如何解决桩坯发芽不到位问题

在养坯过程中,我们经常遇到这样一个难题;每年春天,我们把一个上等的桩头,根干裁截到位,栽入盆中或地上,精心地养护,盼望着发芽生根,造型培育。经过一番耐心的等待后,终于看到了嫩绿可爱的小芽。可是,这些芽大都出在树桩的中下部,在最关键的上部截位,迟迟不能发芽,经过一个漫长     

辣椒花药培养影响因素的研究

以6种基因型辣椒的花蕾为材料,比较了不同基因型辣椒花蕾的消毒效果,辣椒基因型及花药接种量对花药培养的影响。研究结果表明,本试验的消毒方法获得了较好的消毒效果,3个基因型材料均未受污染,其他最高的污染率为23.08%;50%的基因型能诱导出胚状体,出胚率1.18%～1.38%,小果型的辣椒不能诱导出胚状体;所有基因型均能诱导出愈伤组织,出愈率17.65%～69.44%;花药接种量对花药愈伤组织诱导有影响,增大接种量,出愈率上升0.77%～13.67%,但对胚状体诱导影响不明显;在愈伤组织的继代培养中,接种量对其生长的影响因基因型不同而不同,所有基因型的愈伤组织在第一次继代培养中均不能分化出胚状体或不定芽。     

红薯茎尖愈伤组织胚状体的诱导研究

以"栗子香"红薯块根所生幼茎的茎尖为试材,探索了通过诱导形成愈伤组织获得胚状体的技术方法。将红薯块根置于人工气候培养箱中,在温度为30℃、12L/12D光照条件下1周后发芽,待长出幼茎,在无菌条件下,取红薯茎尖接种到含有5μmol/L2,4-D的MS’培养基中,在27℃、黑暗条件下诱导得到胚性愈伤组织,将胚性愈伤组织接种于不含2,4-D的MS’培养基中,在27℃、16L/8D光照条件下培养得到胚状体。试验结果表明,从红薯茎尖经由愈伤组织可形成胚状体,2,4-D在红薯茎尖愈伤组织形成过程中发挥着重要作用。     

火百合子房薄层培养器官发生的细胞组织学研究

 以火百合(Lilium ‘Star Gazer’) 子房薄层组织为外植体, 接种在附加BA 2.0 mg·L ^-1和NAA 0.2 mg·L ^-1的MS培养基上, 诱导出愈伤组织及器官。经细胞组织学观察表明: 细胞启动及愈伤组织产生于外植体近轴面和侧面的切口边缘及内方, 继而形成瘤状、棒状及胚珠状的突起, 之后从这些愈伤组织分化形成器官。火百合子房薄层培养中器官发生有3种方式: ①在愈伤组织表面形成芽; ②在愈伤组织内部或近表面形成根; ③在同一块愈伤组织表面形成芽, 内部形成根, 再通过维管系统连成1个完整的植株原始体。     

柑桔胚珠培养及胚状体发生的研究

选用‘Peng柑’、‘锦橙’、‘桃叶橙’、‘华农本地早’花后7周幼果胚珠进行培养，其胚状体发生的百分率分别是：48.5%、21.2%、19.8%、6.4%；胚性愈伤组织则为：28.2%、13.5%、15.8%、5.8%。各品种胚状体和胚性愈伤组织发生的百分率明显不同，与品种胚数多少相一致。不同激素和有机物对柑桔胚珠培养、胚状体的发生及胚性愈伤组织形成产生不同的影响，多单胚的‘华农本地早’仅从基本培养基中产生胚状体和胚性愈伤组织。胚珠培养中，胚状体发生的方式，根据来源不同分为三种：第一种是由胚珠（或已黄的球形胚上）长出白色的胚性愈伤组织，继而产生胚状体；第二种是在已分化的幼苗下胚轴或根部产生胚性愈伤组织和胚状体；第三种是在畸形胚上直接不断的分化出胚状体。     

茉莉花愈伤组织诱导及悬浮细胞培养

以茉莉花（Jasminum sambac）花瓣为外植体在不同培养基上诱导出愈伤组织,通过对其类型的筛选从中选择疏松愈伤组织进行悬浮培养后,初步建立悬浮细胞培养系。结果表明,不同激素可诱导出疏松型（CA）、泥状型（CB）和绿色块状型（CC）愈伤组织,其分化方向也不同。用CA型和CB型愈伤组织均能建立悬浮细胞培养系,其中以泥状愈伤组织为起始材料较佳,大约11 d可建立初步的悬浮细胞培养系。     

长寿花胚性愈伤组织的诱导及胚状体再生

 研究了长寿花胚性愈伤组织的筛选，胚状体的诱导发生、发育过程及植株再生。经过对外观及细胞学观察，看出外观质地疏松、颗粒状的淡黄色愈伤组织细胞圆形且形状规则，是胚性愈伤组织。诱导胚性愈伤组织的最适培养基为：MS+2，4-D 2 mg·L^-1 +BA 0.2 mg·L^-1；胚状体的诱导培养基为MS+BA 2 mg·L^-1 +NAA 0.2 mg·L^-1 +活性炭4 g·L^-1+蔗糖30 g·L^-1，胚状体诱导率可达185个胚状体；胚状体的再生培养基为MS+蔗糖30 g·L^-1。利用石蜡切片对胚状体的发生过程进行了观察。     

金丝小枣愈伤组织的诱导植株再生以及染色体变异的研究

以金丝小枣当年生枣头为外植体、以改良ＭＳ培养基为基本培养基，附加不同浓度的２，４—Ｄ、 ＩＢＡ诱导愈伤组织产生。 ２，４—Ｄ易诱导出疏松的Ⅱ型愈伤组织，ＩＢＡ则有利于致密的Ⅰ型愈伤组织形成，黑暗条件下诱导愈伤组织比光照条件下更有效。愈伤组织继代繁殖时，２，４—Ｄ的浓度影响了愈伤组织类型和染色体的数目变异。 两种类型愈伤组织再分化能力不同，Ⅱ型几乎没有分化出芽的能力、而Ⅰ型在相对高浓度６ＢＡ存在下分化出不定芽，同时在ＩＢＡ０．２＋６ＢＡ１的ＭＳ上诱导出大量胚状体。 选择了３０个芽丛再生植株元性系进行继代繁殖，０．３ｐｐｍＩＢＡ最有利于生根。这３０个植株无性系中有１个四倍体，２９个为二倍体。     

荔枝组织培养中胚状体产生的类型及分析

以荔枝２０—３０ｄ龄幼胚为外植体诱导产生愈伤组织，并筛选建立了幼胚胚性愈伤组织系。胚性愈伤组织在附加２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上诱导胚状体分化，在附加ＮＡＡ和ＩＢＡ的培养基中促进胚状体的发育和成熟。在体外胚胎发生过程中，形成大量各种类型的胚状体，其中出现不少异常胚；胚性愈伤组织继代培养过程中存在大量的染色体变异，这可能是产生异常胚的重要原因之一。     

不同生长调节剂对白刺花叶片愈伤组织诱导质量分析

以白刺花无菌苗叶片为试材,利用双因素正交实验设计,研究了不同生长调节剂对愈伤组织诱导效果的影响,以期筛选最佳的诱导培养基,为白刺花组培研究提供参考基础。结果表明:在MS培养基上,2,4-D与6-BA组合可诱导出较疏松型的愈伤组织,愈伤组织表面有瘤状突起且部分愈伤上有绿色芽点;2,4-D与KT组合也可诱导形成愈伤组织,但愈伤组织的生长及疏松度不及2,4-D与6-BA组合效果明显;NAA与6-BA,NAA与KT组合早期培养时在叶片边缘看到部分愈伤的生长,培养45d后愈伤开始褐化;在基本培养基研究筛选上,MB和B_5均能诱导愈伤组织,愈伤组织颜色稍显淡绿。2,4-D有利于白刺花愈伤组织的诱导,最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 1.0mg·L~(-1)+6-BA 1.0mg·L~(-1)+蔗糖4%+琼脂0.7%,出愈率75.58%,愈伤组织出愈早,疏松,生长旺盛。     

胡萝卜游离小孢子培养及其发育过程研究

 以11份不同基因型胡萝卜为试材进行游离小孢子培养研究,并对胚状体及愈伤组织形成过程进行细胞学观察。诱导培养92 d后,有5份材料形成肉眼可见的胚状体或愈伤组织。其中70198和80Q54均诱导出胚状体和愈伤组织,胚状体产率分别为每皿10.56和7.00个,愈伤组织产率分别为每皿3.56和8.38个;90234仅形成胚状体,产率为每皿6.75个;70Q78和80Q52仅产生愈伤组织,产率分别为每皿3.00和1.00个。细胞学观察表明胚状体和愈伤组织形成过程具有完全不同的结构特征。发育成胚状体的小孢子细胞壁变薄,膨大伸长,长度可至原来的1.5 ~ 4.0倍,有明显大液泡,初期细胞纵向分裂,成串排列,细胞之间紧密连接,而发育成愈伤组织的小孢子膨大成球状,多次分裂后松散地连接在一起。通过流式细胞仪鉴定70198、70Q78和80Q54获得的137株再生植株倍性,单倍体、二倍体及三倍体所占比例分别为68.6%、29.9%和1.5%。     

辣椒花药培养中若干影响因素的研究

 以4个辣椒品种(组合)为试材，通过正交试验，按不同取蕾时期，在培养基中添加不同浓度的硝酸银，维生素C、植物生长调节剂、氮源、碳源、核酸、活性炭等研究对辣椒花药培养中组织褐化、愈伤组织发生率、胚状体的发生率的影响。结果表明：硝酸银、维生素c能有效地减轻组织褐化；对于辣椒花药培养愈伤组织生成率影响较大的前4位依次是植物生长调节剂、活性炭、硝酸银、维生素C；对于胚状体发生率影响较大的前4位依次是维生素C、取蕾时期、碳源、硝酸银。     

菠萝非胚性愈伤组织的类型及其器官发生

以菠萝[Ananas comosus(L.)Merr.]非胚性愈伤组织为材料,利用离体培养及组织细胞学等方法研究了其在增殖、分化过程中的特性和再生规律。在增殖培养基上经过3次以上继代培养后,非胚性愈伤组织形态上逐渐表现出一定差异。根据其形态结构、分化能力和组织细胞学特征,可把非胚性愈伤组织分为节瘤状组织、薄壁组织团、致密深层愈伤组织和表面疏松愈伤组织4种类型;在增殖培养基MS+3.0mg/LBA+2.0mg/LNAA上,一种类型的非胚性愈伤组织通常只会生长出同类型的非胚性愈伤组织,但通过改变培养基配方等方法可使不同类型之间发生转换。同时,增殖继代过程中的器官发生现象很常见,通常是在薄壁愈伤组织表面细胞分化成具有分生能力的细胞,然后进行不定芽的分化。4类非胚性愈伤组织都可以通过拟原球茎、多芽体以及不定芽的形式进行器官发生;也可以经胚性诱导由体细胞胚发生途径再生成植株,其中拟原球茎产生体细胞胚的能力最强,多芽体其次。生长素及细胞分裂素对非胚性愈伤组织的形态结构、分化途径以及增殖能力有很大的影响。     

山药不同外植体诱导愈伤组织研究

研究了山药不同外植体愈伤组织的出愈方式和不同激素种类和浓度对愈伤组织诱导效果。结果表明，山药零余子、叶片、茎段3种外植体愈伤组织的发生方式存在差异，而且愈伤组织的发生率也各不相同，分别筛选到相应的最佳诱导培养基。     

分葱组织培养体细胞胚胎发生的研究

利用分葱茎尖培养成功地诱导了体细胞胚胎发生。具体步骤如下：Ⅰ．在ＭＳ＋２，４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基上诱导愈伤组织；Ⅱ．在ＭＳ＋２，４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基上进行愈伤组织的继代培养，继代培养３次以后，转变为胚性愈伤组织；Ⅲ．在ＭＳ＋２，４－Ｄ０．２５ｍｇ／Ｌ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基上进行胚状体的诱导；Ⅳ．在无任何激素的ＭＳ培养基上使胚状体再生植株。切片观察表明，胚状体大多数起源于愈伤组织表层及其以下细胞。     

普通狗牙根种子组培技术优化及植株再生

以普通狗牙根的成熟种子作外植体,通过胚性愈伤组织的发生进行植株再生。结果表明:诱导狗牙根种子产生愈伤组织的最佳培养基为:MS+2,4-D 3 mg/L+壳聚糖4 g/L;暗培养优于光培养,最高出愈率为87.0%;所诱导愈伤组织在1/2原激素浓度下继代,以MS+6-BA0.1 mg/L为分化培养基,获得了再生植株;半透明粘稠状愈伤组织的分化率最高,为63.1%。     

柑桔原生质体分离及再生植株的研究

用0.3％的果胶酶和0.3％的纤维素酶处理锦橙(Citrus sinensis Osbeck)胚性愈伤组织16小时,得到91.2％具有活性的原生质体。培养4天时,出现第一次细胞分裂,二个月时,再生出胚状体。胚状体转入加有赤霉素和硫酸腺嘌呤的培养基中一个月,再生成完整的植株。原生质体再生出的胚状体中,没有发现有染色体数目的变异。锦橙非胚性愈伤组织的原生质体能分裂形成细胞团,但没有再生出植株。对这种原生质体的再生和利用作了讨论。     

六月鲜枣愈伤组织诱导及胚状体发生

采用5因素4水平的正交试验设计,对六月鲜枣的幼叶、嫩茎、冷藏5d后的花药、花后48～50d的胚乳,利用3因素3水平的正交试验设计,对花后58～60d的幼胚及子叶,进行愈伤组织诱导再分化试验。探讨了不同激素、碳源和基本培养基对产生愈伤组织的影响。结果表明:碳源对胚乳、花药器官,基本培养基对嫩茎、幼叶、花药愈伤组织的诱导有显著影响,而且生长素种类和浓度对不同外植体的愈伤组织诱导作用不同;嫩茎、子叶及幼胚较易诱导产生愈伤组织,但只有子叶及幼胚产生的愈伤组织具较强的再生能力,并可诱导出不定芽,不定芽分化率分别为51.1%和9.5%,ZT较BA易诱导愈伤组织产生不定芽,不定芽转移生根成苗获得了完整植株。另外,用子叶及幼胚培养获得了大量胚状体,且胚状体最终可发育成苗。     

胡萝卜小孢子胚状体和愈伤组织的诱导

选用胡萝卜7个常规品种、10个自交系、16个F1代杂交种和6个F2代材料研究基因型、植物生长调节剂、AgNO3以及低温预处理（4 ℃）对花药培养的影响。在参试的39份材料中有6份材料产生小孢子胚状体,其中50071号材料出胚率最高,达到3.89%,有30份材料产生小孢子愈伤组织,其中600Q6号材料出愈率达到36.70%。在B5培养基上添加2,4-D和NAA组合中,选用的4份参试材料均产生小孢子愈伤组织,其中50071和70Q67号材料产生胚状体,而添加6-BA和NAA组合中均未产生胚状体和愈伤组织。培养基中添加AgNO3对部分材料的出胚率有一定促进作用,50071和70Q67号材料在8 mg · L-1 AgNO3下出胚率分别达到10.00%和2.00%。低温预处理对部分材料的胚状体及小孢子愈伤组织形成有一定作用,50069号材料经4 ℃ 1 d预处理出胚率达1%,预处理2 d和3 d出愈率均达到11.25%,70Q67号材料在3 d预处理后出胚率达到4.00%。经细胞学鉴定,在121株由胚状体产生的再生植株中93.39%为二倍体,说明胡萝卜花药培养过程中易发生自然加倍。     

黄瓜(Cucumis sativusL.)花药培养

以卡罗尔、HH1-8-57与津绿农家乐3个不同基因型黄瓜品种为试材,在Kumar等、Song等和詹艳等试验研究基础上,设计试验分别探讨低温预处理时间、培养基成分(胚性愈伤组织诱导培养基、胚状体诱导培养基)和基因型等因素对黄瓜花药培养的影响。结果表明:在4℃低温预处理2d时,胚性愈伤组织诱导率显著高于其他处理;在MS+1.0mg·L-12,4-D+0.5mg·L-16-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂培养基上胚性愈伤组织诱导率最高,达到81.3%;在MS+0.1mg·L-1NAA+3.0mg·L-16-BA+3%蔗糖+0.8%琼脂培养基上胚状体诱导率最高,为40.0%;基因型间胚性愈伤组织诱导率及胚状体诱导率差异显著,津绿农家乐品种胚性愈伤组织诱导率最高,达到81.1%,HH1-8-57胚状体诱导率最高,为40.0%。本研究从2份试材中成功地诱导出胚状体并获得了黄瓜单倍体再生植株。