6株土壤拮抗放线菌的初步鉴定及其抗菌活性测定

[目的]初步鉴定6株放线菌种类,并测定其发酵产物的抗菌活性。[方法]采用形态学方法鉴定6株放线菌菌株种类,以抑制菌丝生长速率法、孢子萌发法、盆栽和大田试验系统测定6株放线菌菌株发酵产物的杀菌活性。[结果]形态学初步鉴定结果表明,6株菌株属于链霉菌属。生物测定结果表明,500μg/m l的6株放线菌发酵产物,对棉花枯萎病菌的菌丝生长抑制率均在90%以上;对番茄灰霉病菌、烟草赤星病菌、南瓜枯萎病菌的菌丝生长抑制率也在80%以上。其中,GZ-204和GZ-331菌株发酵产物对小麦根腐病菌和玉米弯孢叶斑病菌的孢子萌发抑制率分别为97.8%、98.2%和99.5%、94.6%。盆栽试验结果表明,GZ-204和GZ-331菌株发酵产物对小麦白粉病的保护效果分别为78.8%和87.1%,治疗效果为62.4%和68.5%。田间试验结果表明,GZ-204和GZ-331菌株发酵200倍稀释液对小麦白粉病的防治效果分别达50.5%,69.2%。[结论]研究结果为新型土壤放线菌源农药的研制奠定了基础。     

番茄灰霉病高效拮抗菌株鉴定及抗菌活性研究

采用形态特征观察、生理生化特性测定以及16S rDNA序列分析,对分离于淄博感染灰霉病的大棚番茄土壤样品中的6株拮抗细菌进行了分类鉴定和拮抗活性分析。结果显示,6株细菌形态均为直的杆状,有鞭毛能运动,能生成抗热的芽孢,芽孢椭圆形,革兰氏染色均为阳性,通过对菌株16S rDNA序列进行测定和同源性比对,发现与芽孢杆菌同源性达99%,结合生理生化特性确定B-01、B-02、B-03、B-04为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),B-06为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),B-07为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。通过滤液抑菌活性测定,B-02、B-06滤液对病原菌有很强的抑制作用,并且在稀释不同倍数时均能抑制灰霉病菌的生长。     

一株拮抗放线菌菌株的筛选与鉴定

采用平板对峙法与灰色关联度分析法从小麦和苹果根际土壤中筛选出对小麦纹枯病(Rhizoctonia cerealis)和小麦根腐病(Bipolaris sorokiniana)具有良好拮抗作用的放线菌,并依据菌落形态和培养特征、生理生化特性及16S r DNA序列分析等进行鉴定。结果表明,菌株FX-H-51抑菌效果显著,对不利生长环境有良好的耐受性。形态学与分子鉴定结果表明,菌株FX-H-51为海棠链霉菌(Streptomyces spectabilis)。     

马铃薯早疫病拮抗菌株筛选及其抗菌活性

为更加有效地利用微生物资源控制马铃薯早疫病,采用平板对峙法,筛选马铃薯早疫病病原菌的拮抗菌株,通过含毒介质法探究拮抗菌株的抗菌活性。结果表明:44个供试内生真菌和细菌的菌株中,7株细菌对马铃薯早疫病病原菌有显著的抑菌作用,其中菌株H3的拮抗能力最强,采用平板对峙法显示,菌株H3对马铃薯早疫病病原菌抑菌宽度为5.50 mm;对H3培养基类型进行筛选,含毒介质法显示LB发酵液的抑菌活性最高,16.7%的H3发酵液的抑制率为71.17%;菌株H3发酵液能导致马铃薯早疫病病原菌菌丝形态变化:菌丝顶端出现空泡状的膨大,菌丝隔间细胞变粗变短,原生质收缩。结果说明H3可以拮抗马铃薯早疫病病原菌。     

1株广谱拮抗菌的分离鉴定及其抗菌活性成分分析

从烟–稻–(油)多年轮作的耕地土壤中分离得到1株广谱拮抗菌HMI–23,对水稻立枯丝核菌、油菜核盘菌、青枯雷尔氏菌具有强烈抑制作用。经过16S rDNA的序列比对,初步认为该菌为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。该菌株发酵液抑菌活性对温度、紫外线和蛋白酶K不敏感,基因组中含有多个已知脂肽抗生素合成相关基因,脂肽粗提物亦对立枯丝核菌、核盘菌、雷尔氏菌有强烈的抑制作用。质谱分析结果表明,该粗提取物中可能含有多种已知的脂肽,如伊枯草菌素A、抗霉枯草菌素B、杆菌霉素D、丰原素B等。     

一株灰葡萄孢黑色素缺失突变体的获得及其生物学特性

黑色素是许多植物病原真菌致病因子,为明确灰葡萄孢黑色素在致病及抗逆过程中的作用,本试验采用PEG介导的原生质体转化的方法获得了1个黑色素缺失突变体,并通过基因扩增及分子杂交对其进行鉴定。对突变菌株的致病力进行测定,结果显示突变菌株的致病力明显下降,并且与野生型相比突变菌株的生长速度下降和对紫外线敏感性加强。说明黑色素在灰霉致病性及抗逆中起关键作用,这为今后以灰霉黑色素为靶位点设计杀菌剂进行防治奠定了基础。     

1株油茶真菌病害拮抗菌株的筛选鉴定及其拮抗作用

为获得并鉴定高效拮抗油茶主要真菌病害的拮抗菌,研究其拮抗作用,采用点接法和发酵培养法从油茶根部土壤分离获得1株能同时拮抗6种油茶病害真菌的拮抗菌。通过生理生化鉴定和16S r DNA序列分析,将该拮抗菌鉴定为解淀粉芽孢杆菌,并命名为Bacillus amyloliquefaciens D2WM。该拮抗菌能拮抗油茶炭疽病病菌(Colletotrichum nicotianae)、胶孢炭疽病病菌(C.gloeosporioide)、叶斑病病菌(Phyllosticta capitalensis)、软腐病病菌(Agaricodochium camellia)、黑斑病病菌(Altermaria alternate)和溃疡病病菌(Bothyosphaeria dothidea)6种油茶病害病原菌,且拮抗菌发酵产生的无菌滤液对以上6种病原菌的抑菌率均高于95%。同时,D2WM菌株发酵产生的10倍稀释菌液还对细菌性软腐病病原菌欧文氏菌3个亚种的抑菌圈均大于22 mm,是1株具有广谱拮抗作用的生防菌株。D2WM菌株发酵液耐酸碱范围广,在p H值为9时拮抗作用最佳;不耐高温,温度达到80℃及以上时抑菌活性完全丧失。研究结果对细菌性软腐病及油茶无公害防治提供了理论基础和参考依据。     

一株禾谷镰刀菌拮抗菌株的筛选及鉴定

【目的】筛选对禾谷镰刀菌具有高拮抗活性的微生物菌株,探索小麦赤霉病的生物防治方法。【方法】用稀释平板涂布法及平板对峙法从24份取自河南郑州近郊、信阳、新乡、商丘、开封等地区发生小麦赤霉病的田间土样中分离、筛选禾谷镰刀菌的拮抗菌株。【结果】从24份土样中分离纯化到65株菌株,对峙实验发现其中8株对禾谷镰刀菌具有拮抗作用,其中,菌株Jc-07的拮抗效果最佳。根据形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,将菌株Jc-07初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）。抑菌实验表明,菌株Jc-07发酵滤液明显抑制禾谷镰刀菌的菌丝生长,使禾谷镰刀菌孢子萌发率显著降低。【结论】筛选得到的菌株Jc-07对禾谷镰刀菌具有较高的拮抗活性,具有防治小麦赤霉病的潜在应用价值。     

一株禾谷镰刀菌拮抗菌株的筛选及鉴定

【目的】筛选对禾谷镰刀菌具有高拈抗活性的微生物菌株,探索小麦赤霉病的生物防治方法。【方法】用稀释平板涂布法及平板对峙法从24份取白河南郑州近郊、信阳、新乡、商丘、开封等地区发生小麦赤霉病的出间上样中分离、筛选禾谷镰刀菌的拈抗菌株。【结果】从24份土样中分离纯化到65株菌株,对峙实验发现其中8株对禾谷镰刀菌具有拈抗作用,其中,菌株Jc-07的拮抗效果最佳。根据形态特征、生理生化特性和16SrDNA序列分析,将菌侏Jc-07初步鉴定为解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）。抑菌实验表明,菌株Jc-07发酵滤液明显抑制禾谷镰刀菌的菌丝生长,使禾谷镰刀菌孢子萌发率显著降低。【结论】筛选得到的菌株Jc-07对禾谷镰刀菌具有较高的拈抗活性,具有防治小麦赤霉病的潜在应用价值。     

一株具有纤维素酶活性细菌菌株的鉴定及其生物学活性

[目的]筛选具有纤维素酶活性的菌株,探究其对杂草的腐解和青枯菌的抑菌作用,为作物青枯病防治和杂草防除提供新思路。[方法]采用点滴法从162株叶际细菌中筛选具有纤维素酶活性的细菌,测定其对作物青枯菌(Ralstonia pseudosolanacearum)的拮抗作用及对空心莲子草(Alternanthera philoxeroides)和辣蓼草(Polygonum hydropiper)的腐解作用。进一步通过形态学特征、生理生化测定和16S rDNA基因序列分析等明确其分类地位。[结果]从162株叶际细菌中筛选出15株具有纤维素酶活性的菌株,占比9.26%,其中H16菌株的纤维素酶活性最强,水解圈半径为3 mm,且该菌株的菌体和代谢产物都具有纤维素酶活性。在NA培养基平板上,H16菌株菌落为圆形、红色;菌体短杆状,端圆,侧生鞭毛4～8根。H16菌株可利用海藻糖、麦芽糖、蔗糖、山梨醇和甘露醇等;硝酸钾还原反应、淀粉水解、过氧化氢酶反应、氧化酶反应等为阳性。16S rDNA序列分析结果显示,H16菌株与嗜线虫沙雷氏菌(Serratia nematodiphila)聚为一支,将其鉴定为嗜线虫...     

一株番茄青枯病拮抗细菌JK19的鉴定及其抑菌活性检测

[目的]研究拮抗细菌JK19的分类学地位,检测其抑菌活性,分析其可能的活性成分.为脂肽提取和生防制剂的研制提供了理论依据.[方法]采用形态学、生理生化特征及16S rDNA序列分析方法,鉴定菌株;采用平板对峙法检测菌株对8种植物病原菌的拮抗作用;采用PCR扩增方法检测基因组中的脂肽类抗生素合成及促生作用相关的基因.[结...     

一株拮抗棉花黄萎病的菌株的分离鉴定及诱变选育

从健康棉花根际分离筛选出一株拮抗大丽轮枝菌的菌株hj1,经鉴定为解淀粉芽孢杆菌。利用UVNa NO2复合诱变技术对菌株进行诱变处理,获得一株拮抗活性更强,且稳定遗传的突变株hjt1,为进一步开展棉花黄萎病的防治工作奠定了坚实的理论基础。     

1株杨梅炭疽病拮抗菌株的筛选与鉴定

为杨梅炭疽病生物农药的开发提供新的生防菌资源,采用解磷选择性培养基分离及平板对峙筛选相结合的方法从杨梅种植土壤中筛选杨梅炭疽病菌拮抗菌株,通过菌落直径法验证其发酵液的抑菌特性,并利用形态学与分子生物学相结合的方法对拮抗菌株进行鉴定。结果表明:从杨梅根际土壤中分离获得52株解磷真菌,其中菌株YMMF150101对杨梅炭疽病菌有拮抗作用,平板对峙抑制率达81.6%;其发酵液及无菌发酵滤液均对靶标菌生长有抑制作用,抑制率分别达84.73%和52.53%;根据形态学特征结合其分子系统发育学鉴定,YMMF150101为米曲霉菌(Aspergillus oryzae)。     

一株拮抗烟草炭疽病的菌株ZYY-4的筛选、鉴定及生防活性测定

【目的】从秦岭太白山森林公园土壤中发掘出拮抗烟草炭疽病(Colletotrichum nicotianae Averna)的菌株,为防治烟草炭疽病提供生防资源。【方法】随机采集森林土壤,采用稀释涂布和划线分离纯化、平板对峙法和生长速率法筛选一株对烟草炭疽病有明显拮抗作用的菌株ZYY-4,并对ZYY-4进行生理生化分析和16S rDNA同源性分析,然后测定ZYY-4对烟草炭疽病的防治效果。【结果】在平板对峙实验中ZYY-4对烟草炭疽病菌的抑菌率达69.93%。经鉴定ZYY-4菌株为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)。通过温室盆栽实验,ZYY-4液体发酵液在预防试验中对烟草炭疽病的防治效果达到77.83%,治疗实验中对烟草炭疽病的防治效果为62.77%。【结论】该菌株对烟草炭疽病具有高生物活性,有进一步用于绿色生防菌剂开发的潜力。     

一株抗多种植物病害菌株的筛选、鉴定及其活性成分研究

从农田土壤中分离得到1株对多种植物病原真菌有拮抗作用的菌株Loq18,经生理生化及分子鉴定确定为一株枯草芽孢杆菌,其无菌发酵液经硫酸铵沉淀得抗菌粗蛋白.为明确此抗菌粗蛋白的理化性质,研究了温度、pH变化、UV照射、有机溶剂和蛋白酶对抗菌蛋白稳定性的影响.结果表明,该抗菌粗蛋白具有良好的热稳定性,121℃高压灭菌处理20min后仍具有对照活性的95%以上;对酸碱不敏感,在pH值4～11范围内相对稳定;对紫外线穗定,在紫外光下照射10h以上时,其活性基本不受影响;经乙醚、丙酮等有机溶剂处理后仍具有对照活性的90%以上;对蛋白酶较稳定.     

2株油菜菌核病拮抗内生细菌的筛选鉴定及其拮抗活性初步分析

油菜菌核病是一种严重危害油菜生长的病害。于2017年3月从湖南农业大学生物科学技术学院试验田采集油菜湘油15盛花期植株的根茎叶,采用纯培养法对内生细菌进行分离纯化,共分离得到68株内生细菌;采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析法对内生菌株的多样性进行分析研究;利用琼脂扩散法对内生菌株进行抗菌活性筛选,共筛选出7株抗菌活性较强菌株,分别为Y171004、Y172014、Y173005、Y174007、Y174017、Y177001和Y177002;利用平板对峙法对油菜菌核病病原菌核盘菌的拮抗菌进行筛选,筛选出2株(Y171004和Y177002)油菜核盘菌的拮抗细菌,经初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus),继而对其拮抗活性进行初步分析,其中菌株Y171004的抗菌物质经鉴定为热不稳定性蛋白。研究结果能为该地区油菜内生细菌资源的进一步研究及其在油菜菌核病生物防治等方面的应用提供试验依据和理论指导。     

一株具有抗菌活性的水浮莲内生放线菌的鉴定

[目的]从水浮莲(Pistia stratiotes L.)中分离获得对动植物病原菌具有拮抗活性的内生菌,对其进行系统鉴定及特性分析.[方法]采用纸片法进行拮抗实验,并对其形态特征、培养特征、生理生化特征进行检测分析, 16SrDNA序列的PCR扩增.[结果]筛选得到1株具有拮抗特性的放线菌XJPL-LA-67,该菌株的上述几个特征与链霉菌Streptomyces griseorubens的高度一致,与此同时,依据其16SrDNA序列分析,XJPL-LA-67序列的同源性与Streptomyces griseorubens高达99;.[结论]将水浮莲内生放线菌XJPL-LA-67确定为链霉菌Streptomyces griseorubens.     

一株抗菌活性物质产生细菌的分离及鉴定

从根际土壤分离到一株细菌CY04,通过电镜观察和16S r DNA序列分析,发现该菌株同已知菌枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的相似度最高,为99%,初步认定为枯草芽孢杆菌。抑菌试验结果表明,该菌株对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)有一定的抑菌活性,对大肠杆菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌没有抑菌活性。培养48 h左右是其产生抗菌活性物质的最佳时期。     

一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2.该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用.根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种.菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121 ℃ pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性.结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值.     

一株海洋放线菌的分类鉴定及抗菌活性研究

从连云港海域潮间带采集的样品中筛选得到1株产广谱、高活性抗菌物质的放线菌GB-2.该菌对藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等5种革兰氏阳性菌,大肠杆菌、荧光假单胞菌等4种革兰氏阴性菌及扩展青霉、黄曲霉、点青霉、犁头霉、番茄灰霉、小麦赤霉病菌、香蕉炭疽病菌、棉花枯萎病菌、稻瘟病菌等18种真菌有显著拮抗作用.根据其形态特征、培养特征、生理生化特性和16S rRNA序列分析结果,确定其为弗氏链霉菌变种.菌株GB-2所产抗菌物质的稳定性研究表明,该物质在121 ℃ pH 1和pH 12条件下抑菌活性均不变;紫外线照射不影响其抗菌活性.结果揭示该菌在生防、食品及医药方面有潜在的应用价值.