大鼠肝酪蛋白激酶Ⅱ的分离纯化和鉴定

依次采用ＤＥＡＥ－纤维素、肝素－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，酪蛋白－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和羟基磷灰石层析将大鼠酪蛋白激酶Ⅱ纯化了２４８６倍，回收率９．５％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明ＣＫⅡ由三个不同亚基组成，分子量分别是３７，３５和２６ＫＤ。该激酶利用酪蛋白为底物，Ｃａ~（２＋），Ｃａ~（２＋）－磷脂酰丝氨酸和ｃＡＭＰ对ＣＫⅡ的活性无影响，而肝素对该酶的活性有抑制作用。     

大鼠睾丸支持细胞的分离纯化与鉴定

采用Ⅴ型胶原酶单次振荡消化法和低渗处理,及差速贴壁和免疫组化染色法,对大鼠睾丸支持细胞进行分离、纯化和鉴定。结果表明,该分离纯化方法对睾丸支持细胞损伤较小,获得的细胞活性较高,原代细胞存活率为85%,且无较大细胞团,接种后增殖迅速,并在第8天达到最高峰;细胞产率为6.5×105/g;绝大多数细胞呈F as-L阳性,细胞纯度可达95%;细胞核仁清楚,核仁周围可见着色较深的卫星核小体。     

纳豆芽孢杆菌的分离纯化及鉴定

根据纳豆芽孢杆菌耐热耐盐的特征分离纳豆芽孢杆菌菌株.由纳豆粉中分离纯化出1株纳豆菌株,由家庭自制纳豆中分离纯化出5株纳豆菌株,并对这6株纳豆芽孢杆菌的细胞、菌落形态及生理特性进行研究.结果表明,这6株纳豆菌均属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

水磨年糕中微生物的分离纯化与鉴定

通过对年糕内部和表面的微生物进行分离纯化,并通过形态观察、生化测定的方法来鉴定微生物的组成,结果表明:年糕表面的微生物主要有6种细菌、3种霉菌和2种酵母菌。细菌中4种是芽孢杆菌,分别为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和短芽孢杆菌(Bacillus brevis),2种是非芽孢杆菌,分别为乙酰短杆菌(Brevibacterium acetylicum)和乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus);霉菌分别为米根霉(Rhizopus oryzae)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和米曲霉(Aspergillus oryzae);酵母菌分别为茁芽丝孢酵母(Trichosporon pullulans)和白色假丝酵母(Candida albicans)。年糕内部的微生物有巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、短芽孢杆菌和白色假丝酵母,无霉菌。     

啤酒酵母多糖的分离纯化与初步鉴定

[目的]从啤酒废酵母中分离纯化出多糖，并对其组成和性质进行初步鉴定。[方法]用常规方法分离纯化啤酒酵母多糖，并用HPLC、比旋度测定和醋酸纤维薄膜电泳等方法测定BPS2。[结果]粗多糖收率为9．7％，为浅色粉灰。BPS2为均一组分，苯酚-硫酸法测定其糖含量为95．2％，GC分析其单糖组成为Man和Glc，摩尔比为1．08：1．00。[结论]试验提取的粗多糖为一种新多糖，其主要成分为BPS2，为啤酒酵母的利用提供了基础。     

东北枸杞多糖分离纯化及鉴定

研究了东北枸杞多糖的提取、分离纯化及其组分和结构的鉴定,结果表明:枸杞多糖水提的最佳条件为提取温度100℃,pH值11,料液比1:20,浸提2h;通过DEAE-SephadexA-50柱层析得到纯度较高的LBP-4,薄层分析LBP-4主要是由鼠李糖、木糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖醛酸组成.红外光谱和刚果红实验分析LBP-4具有糖类的特征吸收峰,是多种单糖通过α糖苷键及β糖苷键连接组成的杂多糖,不具有三股螺旋结构.     

大鼠大脑皮质神经元体外分离培养和纯化研究

为建立动物中枢神经疾病的细胞作用模型,根据大鼠大脑皮质神经元的生存特性。按照抑制筛选的原理,对大鼠大脑皮质神经元进行了体外培养、纯化和鉴定。结果表明:培养的大脑皮质神经元在体外发育良好,经神经元特异性的烯醇化酶(NSE)免疫组织化学染色证明其纯度较高,可以用于进一步细胞作用模型的建立。     

水稻稻瘟病病原菌分离纯化及分子鉴定

从牡丹江市不同水稻栽培地采集疑似感染稻瘟病的水稻叶片,用PDA培养基进行病原菌分离纯化培养,通过观察菌落黑色素及分生孢子的形态进行初筛鉴别;采用试剂盒提取菌丝DNA,利用稻瘟病菌特异引物进行PCR扩增,对扩增产物进行测序及Nucleotide Blast比对。结果表明,6个栽培区采集病样经初筛确定5株有黑色素分泌且观察到其分生孢子,测序证实其中2个样品PCR产物序列相同,且与NCBI网站公布的半知菌亚门的灰梨孢(Pyricularia grisea)高度同源,确定获得稻瘟病菌纯菌株。     

SD大鼠睾丸支持细胞的分离、培养、纯化及鉴定

为进一步简化、优化SD大鼠睾丸支持细胞的体外培养条件及鉴定方法,采用三酶两步消化法和差异贴壁法分离、培养、纯化SD大鼠支持细胞,并用HE染色、油红染色、Feulgen染色及透射电镜扫描其超微结构予以鉴定。结果表明：平均0．10g睾丸组织可获得2．5×10^6个支持细胞,细胞存活率90％以上,体外培养5h后开始贴壁,96h后细胞生长速率下降,其对数生长期为3—7d,整个体外生长周期约为10～15d。对获得的纯化细胞进行鉴定,发现其形态结构及超微结构与支持细胞的形态特征一致。可见,采用三酶两步消化法和差异贴壁法,可达到分离、培养、纯化SD大鼠支持细胞的目的。     

双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)的真核表达、纯化及鉴定

[目的]获得真核表达的Flag-PKR融合蛋白,以用于流感病毒相关的PKR信号通路调控机制研究。[方法]以RT-PCR方法扩增PKR目的基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.0-Flag中。将所构建的重组质粒pcDNA3.0-Flag-PKR转染293T细胞,利用Flag抗体偶联的琼脂糖凝胶(anti-Flag M2-Agarose)纯化Flag-PKR融合蛋白,所得产物进行SDS-PAGE、Western blot及体外活性鉴定。[结果]重组质粒转染293T细胞,Western blot显示表达出的融合蛋白能够被抗Flag的抗体特异性识别,其相对分子量约为69 kDa,与Flag-PKR融合蛋白大小相符;体外磷酸化试验表明,Flag-PKR融合蛋白能够发生自动磷酸化。[结论]在293T细胞中表达、纯化了有活性的Flag-PKR融合蛋白,为PKR信号通路的研究奠定了基础。     

酸马奶中乳酸菌的分离、纯化与鉴定

分别从乌鲁木齐市水西沟镇、伊犁地区、吉尔吉斯斯坦和哈萨克斯坦采集的酸马奶样品中,分离纯化得到乳酸菌21株.经形态学、生理生化特性研究分别鉴定为乳杆菌属(Lactobacillus)17株,分别为干酪乳杆菌(L.casei)、消化乳杆菌(L.alimentarius)、詹氏乳杆菌(L.jensenii)、耐酸乳杆菌(L.acetotolerans) 、戊糖乳杆菌(L.pentosus)、德氏乳杆菌德氏亚种 (L.delbrueckii subsp.delbruerkii)、玉米乳杆菌(L.zeae);乳球菌属(Lactococcus)1株,为植物乳球菌(L.plantarum);肠球菌属(Enterococcus)1株,为粪肠球菌(E.faecalis);明串珠菌属(Leuconostoc) 1株,为肠膜明串珠球菌(L.mesentaroides)中的葡聚糖亚种(subsp. mesentaroides);链球菌属(Streptococcus)1株,为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus ).     

一种抗真菌抗生素的分离纯化及初步鉴定

从海南五指山采集的土样中分离到一株放线菌,编号为WS-23883,其发酵提取物对多种植物病原真菌具有很强的抑制活性。对其产物进行提取精制及制备液相纯化,获得了纯度达90%以上的化合物。生测表明,在20μg/mL浓度下该抗生素对多种植物病原真菌的抑制率达100%。根据活性产物紫外吸收光谱,可判断其为一多烯大环内酯类抗生素。质谱分析表明,活性化合物分子质量约667 u,据此判断其为一四烯大环内酯类抗生素。     

解磷细菌的分离纯化鉴定与生物学特性研究

[目的]为解磷菌解磷机理的研究奠定基础。[方法]采用有机磷和无机磷两种不同的培养基,对有机磷细菌和无机磷细菌进行分离,纯化和鉴定获取解磷菌株并对其生物学特性进行研究。[结果]从4种菌肥中分离并鉴定了4种解磷能力较强的菌株,并从菌肥来源上比较了4种菌肥的解磷能力,结果表明源自菌肥肥田生的菌株解磷能力最强,源自菌肥垦易的次之。这4株菌株在含磷酸钙盐比例较小的培养基中透明圈明显,而在比例较大的培养基中的解磷能力受到限制,不出现透明圈。从有机磷培养基中分离得到的菌株5号在无机磷培养基上也有明显的透明圈。[结论]有机磷细菌和无机磷细菌的解磷机理在某些方面是吻合的。     

一株蛭弧菌的分离、纯化与PCR鉴定

以弧菌为宿主菌,从南美白对虾养殖池水中分离纯化到一株蛭弧菌,根据噬菌蛭弧菌hit基因序列设计引物并进行PCR扩增,得到了近710bp的扩增产物,经测序比对鉴定,该产物与噬菌蛭弧菌的hit基因100%同源,表明该菌为噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio bacteriovorus)。     

污染疫苗的禽腺病毒分离和鉴定

在用非免疫鸡胚增殖鸭病毒性肝炎病毒(E52株)过程中，发现种毒受到污染。采用聚乙二醇沉淀．Sephadex G100柱层析法纯化污染病毒，在电镜下发现一大小为70～80nm，无囊膜，20面体对称的病毒颗粒。挑选4条随机引物对其进行反转录PCR扩增，共扩增出3条基因片段。序列分析结果表明，与禽腺病毒(鸡胚致死孤儿病毒)基因组部分序列同源性分别高达99．5％、99．6％和99．5％，从而证明禽腺病毒污染了鸭病毒性肝炎病毒鸡胚尿囊液种毒。     

大鼠胰岛的分离、纯化与评价方法改良

【目的】简化胰岛的分离纯化方法,建立完善的胰岛评价体系。【方法】采用Ⅴ型胶原酶分离出Spra-gue-Dawley大鼠胰岛,并采用改良的3层Dextran不连续密度梯度离心法纯化胰岛。纯化的胰岛通过双硫腙(Dithi-zone,DTZ)染色进行计数及纯度检测,丫啶橙(AO)-碘化丙啶(PI)双染色法确定分离细胞的存活率,体外葡萄糖刺激释放胰岛素试验检测胰岛的分泌活性。采用Adobe Photoshop程序改进了常规的胰岛计数方法,并进行胰岛标准计数。【结果】平均每只成年Sprague Dawley大鼠的胰腺,可获得(3 840±24)当量数(IEQ)纯化胰岛,纯度可达到90%,细胞平均存活率达92%。【结论】采用改良的3层Dextran不连续密度梯度离心法及基于Adobe Photoshop程序的标准计数方法,可分别用于大鼠胰岛分离纯化和计数。     

苍耳素Ⅲ-1的分离纯化及鉴定

以黄瓜枯萎病菌为供试菌,采用生物活性示踪法,对苍耳丙酮提取物Ⅲ-1的抑菌成分进行分离.结果表明:苍耳丙酮提取液Ⅲ-1对黄瓜枯萎病菌有抑制作用的有效成分主要集中在2~7、9~11和19、21等10个流份中,其中流份5的抑制率达到51.00%;通过薄层层析分离和GC-MS联用仪鉴定,发现苍耳素Ⅲ-1的主要抑菌成分有呋喃甲醛、5-羟甲基糠醛、4-羟基-4-甲基-2-戊酮等.     

蛇足石杉内生真菌的分离纯化与鉴定研究

从药用植物蛇足石杉中分离内生真菌,并对其进行初步鉴定.先在MS培养基上对蛇足石杉的茎、叶和孢子进行离体组织培养;然后在PDA平板培养基上,分别对茎、叶和孢子离体培养中产生的内生真菌进行分离;最后对照真菌鉴定手册,根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基颜色变化,以及菌丝体和孢子的形态特征进行鉴定.结果从蛇足石杉的茎中分离出4株内生真菌菌株,分别属于顶孢霉属、头孢霉属、酵母属和束梗孢霉属;从叶中分离出2株内生真菌菌株,分别属于头孢霉属和青霉属.     

软枣猕猴桃内生真菌的分离纯化及分子鉴定

以软枣猕猴桃(Actinidia arguta)枝条为试验原料,采用内生真菌三步消毒法(乙醇-次氯酸钠-升汞)对样品进行表面消毒,从软枣猕猴桃枝条组织分离出一株内生真菌菌株,命名为Y1,对Y1进行核糖体18S rDNA克隆测定,获得长度为1 020 bp的18S rDNA序列,在NCBI数据库上进行同源性比对,构建18S rDNA系统发育树,并进行系统发育分析,鉴定该菌为子囊菌(Sac fungi)。     

拟南芥蛋白激酶 SnRK2．6的原核表达、纯化及活性分析

从哥伦比亚生态型拟南芥（Arabidopsis thaliana Columbia 0）中克隆 SnRK2·6[SNF1（su-crose non-fermenting-1）-related protein kinase 2·6]的完整编码序列（coding sequence,CDS）,构建该基因的原核表达载体,将其转化 BL21（DE3）,经表达纯化得到 SnRK2·6蛋白。激酶活性分析发现,原核表达纯化的 SnRK2·6有自磷酸化和磷酸化 MBP（myelin basin protein）的活性,为后续试验分析 SnRK2·6的功能奠定基础。