犬淋巴细胞转化增殖试验最佳条件的确定

本试验选择杂种牧羊犬作为实验犬,用MTT法检探讨了不同浓度犊牛血清（FCS）、淋巴细胞、植物血凝素P（PHA-P）和刀豆蛋白A（ConA）对犬淋巴细胞增殖的影响。确定了犊牛血清含量为10%,淋巴细胞浓度为5×106个/mL,用丝裂原PHA-P 刺激的最佳浓度为12.5ug/mL时,MTT法测定能够刺激犬淋巴细胞转化增殖,但t检验分析表明其促进淋巴细胞增殖的效果并不显著;当其它条件不变,所用的丝裂原为Con A时,它在浓度为0.5～2.5μg/mL范围内均可以显著刺激T细胞的增殖（P<0.05）,且在浓度为2.5μg/mL时刺激效果最佳     

籼稻品种H359基因组可转化人工染色体(TAC)文库的构建

村建能够通过农杆菌介导转化植物的人工染色体文库可以加快突变基因的精细定位和克隆的速度。为了克隆水稻突变基因的需要，我们利用pYLTAC7载体构建了籼稻品种H359基因组的TAC文库。该文库包含41088个克隆，保存在107块384孔板中。插入片段大小在50—100kb之间，平均插入大小为77kb，推测该库覆盖水稻基因组接近7．4倍。     

甘蓝基因组细菌人工染色体文库的构建

细菌人工染色体（ BAC）文库是克隆甘蓝抗病优质重要基因的基础,以抗枯萎病、富含硫代葡萄糖苷的结球甘蓝自交系R4P1为材料,美国Epicentre公司的CopyControl TM pCC1BACTM为载体,构建了甘蓝细菌人工染色体文库。该文库有73344个克隆,插入片段平均大小约97 kb,空载率＜3％,覆盖甘蓝基因组约10．9倍,筛选到甘蓝任一基因的概率为99．99％,这些结果表明,构建的文库质量较好,可用于后续分析。构建的甘蓝BAC文库不仅可用于枯萎病基因的克隆,而且为克隆其他重要的功能基因及基因组学等的研究奠定了基础。     

青枯菌M5菌株特异基因组消减文库的构建

为筛选青枯菌M5菌株特有的序列,利用SSH技术对青枯菌生理小种5号菌株M5（tester）和生理小种1号菌株GMI1000（driver）基因组进行了比较。分别提取二者基因组DNA,RsaⅠ酶切,将酶切后M5菌株DNA分为两份,分别与接头1和接头2R连接,然后进行两轮杂交和两轮PCR扩增,并检测连接效率与消减效率。将获得的消减PCR产物,即差异基因/差异DNA片段,与pGEM-T载体连接,转化E.coli DH5α感受态细胞,建立消减文库。随机挑取96个白色克隆,经菌液PCR法测定,80个为预期阳性,含有预期的插入片段。首次构建了青枯菌M5菌株特异基因的抑制消减文库,为进一步筛选、克隆青枯菌M5菌株特异核苷酸片段奠定了基础。     

棉花细菌人工染色体文库构建的方法优化

以我国抗病、优质、丰产的棉花优良品种中棉所12号为材料,对棉花细菌人工染色体(BAC)文库构建过程中的一些关键技术,如plug的制备、DNA的部分消化、酶切片段的选择、插入片段与载体的摩尔比值、连接产物的浓缩等进行了研究,建立了构建棉花BAC文库的适宜方法体系。依照该方法初步构建了含有38000个克隆的棉花BAC文库。经检测,插入片段平均大小约为120kb,蓝斑率小于0.5%,空载率小于1%。插入片段与载体的最适摩尔比为1∶15,一次转化可以获得约2000个克隆,cfu·μl 1高达4。该方法为进一步构建中棉所12号多倍基因组的BAC文库、从而进行棉花基因组有关研究奠定了基础。     

雷蒙德氏棉叶绿体基因组Fosmid文库构建

 采用高盐、低pH值法提取雷蒙德氏棉叶绿体DNA;通过物理剪切法获得随机断裂的DNA片段;剪切片段末端、补平修饰后与pCC1FOS载体连接;用噬菌体包装蛋白包装重组DNA,侵染大肠杆菌EPI300,构建了雷蒙德氏棉叶绿体基因组文库。对于叶绿体DNA剪切,以1 mL注射器中等速度吸打18次为最佳参数。叶绿体基因组Fosmid文库滴度为1×10⁴ cfu·mL^-1,插入片段大小平均为38 kb,最终筛选出39个克隆用于后续研究,覆盖叶绿体基因组9.2倍。以叶绿体特异标记筛选出能够覆盖雷蒙德氏棉叶绿体全基因组的6个克隆：F66,F46,F28,F8,F55和F3,为基因组结构和功能基因分析提供了良好的基础。     

红莲型水稻不育系和保持系线粒体基因组BAC文库的构建

以红莲型(HL)细胞质雄性不育系和保持系为材料, 构建了水稻线粒体基因组的BAC文库. 每个文库保存约2300个菌落, 外源插入片段介于9～25 kb之间. 以线粒体基因为探针对文库进行菌落原位杂交验证, 均筛选到了阳性克隆. 构建的两个文库为进一步研究水稻线粒体基因组的结构特点, 为克隆与红莲型水稻细胞质雄性不育相关的线粒体基     

长雄野生稻(Oryza longistaminata)全基因组Fosmid文库构建

长雄野生稻(O.longistaminata)起源于非洲,具有和亚洲栽培稻相同的AA基因组,是栽培稻改良的重要遗传资源。本研究构建了长雄野生稻全基因组fosmid文库,共获得33.6万克隆,文库的平均插入片段大小约为40kb,其中94.7%的克隆插入片段大小在30~50kb之间。挑取其中约11万克隆并保存,可覆盖10倍栽培稻基因组,对任意基因或序列的筛选概率达到了99.99%。将剩余的22万个克隆进行了末端配对测序,显示其有助于长雄野生稻全基因组测序的拼接。所构建的fosmid文库为筛选和克隆长雄野生稻的有利基因提供了研究材料。     

云南疣粒野生稻细菌人工染色体（BAC）文库的构建与分析

我国有3种野生稻,即普通野生稻(oryza rufipogon)、药用野生稻(O.officinalis)、疣粒野生稻(O.granulata).野生稻由于长期处于野生状态,经受了各种灾害和不良环境的自然选择,抗逆性较强,是天然的基因库,保持有栽培稻不具有或已经消失了的遗传基因,它在水稻育种中具有独特的作用,是水稻育种的宏厚物质基础.     

基因表达文库的构建及其方法分析

基因表达文库构建和筛选技术是80年代初发展起来的用于筛选和克隆基因的基本手段.表达文库中含有大量基因表达信息, 使其成为广大实验室优先建立的文库之一. 迄今为止, 表达文库的构建方法在传统方法的基础上不断被改善, 针对各种类型的目的基因克隆的要求,可以选择不同的载体和方法来构建适当的基因表达文库.本文详细介绍了多种构建基因表达文库的方法,比较它们的构建方法的优点和不足之处,并对它们在实际应用中的作用作了较为全面的分析.     

巫山黑山羊、大足黑山羊及其与波尔山羊杂交后代肉质特性研究

试验随机选择4月龄的巫山黑山羊、波×巫F1、大足黑山羊、波×大F1公羔各9只,去势,强度育肥60天后,每个群体选择6只进行屠宰并对其进行肉品质特性研究。结果显示,（1）波×大F1肌肉中的总脂肪显著高于巫山黑山羊（P<0.05）,灰分极显著低于巫山黑山羊和大足黑山羊（P<0.01）,粗蛋白、胆固醇和水分在4个群体中差异不显著（P>0.05）。（2）各种氨基酸在大足黑山羊肌肉中的含量最高,波×巫F1次之,波×大F1最低;波×巫F1肌肉中的14种氨基酸含量较其母本有明显的上升趋势,而波×大F1 却有16种氨基酸明显低于其母本;波×巫F1中有5种必需氨基酸得分接近或超过100,其他群体中只有4种。（3）硬脂酸、棕榈酸和豆蔻酸在波×巫F1肌肉中的含量最高,油酸和亚油酸分别在波×大F1和大足黑山羊肌肉中的含量显著高于巫山黑山羊（P<0.05）,大足黑山羊肌肉中的亚油酸占肌内脂肪的相对含量显著高于其杂交后代波×大F1（P<0.05）。（4）4个群体中的磷元素均明显高于其他元素,硒元素在波×巫F1肌肉中的含量最高,显著的高于在波×大F1肌肉中的含量（P<0.05）,波×巫F1较其母本有7种元素呈上升趋势,而波×大F1则有5种元素较其母本明显降低。     

运输应激对山羊血液生化指标的影响

为了认识运输应激对山羊血液部分生化指标的影响,以便进一步认识运输应激对动物机体的影响。本试验采用酶联免疫吸附法研究山羊血液中应激敏感生化指标在运输前后的变化。结果表明：山羊血液中皮质醇、超氧化物歧化酶、还原型谷胱甘肽、铜蓝蛋白、结合珠蛋白、甲状腺素、肌酸激酶的含量均在运输后升高,免疫球蛋白G在运输后降低,其中还原型谷胱甘肽、铜蓝蛋白、免疫球蛋白G的含量在运输前后差异显著(P<0.05),结合珠蛋白的含量在运输前后差异极显著(P<0.01),运输前后皮质醇、超氧化物歧化酶、甲状腺素、肌酸激酶的含量无显著差异(P>0.05)。运输应激作用下结合珠蛋白、还原型谷胱甘肽、铜蓝蛋白含量的升高有利于提高机体的抗应激能力,免疫球蛋白G显著降低可导致机体的抗病力下降,这可能是引起动物运输后发病的主要原因,但是免疫球蛋白G显著降低的机制还需要进一步研究。     

雷州山羊和隆林山羊遗传多样性的微卫星分析

为了调查中国热带、亚热带主要山羊品种的遗传资源现状,应用14对微卫星引物,检测了隆林山羊和雷州山羊不同分布地区的群体遗传多样性水平。隆林山羊（柳州）、隆林山羊（百棚）、雷州山羊（徐闻）、雷州山羊（海南）各群体平均多态信息含量（PIC）分别为0.645、0.600、0.483、0.518;平均杂合度（H）分别为0.281、0.421、0.121、0.157;平均等位基因数（k）分别为5.17、4.93、4.64、4.5,3组数据综合说明两个山羊品种遗传多样性相对匮乏,群体遗传变异较低;NJ法聚类显示,隆林山羊两个群体聚为一类,再与雷州山羊（徐闻）聚在一起,最后为雷州山羊（海南）,这与两个品种的来源及地理分布基本一致。此研究结果为中国热带、亚热带山羊品种资源开发利用提供了基础资料和科学数据。     

梨基因组DNA提取方法比较研究

通过添加Vc对传统的CTAB法进行改进,结果表明:在磨样时,1 g鲜样中添加0.10 g的Vc提取的DNA质量最高;最佳提取材料是嫩芽,其次是新梢和成熟叶片。     

红枣羊奶粉加工技术的研究

对红枣羊奶粉的加工技术进行了研究。结果表明,将红枣与水以1∶3的比例混合,在90℃提取60 min获得红枣汁,然后以12%的添加量加入羊奶中,经85℃/5 min杀菌浓缩后,进行喷雾干燥,可获得品质较好的红枣羊奶粉。     

波尔山羊杂交代肌肉中羟脯氨酸含量的测定及其与肌肉品质的关系

以波尔山羊与关中奶山羊级进杂交后代及关中奶山羊为原料,测定不同月龄样品肌肉中羟脯氨酸含量,分析比较羟脯氨酸含量与肌肉剪切力数据的相关性。结果表明,相同月龄不同品种羊肉中羟脯氨酸的含量存在显著差异(p<0.05),F2代最低,对照组关中奶山羊最高;相同代数不同月龄肌肉中羟脯氨酸的含量6月龄与8月龄之间无显著差异(p>0.05),但6月龄、8月龄与10月龄之间存在极显著差异(p<0.01);不同品种及月龄山羊肌肉中羟脯氨酸含量与剪切力程显著负相关(R=0.647 70>0.576=R0.05(10))。     

崇明白山羊主要血液生理指标的测定与分析

为促进崇明白山羊实验动物化应用和临床诊断提供数据,本研究采用全自动血细胞分析仪,对上海市崇明地区不同性别和生理状态的185只健康崇明白山羊19项主要血液生理指标进行测定。结果显示：后备母羊,妊娠母羊,哺乳母羊,成年母羊,成年公羊,断奶小母羊,断奶小公羊,哺乳小羊之间嗜酸性粒细胞计数(EO)指标差异显著(P<0.05),中性粒细胞计数(NEUT),嗜碱性粒细胞计数(BASO),嗜碱性粒细胞百分比(BASO%)3项指标差异不显著(P>0.05),其他15项指标差异均极显著(P<0.01)。说明不同性别和生理状态的崇明白山羊部分血液学指标波动范围有一定的差异。     

影响山羊超排效果的因素研究

几年来在豫东潮土地区砂质土上进行的肥料深施效果试验研究结果表明，肥料深施对小麦的生育状况和经济性状有较大影响，肥料深施与浅施比较，可使小麦植株前期生长健壮，中后期生长稳健，落黄好，穗大粒多，籽粒饱满。可显著增加小麦养分吸收量，提高化肥利用率，肥料深施处理比浅施处理氮、磷、钾的吸收量，分别增加34.32~67.81kg/hm2，3.22~9.42kg/hm2和17.82~39.84kg/hm2；氮素化肥利用率提高20.86~41.1个百分点，磷肥利用率提高7.13~15.39个百分点；肥料深施在小麦田里养分残留量较浅施的高，尽管一季小麦对土壤有机质耗竭不大，但对氮、磷素的残存已有差异。肥料深施对小麦产量、经济效益、化肥利用率有显著的影响，采用肥料深施技术比群众习惯施肥方法（浅施）可增产小麦337.1~1183.5kg/hm2，增产率达7.6%~26.6%，增加收益539.36~1893.6元/hm2。     

高通量的PCR模板植物基因组DNA制备方法

制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费人工的工作。本文介绍一种高通量的植物基因组DNA (gDNA)快速制备及其用于PCR基因型检测的操作方法。将一小段单子叶植物苗叶片(长度约30 mm或40 mm,与96方孔板的孔深大致相同) 或一小块(约2~4 mg)双子叶植物叶片放入96方孔板的各孔中、放入一粒钨合金珠和150 µL制备缓冲液,盖好硅橡胶盖,在涡旋器振动3~5 min破碎组织。用96针复制器(或多通道移液器)转移每样品约0.5~1.0 µL此粗制gDNA溶液(含有2~3 ng gDNA µL^-1)到96孔PCR板的反应液中,适合用各种类型的PCR标记(如简单序列重复SSR,插入缺失InDel等)进行基因型检测,或较大的DNA片段(>1 kb)的扩增,可以得到良好的效果。本方法的关键是控制合适的破碎叶片量与制备溶液量比例(约2~5 mg, 但不超过10 mg 150 µL^-1溶液),以及不要加入过多量的gDNA (不超过PCR反应液量的1/10),以免带入过量的杂质抑制PCR。因此,这种从种植材料,制备gDNA, 转移样品gDNA,到PCR都是96格式化操作的高通量、低成本方法适合于大量植物样品的规模化的基因型检测。