3种拮抗烟草疫霉及产IAA内生细菌的分离鉴定

为挖掘河南省洛阳地区烟株体内的内生细菌功能菌株,以期开发优良生防菌剂。采用稀释涂布平板法分离纯化烟株各生育时期内生细菌菌株,采用平板对峙法、生长速率法测定内生菌株对烟草疫霉的抑制作用,紫外分光光度计法测定菌株产生IAA的水平。对筛选出的功能内生菌株进行形态学、生理生化鉴定及16S rDNA、gyrB序列分析鉴定,并测定对种子萌发的促生作用。结果表明,筛选出的12株内生菌株的鉴定结果为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)7株,沙福芽孢杆菌(B.safensis)4株,奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)1株。芽孢杆菌属占菌株总数的91.67%,其中菌株LYYY63-1、LYRY39-1、LYSX141具有较强的抑制活性,对烟草疫霉的抑菌率分别为88.10%、84.55%和73.33%;沙福芽孢杆菌菌株LYYY61-2、LYYY117对烟草疫霉的抑菌率达62.10%、64.72%;奇异变形杆菌菌株LYRY45产IAA水平达11.06 mg/L,具有较高的产IAA水平。12株细菌对烟草7种病原真菌具有不同程度的抑制作用,抑菌谱广,对烟草种子根长和总长均有显著的促生...     

土壤高效解钾菌的筛选鉴定及烟草栽培应用效果评价

为提高烟草对钾的利用率和烟叶含钾量,从土壤中分离筛选具有解钾作用的菌株,通过比较菌株的解钾能力得到解钾能力最强的胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)菌株NGW1。在盆栽试验中,菌株在烟草根际的最大定殖数量为5.33×10~5CFU/g,且施用该菌可显著提升烟草株高、最大叶长、最大叶宽、茎围,同时还可提高土壤缓效钾和速效钾含量。盆栽60 d时,下部烟叶最高含钾量1.57%,比CK的1.43%提高了9.80%,中上部烟叶最高含钾量1.90%,比CK的1.49%提高了27.52%。由此可见,胶质芽孢杆菌NGW1菌株能够通过定殖于烟草根际并促进烟草植株对钾元素的吸收和利用,提升烟草品质及产值。     

烟草根际细菌YF-6的分离筛选与生测

针对四川广元普安植烟田雨季烟草赤星病易发的现象，采集汉中新集、广元普安雨后烟草田地里的成熟期健壮植烟的根际土壤11份，对土壤样本进行细菌分离，得到81种形态、243株根际细菌；初筛选择出9株拮抗烟草赤星病菌的细菌，复筛选出1株拮抗效果最好的细菌YF-6；经鉴定，YF-6为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens；生测试验表明，YF-6 10倍稀释培养液（9×10⁶ mL^-1）可防止烟草赤星病菌侵染延安1号温室烟苗，且对烟苗有促进生长的作用。     

烟草青枯病拮抗菌TBWR1的筛选鉴定及防病促生能力

【目的】分离对烟草青枯病菌具有拮抗作用的细菌并对菌株进行分类、鉴定,以丰富烟草青枯病生防菌菌种资源。【方法】从健康烟株根际土壤中筛选拮抗菌株,测定其形态、生理生化特征及16S rDNA序列等,并对菌株进行分类鉴定,通过盆栽试验验证拮抗菌对烟草青枯病菌的拮抗活性及其对烟株的促生作用。【结果】在烟株根际土壤中分离获得1株对烟草青枯病有明显抑制作用的菌株TBWR1,序列基因登录号为EF562603,菌株TBWR1与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis KC849252和Bacillus subtilis MN062963在同一分支上且同源性达85%,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株对烟草青枯病的生防效果达71.1%,并能显著促进烟草株高、叶长、茎围生长和根系生物量增加。【结论】枯草芽孢杆菌TBWR1可作为烟草病害生物防治的候选菌株,在烟草青枯病防治中具有潜在价值。     

烟草根际解磷解钾菌的筛选鉴定及应用效果研究

为了解决植烟区土壤及烟草磷、钾缺乏问题,从长势较好的烟草根际土壤中筛选解磷解钾菌株,并对其进行鉴定。结果表明,从长势较好的烟草根际土壤中筛选出一株高效解磷解钾菌株YC4,其对无机磷、难溶性钾的溶解量分别达到286.33、17.90 mg/L。经形态观察、生理生化特性测定及16S r DNA序列分析确定该菌株为弯曲芽孢杆菌(Bacillus flexus)。盆栽试验结果表明,接种该菌株的盆栽土壤有效磷、有效钾含量分别比未接种该菌株处理(对照)提高了6.81%、4.72%;接种菌株处理烟草根总长、根总表面积、根总体积和根尖总数分别较对照显著提高45.33%、55.96%、78.00%、28.30%,鲜质量约为对照的2倍,株高增幅达21.03%,干质量、SPAD值及植株的磷、钾含量分别较对照提高91.55%、14.03%、18.29%、29.57%。综上,该菌株可提高植烟区土壤有效磷、有效钾含量,促进烟草生长。     

烟草黑胫病拮抗芽孢杆菌的筛选及生防效果评价

为了防治烟草疫霉对烟草引起的病害,从不同烟田健康烟株根际土壤中筛选分离42株根际细菌,经平板对峙初筛、细菌发酵液115℃处理后复筛得到10株对烟草黑胫病病原菌(Phytophthora parasitica)具有较好抑制效果的芽孢杆菌。经分子生物学鉴定可将其分为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、枯草芽孢杆菌(B. subtilis)和贝莱斯芽孢杆菌(B. velezensis)3类。选取枯草芽孢杆菌GJ1、解淀粉芽孢杆菌GJ7和贝莱斯芽孢杆菌GJ11对各类芽孢杆菌进行纤维素酶和蛋白酶分泌特性检测、烟草根际土壤、根和茎定殖能力检测以及田间试验,得出这3种芽孢杆菌均可分泌纤维素酶和蛋白酶,均能在烟草根际土壤、根和茎中定殖,在根际土壤中定殖能力为GJ1GJ7GJ11,在根和茎中定殖能力均为GJ7GJ1GJ11。GJ1、GJ7、GJ11对烟草黑胫病田间相对防治效果分别为33.33%、80.00%、28.60%,初步确定拮抗芽孢杆菌田间防治效果取决于其在烟草内定殖能力。     

解有机磷拮抗细菌的筛选及其解磷特性和拮抗作用

为了获得高效解有机磷细菌,从油菜地土壤中分离到4株对卵磷脂有不同降解能力的细菌。解有机磷细菌发酵上清液中有效磷含量为8.59~28.34μg/ml,较CK上清液中有效磷含量增加8.03~27.78μg/ml,其中菌株JYP-3解磷能力最强,其发酵上清液中有效磷含量为28.34μg/ml,比对照增加27.78μg/ml。结合解有机磷细菌的菌落形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析结果,初步确定菌株JYP-1、JYP-4为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),JYP-2、JYP-3为桥石短芽孢杆菌(Brevibacillus choshinensis)。菌株JYP-3对水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)有较强的拮抗作用,对黄瓜疫病菌(Phytophthora melonis)没有拮抗作用。     

拮抗细菌对烟草黑胫病的防治效果研究

采用温室盆栽试验测试5株芽孢杆菌属生防细菌对烟草黑胫病的拮抗作用。结果表明,拮抗细菌芽孢杆菌1205对苗期烟草黑胫病有较稳定的防治效果,其分泌物还有促进烟株生长的作用,经鉴定1205菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。     

一株高效解钾菌的筛选鉴定及其对烟草吸收钾磷的影响

以河南省驻马店市泌阳县植烟区土壤为原料,从中筛选与鉴定了一株高效解钾菌并对其进行实验室和烟田解钾和溶磷试验。结果表明,该解钾菌为不动杆菌,实验室验证该菌株的解钾和溶磷能力比较强;烟草大田试验表明,该解钾菌能够使土壤中的不溶性钾溶解,供烟草吸收和生长需要,对烟叶中钾含量的吸收与利用有协调促进作用,对烟草植株的生长有明显的促进作用,从而提高烟田烟叶的产量和质量,有利于增加植烟的经济效益。     

菌株YC-25的分离鉴别及其对烟草的促生作用

为获得优质根际促生细菌资源，采用平板分离技术对烟草根际土壤中的可培养细菌进行分离，通过平板拮抗试验筛选抑菌活性菌株，同时进行解磷、解钾、产吲哚乙酸（IAA）活性检测，采用盆栽试验验证菌株对烟草的促生效果，并对目标菌株进行了多相分类学鉴定。结果表明：从烟草根际土壤分离获得35株不同形态菌株，依次编号为YC-1至YC-35；平板拮抗试验筛选发现YC-25抑菌最广，同时对6种病原真菌具有较为显著的抑制作用，平均抑菌率达到48%；促生功能活性鉴别显示，YC-25还具有溶无机磷、解钾、分泌IAA和产纤维素酶能力；多相鉴定结果表明，菌株YC-25为不动杆菌属（Acinetobater）的一个种，暂命名为Acinetobater pittii YC-25；盆栽试验结果显示，YC-25处理下的烟草株高增加26.29%，茎围增加27.54%，最大叶面积增加17.26%，说明菌株YC-25对烟草的农艺性状促生效果良好，作为烟草专用微生物菌剂备选遗传资源开发前景广阔。     

1株烟草赤星病拮抗芽孢杆菌的鉴定与活性研究

【目的】筛选对烟草赤星病具有拮抗作用的芽孢杆菌并进行鉴定,同时研究其抗菌作用。【方法】从陕西、云南、湖北和河南4省烟区采集烟草根际土壤和烟叶,从中分离筛选烟草赤星病拮抗芽孢杆菌,并对拮抗性最强的1株芽孢杆菌进行形态学、生理生化特性、16S rDNA序列鉴定及粗提物抑菌作用测定。【结果】从烟草表面及根际土壤分离得到的芽孢杆菌中有10株对烟草赤星病有拮抗效果,将其中效果最好的1株芽孢杆菌定名为M-07C2F,其抑菌条带宽度达14.2 mm;通过16S rDNA测序并结合其形态和生理生化特征,鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌。通过显微观察发现,M-07C2F菌株使烟草赤星病病原真菌的菌丝生长出现畸形,菌丝体内部细胞原生质体分布不均匀,部分菌丝内原生质有流出形成空壳的现象。在离体条件下采用生长速率法,测得其对烟草赤星病菌丝生长有抑制作用,EC₅₀为12.82 mg/L;在活体条件下采用田间小区试验,测得当M-07C2F菌株粗提物质量浓度为80 mg/L时,其对烟草赤星病的防治效果达到86.0%。【结论】菌株M-07C2F对烟草赤星病菌的抑菌作用明显,该菌株通过抑制烟草赤星病菌菌丝生长、减少孢子萌发来抑制病菌对植株的侵染,且菌株粗提物质量浓度越高,抑菌能力越强。     

基于高效解磷菌的煤矸石肥料制备及其应用潜力分析

从风化的煤矸石中分离筛选出一株具有解磷能力的细菌菌株GZU-Mic02,经鉴定,为藤黄微球菌(Micrococcus luteus)。利用该菌株和巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)菌株ACCC1011分别解离煤矸石制备肥料,与没有处理的煤矸石样品相比,制备的煤矸石肥料的碱解氮、有效磷和速效钾含量都大幅提高。其中,经GZU-Mic02菌株处理的煤矸石肥料相比经巨大芽孢杆菌处理的煤矸石肥料具有更高的有效磷和碱解氮含量,而后者的速效钾含量更高。采用烟草盆栽试验验证制备的煤矸石肥料的肥效,结果表明,分别施用2种煤矸石肥料培育25 d后,烟草的株高、茎围和叶片大小均优于不施用肥料的对照组,且以用GZU-Mic02菌株制备的煤矸石肥料的效果更佳。     

烟草赤星病拮抗菌的筛选

采用对峙培养法从湖南浏阳地区烟田采摘的健康烟叶中筛选分离出86株菌株,其中B17菌株对烟草赤星病菌拮抗作用最强,抑制率为72.1%.通过生理生化实验和形态观察,初步鉴定B17菌株为短芽孢杆菌.在B17菌株发酵液的离体防效和温室栽培防效试验中,发酵液可以明显的减轻病害的发生,盆栽试验中,其防效为71.2%.     

烟草赤星病拮抗生防菌BS06-1的筛选

[目的]筛选对烟草赤星病具有明显拮抗作用的细菌。[方法]应用平板对峙培养法对从烟草根际分离到的细菌进行烟草赤星病拮抗性鉴定,对其中对烟草赤星病菌拮抗性较高的一株细菌利用细菌16S rRNA通用鉴定引物进行PCR扩增、测序和田间抗病性试验。[结果]共从烟草根际分离120份细菌,有6份对烟草赤星病病原菌具有一定拮抗作用,其中1份细菌拮抗作用明显,定名为BS06-1。将该细菌的16S rRNA测序结果登录NCBI网站进行Blastn序列比对,结果表明该菌株与枯草芽孢杆菌BSD-2同源性达到96%,与枯草芽孢杆菌BCRC 14718同源性达到95%,证明该菌属于枯草芽孢杆菌。田间试验证明该菌株BS06-1对烟草赤星病具有显著的抑菌效果。[结论]BS06-1细菌对烟草赤星病具有明显拮抗作用。     

烟草青枯病拮抗芽孢杆菌的筛选、鉴定及其抑菌活性初探

【目的】从不同烟区健康烟草的根际土壤样品中筛选对烟草青枯病具有较强拮抗作用的芽孢杆菌,为防治烟草青枯病提供生防资源。【方法】随机从福建龙岩、四川德昌、陕西汉中等地健康烟草根际土壤中采集30份土壤样品,采用平板稀释法从中分离芽孢杆菌,以烟草青枯病菌为靶标菌筛选拮抗芽孢杆菌,并通过培养特性、菌体形态、生理生化特征分析及16SrDNA序列分析,对筛选的拮抗芽孢杆菌菌株进行鉴定;采用温室盆栽试验,测定拮抗芽孢杆菌的促生作用、定殖能力和抑菌活性。【结果】从健康烟草根际土壤中分离得到1株抗烟草青枯病菌活性较好的菌株LW-4,经鉴定其为甲基营养型芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus。LW-4菌悬液对烟草青枯病菌的防治效果为70.37%,其可定殖于烟草根际土壤,具有良好的定殖能力。LW-4对烟草有明显的促生作用;用饱和度为25%的硫酸铵获得的LW-4抑菌物质对烟草青枯病菌的抑菌活性较高,抑菌圈直径达37.82mm。【结论】菌株LW-4在烟草青枯病防治中具有潜在的利用价值。     

1株烟草青枯病生防细菌的分离与鉴定

采用系列稀释法和平板涂布法从黔江烟区土壤中分离得到细菌菌株87株,经平板对峙法初筛得到1株对烟草青枯病病原菌有强烈拮抗作用的细菌,再通过滤纸片法验证其提取物对烟草青枯病病原菌有强烈的抑制作用,对该菌株进行全细胞脂肪酸分析,初步判断该菌为芽孢杆菌.16S rDNA分析结果表明,该菌为解淀粉芽孢杆菌.     

解淀粉芽孢杆菌对烟草叶片光合特性的影响

微生物菌剂是改良土壤、改善植株生长特性的重要方法。为探究烟田施用解淀粉芽孢杆菌对烟草光合特性的影响,以单施化肥的处理为对照,测定了烟草现蕾期施用解淀粉芽孢杆菌PEBA20菌剂后烟草叶片光合特性,并测定了烟草的农艺性状。结果证明,烟田施用解淀粉芽孢杆菌PEBA20影响了烟草的净光合速率,尤其对中部叶片的光合作用影响显著。与单施化肥的处理比较,施用PEBA20菌剂显著提高了中部叶片的净光合速率和蒸腾速率,且中部叶片的水分利用效率、瞬时羧化速率、瞬时光能利用率均显著增加;并且施用解淀粉芽孢杆菌PEBA20菌剂处理的烟草茎围、叶片数、株高、腰叶的叶面积也显著提高。可见,烟田施用解淀粉芽孢杆菌PEBA20菌剂可优化烟草的光合特性进而促进烟草的生长。该研究对利用解淀粉芽孢杆菌等微生物对长期连作和大量化肥施用的烟田土壤改良,具有可能的重要意义。     

烟草黑胫病拮抗细菌菌群的筛选

从湖南烟区烟草黑胫病重发田块采集根际土壤样品共900份,经富集培养后筛选出195个对烟草黑胫病菌有拮抗效果的细菌菌群。菌群Miseq高通量测序结果表明:不动杆菌属(Acinetobacter)和寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)为拮抗细菌菌群共有的优势属。挑选5个抑菌效果较好菌群施入烟田土壤,B44R菌群对烟草黑胫病防效达51.56%。将这5个细菌菌群进行拮抗菌株分离筛选,获得的拮抗菌株分别属于芽孢杆菌属、不动杆菌属、寡养单胞菌属和克雷伯氏菌属。施入菌群后的土壤高通量测序结果显示这些拮抗细菌菌群可在土壤中定殖,其中不动杆菌属和芽孢杆菌属的种群数量显著增加。     

烟草黑胫病菌拮抗内生细菌的筛选和鉴定

为寻找防治烟草黑胫病新途径,2001至2003年,从湖南永州和宁乡等地烟草黑胫病发病严重的田块采集健株,共分离到内生细菌株120株,经测定,8株内生细菌菌株在室内有较强的拮抗作用,这8株内生细菌与烟草黑胫病菌共培结果显示,55y,NN-3,YN-4和YN-10对烟草黑胫病菌抑茵效果均在66%以上．根据内生细菌形态特征和生理生化性状,初步鉴定内生细菌55y为假单胞杆菌属铜绿假单胞菌,NN-3为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌,YN-4,YN-10为芽孢杆菌属凝结芽孢杆菌,且这4菌株均为烟草内生细菌．     

解钾芽孢杆菌的分离·鉴定及其代谢产物分析

[目的]分离与鉴定具有解钾能力的芽孢杆菌,并对筛选出的细菌进行代谢产物分析。[方法]从土壤中分离得到1株具有解钾能力且有一定抗逆性的菌株YJ09,对其进行生理生化性质研究、16S rRNA序列分析,并考察解钾菌培养液中的组分及各组分对钾长石的分解作用。[结果]菌株YJ09为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）;解钾菌培养液中含有0.54g/L的有机酸、0.413 mg/L的氨基酸和2.80 g/L的多糖,起解钾作用的主要是多糖。[结论]该研究为具有解钾能力的地衣芽孢杆菌在微生物肥料中的应用提供了理论依据。