送检的免疫鸡群泄殖腔棉拭样品盲传一代，再用新城疫单抗夹心ELISA对F1代尿囊液进行新城疫病毒(NDV)快速检测，同时用世界动物卫生组织(OIE)推荐的NDV分离及鉴定的方法加以验证。通过对3423份样品的检测，检出阳性样品453份，阴性样品2959份，可疑样品11份，两种方法的阳性符合率为99．3％，阴性符合率为99．7％。对全部阳性样品进行病毒分离，经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验证明均含有新城疫病毒(NDV)，再将全部阳性样品分离物进一步作毒力鉴定，结果有强毒力株、中等毒力株及弱毒力株，因此用新城疫单抗夹心ELISA检测免疫鸡群泄殖腔棉拭样品F1代尿囊液新城疫病毒快速、准确率高，呈阳性者不全是NDV强毒力株感染，还有NDV中等毒力株或弱毒力株感染。     

新城疫病毒广西强毒株的分离与鉴定

从广西某规模化鸡场两个鸡群病死雏鸡中分离到2株有血凝性的病毒，这2株病毒的血凝性均能被新城疫标准阳性血清抑制和中和，经过血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验、血清中和试验和RT-PCR检测结果，确定为新城疫病毒。2株病毒的鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为52和54h，脑内致病指数(ICPI)分别为1．975、1．875；鸡胚半数致死量(ELD50)分别为：10^-9.38／0.1mL、10^-9.68／0．1mL，实验结果证明该2株病毒为新城疫病毒强毒株。     

鸡新城疫病毒强毒株的分离与鉴定

从河北、天津、北京等省市发病鸡群中分离到8株有血凝性的分离物,其血凝作用可被新城疫阳性血清所抑制,而不能被AIV(H9亚型)、EDS76阳性血清所抑制,表明8株分离物均为新城疫病毒。利用鸡胚终点稀释法对这8株NDV进行了克隆。对8株NDV的毒力指数(MDT、ICPI、IVPI)测定结果显示:MDT在42 9～49 5h之间,ICPI在1 95～2 00之间,IVPI在2 68～2 89之间。表明8株NDV均为新城疫病毒强毒株,其毒力与标准强毒株F48E8相近。各分离毒株经2%磷钨酸负染后,电镜下观察,可见丝状、圆形或不规则形态的病毒粒子,表面有纤突样结构。各毒株的大小不尽相同,粒子直径或长轴在100～500nm之间。     

应用单抗ELISA试剂盒检测免疫鸡群新城疫强毒感染

新城疫（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅ,ＮＤ）是鸡的一种烈性病毒性传染病〔４〕。尽管国内外已知的新城疫病毒（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ,ＮＤＶ）毒株达数百种之多,毒力差异很大,但是其血清型只有一个。由于疫苗的广泛使用,从现场免疫鸡群...     

中药复方抗鸡新城疫病毒作用研究

[目的]探讨中药复方抗鸡新城疫病毒（NDV）的作用机理,为临床合理使用抗病毒性药物提供科学的理论依据。[方法]以白花蛇舌草、金银花、黄芪和甘草组成中药复方,制备成中药复方流浸膏并配制成不同浓度梯度的药液;测定中药复方对鸡成纤维细胞（CEF）最大无毒浓度,并测定NDV在CEF上半数感染力（TCID50）;设中药复方不同浓度组,正常细胞和NDV感染细胞对照组,采用3种不同的作用方式作用于各组以检测中药复方抗NDV活性,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT法）测定OD值,以治疗指数为评价指标。[结果]中药复方对CEF的最大无毒浓度为2-6g/ml,NDV对CEF的TCID50为10-7.3;第①种作用方式中药复方的最小有效浓度是2-10g/ml,第②种作用方式为2-8g/ml,第③种作用方式为2-7g/ml。[结论]第①种作用方式对病毒的灭杀作用最强,第②种作用方式次之,第③种对病毒的灭杀作用最弱。表明中药复方不仅具有细胞外直接杀灭病毒作用,而且还具有抑制病毒吸附、穿入、复制和成熟的某一环节,为研究中药抗病毒的作用机理及临床应用提供了可靠的试验依据。     

新城疫病毒分子生物学研究现状

本文详尽地介绍了新城疫病毒近几年的研究进展，着重从病原因组特性，编码蛋白，致病机理以及基因工程活载体苗的研究上做了综述概述，为新城疫病毒的深入研究奠定了基础。     

应用聚乙二醇介导的单抗夹心ELISA监测湖南新城疫病毒强毒感染

采用新城疫病毒强毒快速检测法聚乙二醇介导的单抗夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）对湖南省新城疫病毒（NDV）强毒感染进行了监测，共检测来自30个新城疫发病群和28个无明显新城疫病症群共58个禽群的泄殖腔棉试样品1719份，并对97份样口进行了病毒分离鉴定。结果表明，NDV强毒感染的禽种多，易与其他疫病混合感染，免疫鸡群在发生形式上呈非典型化趋势，养禽场普遍存在NDV强毒且临诊健康群有一定比例的强毒感染率，这些是目前ND难以控制和净化的主要原因。结果还表明，所采用的ELISA是监测NDV强毒感染并指导免疫的可靠的快速检测方法。     

一步法复合RT-PCR鉴别ND强毒与AI病毒的研究

根据新城疫病毒（NDV）融合蛋白和禽流感病毒（AIV）核蛋白的核酸序列设计2对引物,对NDV和AIV的特异扩增片段分别为156bp和219bp,建立了同时检测强毒力NDV和AIV核酸的一步法复合RT—PCR。试验中未能检出弱毒力NDV,IBV,IBDV,REV,REOV及SPF鸡肌肉组织的RNA,从不同年代分离的16个NDV强毒株全为阳性而NDV弱毒株全为阴性。经验证,复合引物与单一引物的扩增效率一致,能够检出NDV和H;亚型AIV的最低病毒量分别为10^3.7EID。和10^3.9EID50。试验结果表明,此次建立的一步法复合RT—PCR特异、敏感,适用于强毒力NDV和AIV．感染的快速鉴别。     

应用新城疫单抗酶联试剂盒快速诊断绿孔雀新城疫

应用新城疫单抗酶联试剂对一群发生疑似新城疫的绿孔雀群进行快速诊断,采用肛门泄殖腔棉拭取样方法对病孔雀取样,应用双单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验检出多数病死孔雀新城疫强毒抗原阳性,诊断该群绿孔雀发生了新城疫。用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检、病毒分离、鉴定和毒力试验的经典诊断方法及新城疫疫苗紧急防疫效果观察验证表明,新城疫单抗酶联试剂盒诊断孔雀新城疫简便、快速、准确。     

鸭源新城疫病毒和减蛋综合征病毒在同一鸭胚中增殖的观察

用鸭源新城疫病毒（ＮＤ）Ｄ１０株和减蛋综合征（ＥＤＳ—７６）病毒ＧＣ２株同时在同一鸭胚中复制增殖．结果表明：（１）两种病毒同时感染同一鸭胚后，鸭胚平均死亡时间（ＭＤＴ）７３．６ｈ，死亡率８８．２％（１５／１７）．胚体皮肤出血、淤血，绒毛尿囊膜水肿、增厚，尿囊液能凝集人和鸡红细胞．（２）尿囊液感染鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞，致细胞病变（ＣＰＥ），证实尿囊液中存在ＮＤＶ．用间接法Ｄｏｔ—ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ—７６病毒抗原，结果为阳性．（３）电镜观察经提纯浓缩后的尿囊液，可见到两种病毒粒子：ＮＤＶ形态不一，多数直径约１２０～１３０ｎｍ或更大．有囊膜；ＥＤＳ—７６病毒呈圆形，直径约７０ｎｍ，有囊膜．（４）用血凝试验（ＨＡ）测定两种病毒．其生长规律与单独接种时一致．（５）接种灭活的含毒尿囊液的雏鸡，在血清中出现抗两种病毒的ＨＩ抗体及抗ＥＤＳ－７６病毒的中和抗体，对ＮＤＶ强毒攻击有坚强的免疫力。     

一步法复合RT-PCR鉴别ND强毒与AI病毒的研究

根据新城疫病毒(NDV)融合蛋白和禽流感病毒(AIV)核蛋白的核酸序列设计2对引物,对NDV和AIV的特异扩增片段分别为156 bp和219 bp,建立了同时检测强毒力NDV和AIV核酸的一步法复合RT-PCR.试验中未能检出弱毒力NDV,IBV,IBDV,REV,REOV及SPF鸡肌肉组织的RNA,从不同年代分离的16个NDV强毒株全为阳性而NDV弱毒株全为阴性.经验证,复合引物与单一引物的扩增效率一致,能够检出NDV和H5亚型AIV的最低病毒量分别为103.7EID50和103.9EID50.试验结果表明,此次建立的一步法复合RT-PCR特异、敏感,适用于强毒力NDV和AIV感染的快速鉴别.     

传染性法氏囊病鸡各脏器组织含毒量的测定

采用反向间接血凝试验和夹心ＥＬＩＳＡ试验两种方法对法氏囊病自然和人工感染病鸡各脏器、组织中含毒量进行检测。结果表明，反向间接血凝试验和夹心ＥＬＩＳＡ两种方法测得的结果呈正相关。法氏囊中含毒量最高，脾、肾次之，心脏、肌肉中较少。夹心ＥＬＩＳＡ能测出的最小限量为０．１μｇ，反向间接血凝试验的限量为１ｎｇ，人工口服感染３２ｈ就能在鸡法氏囊中检测到高滴度病毒。     

新城疫单抗酶联试剂盒对鸡群中强毒感染的监测试验

用新城疫(ND)单抗酶联试剂盒检测从疑有新城疫病毒强毒感染的鸡群中采集泄殖腔棉拭样品68份,检出阳性20份。随机对其中15份样品进行病毒分离,结果阳性符合率为100％(15/15)。结果表明,该试剂盒特异性强,灵敏度高,诊断快速,易于基层推广应用。为ND的确诊和免疫鸡群中NDV强毒感染的监测提供了新方法。     

运用锚引物扩增新城疫病毒鹅源分离株基因组末端序列

在T4 RNA连接酶的作用下,将人工合成的锚引物直接与新城疫病毒（NDV）鹅源毒株ZJ1株的基因组5′末端的反转录产物及NDV基因组3′末端直接相连,然后用聚合酶链反应（PCR）和RT－PCR分别快速扩增基因组5′末端和3′末端,测序结果表明：3′末端的Leader序列为55nt,5′末端的trailer序列为114nt。将该序列与GenBank报道的NDV鸡源毒株的相应序列相比,XJ1株与6个鸡源NDV毒株的Leader和trailer序列的同源性分别为83.6%-92.7%和60.5%-63.2%。序列比较结果表明：该鹅源毒株与鸡源毒株在基因组3′端调控区有较高的同源性,而在基因组5′端的调控区同源性则较低。     

火鸡新城疫免疫后免疫器官的免疫学变化

本实验研究了 Lasota 疫菌点眼、滴鼻免疫21日龄火鸡后,其胸腺、法氏囊和脾脏中免疫细胞的变化。结果表明,免疫火鸡中枢和外周免疫器官的浆细胞、酯酶阳性 T 细胞和淋巴细胞显著增多,巨噬细胞程度不同地增加;脾脏淋巴小结直径增大,数量上升;说明免疫器官不仅体免疫应答明显加强,而且细胞免疫反应也显著增强。78日龄 ND 强毒攻击后,免疫火鸡免疫器官的上述免疫细胞进一步增多,细胞免疫和体液免疫反应进一步增强,全部获得免疫保护;而对照火鸡免疫细胞数量锐减,呈现细胞免疫和体液免疫机能衰竭,全部发病死亡。