基于UPLC-MS/MS方法的家禽水产品中氯霉素残留检测

为家禽水产品中的氯霉素残留快速检测提供参考,以氯霉素-D5为内标,用乙酸乙酯提取样品氯霉素残留、正己烷进行脱脂净化、UPLC-MS/MS方法进行氯霉素残留含量检测。结果表明:在氯霉素浓度为0.2~10ng/mL时,基质标准曲线的方程为Y=0.816 397 X-0.038 239,R2=0.998 2,氯霉素与峰面积的线性关系良好,最低检出浓度为0.1μg/kg,样品的添加回收率为80%~110%,RSD5%。该方法可用于家禽及水产品中氯霉素残留定性和定量检测,且其精密度和准确度良好,操作简单快速。     

蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立和比较研究

 为建立一种检测成本低、操作简便的蓝舌病血清抗体监测方法,本研究通过制备群特异性的蓝舌病多克隆检测抗体和优化抗原固定技术,建立了蓝舌病多克隆抗体C-ELISA检测方法。通过对150份牛羊已知阴性血清的检测确定该检测方法的cut-off值为40%;对58份已知阳性血清样品同时进行中和实验和C-ELISA检测,检测结果经SPSS软件进行t检测统计分析,Sig.（双侧）=0.651,相关性0.912,相关性显著。对24个BTV血清型阳性血清,2份牛BVD阳性血清,2份羊口蹄疫阳性血清,2份羊痘阳性血清进行检测。结果表明,24个BTV血清型阳性血清为阳性,其他血清全部为阴性。对150份已知阴性血清和55份已知阳性血清用中和试验、美国VMRD 公司试剂盒和本方法分别进行检测。结果表明,本检测方法与中和试验检测结果符合率达100%,进口试剂盒符合率为96.7%。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

基于PCR-LFB的羊源性成份检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成份检测技术,为动物源性成份的检测提供新思路。方法:进行动物源性成份DNA快速提取;针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增;制备LFB对羊源性成份核酸扩增物进行检测。结果:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。结论:建立的羊源性成份PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

新和县重大动物疫病免疫抗体监测情况分析

为全面掌握新和县重大动物疫病免疫效果,对新和县8个乡(镇)随机采集血清样品3 774份进行了检测,牛、羊血清采用酶联免疫吸附试验(ELISA),家禽血清样品采用微量红细胞凝集抑制试验(HI)检测免疫抗体。结果表明,牛免疫抗体合格率为82.9%,羊免疫抗体合格率为78.1%,家禽免疫抗体(H5亚型)合格率为77.3%,均达到了农业部规定标准,可见新和县重大动物疫病强制免疫效果较好。     

基于PCR-LFB的羊源性成分检测方法建立

为建立基于样品DNA快速制备、PCR-LFB的羊源性成分检测技术,为动物源性成分的检测提供新思路。进行动物源性成分DNA快速提取,针对绵羊线粒体基因组序列设计基因特异性引物及探针进行PCR扩增,制备LFB对羊源性成分核酸扩增物进行检测。结果表明:样品DNA快速制备技术操作简单、耗时少;PCR-LFB对羊基因组DNA检测灵敏度为常规琼脂糖凝胶电泳的10倍,特异性为100%,对9种商业化羊肉样品均可检出。建立的羊源性成分PCR-LFB检测技术,具有简单、快速、准确的特点。     

大熊猫自然感染细小病毒的血清学调查

建立一种检测大熊猫血清中犬细小病毒 (canine parvovirus,CPV)抗体的间接酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。

以大熊猫源CPV DNA为模板,利用PCR扩增VP2基因,再用原核表达系统对VP2基因进行表达,经纯化后的蛋白作为ELISA包被抗原;制备并纯化兔抗大熊猫IgG,采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记作为间接ELISA酶标二抗,通过棋盘法确定抗原包被质量浓度及血清稀释度等条件,并评估建立方法与商业试剂盒检测样品结果的符合率。

原核表达成功获得约70 ku的VP2蛋白,将其作为间接ELISA包被抗原,抗原最佳包被质量浓度为2.0 μg/mL,血清最佳稀释度为1∶400,用该方法进行检测血清样品时OD₄₅₀≥0.258为阳性,反之为阴性。采用建立的ELISA方法检测大熊猫血清样本阳性率为60.0%,高于商业化检测试剂盒检测的阳性率(52.5%),两者总符合率达到87.5%。

本研究首次建立了基于大熊猫源CPV VP2蛋白为抗原、自制HRP标记兔抗大熊猫IgG为酶标二抗的间接ELISA方法,该方法特异性强、灵敏性较高、重复性好,为大熊猫血清中CPV抗体的检测提供了技术支持。

     

牛轮状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)便捷检测方法，为福建省BRV的流行病学调查检测提供便捷技术支持。【方法】根据GenBank公布的BRV基因组序列，利用Oligo7.0软件设计并合成1对特异性引物，通过优化反应条件，建立了检测BRV的RT-PCR方法，同时开展了特异性、敏感性和重复性试验，并将建立的方法应用于22份临床样品的检测。【结果】建立的方法仅能够扩增出BRV的特异性片段，对其他畜禽常见病原体无特异性扩增；该方法的灵敏度为6.86×10⁵ copies·μL^-1。对22份临床样品进行检测，检测出12份阳性样品，阳性率为54.55%。【结论】本研究建立的BRV RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性，可应用于临床样本的检测，为福建省BRV的诊断和流行病学调查提供了技术支持。     

利用通用引物检测天然宠物饲料中的动物源性成分

[目的]为天然宠物饲料的快速筛查和种类鉴定提供有效的技术支持.[方法]根据动物线粒体细胞色素b基因序列,设计1对通用引物,建立动物源性成分的检测方法.[结果]通过设计并合成通用引物、优化PCR反应体系及其条件,建立了1种检测样品中动物源性成分的简便、快速PCR方法.该检测方法灵敏度高,最低检测限可达0.001％.[结论]该检测方法操作简便、结果准确、灵敏度高,可作为天然宠物饲料中动物源性成分的鉴定方法之一.     

鹅星状病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法的建立

为建立快速检测鹅星状病毒(GAstV)的方法,本研究根据GenBank中GAstV ORF2基因序列设计1对特异性引物,构建重组质粒pMD19-T-GAstV,以其作为标准品建立了GAstV的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。优化其反应条件及体系,进行特异性、敏感性和重复性试验以及临床样本检测。试验结果显示,除GAstV外,禽白血病病毒(ALV)、血清4型禽腺病毒(FAdV-4)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)等常见禽病病原利用该方法检测均呈阴性,表明其特异性良好;建立的荧光定量RT-PCR检出的最低模板含量为1μl 3.75×10~1拷贝,敏感性较高;组内和组间重复性试验变异系数均小于1%。利用该方法对来自安徽地区的32份临床样品进行检测,阳性检出率为43.75%,常规PCR方法阳性检出率为18.75%,阳性检出符合率100%,表明该方法可用于临床样品检测。该方法的建立为临床样品中GAstV的快速高效检测提供了技术支持。     

动物源性成分鉴别的样品制备方法研究——应用于PCR及荧光定量PCR方法的样品制备

为减少因样本选择引起的误差,把抽样可能存在的片面性问题的风险降到最低,确保制备后的DNA质量,对动物源性成分鉴别样品的前处理方法进行了研究,将用同样采集方法得到的粗样品,经四分法均匀化和非均匀化的不同预处理后,以同样的提取和检测方法,与制备的标准对照品一起进行了检测。结果表明,市售的3 2份样品经均匀化后的检测结果符合率在9 3.7%以上。表明本实验研究及建立的动物源性成分鉴别样品的取样及预处理方法是有效可行的,能满足实时荧光PCR实验对样品均匀性的要求。     

鼠伤寒沙门菌免疫磁珠的构建及应用效果评价

【目的】制备鼠伤寒沙门菌高免血清并纯化抗体,构建免疫磁珠,进行吸附效果评价,为建立鼠伤寒沙门菌快速检测方法奠定基础。【方法】利用试验兔制备高免血清,检测效价后纯化提取IgG抗体,纯化后的抗体采用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺方法与四氧化三铁磁性纳米颗粒偶联,制备出鼠伤寒沙门菌免疫磁珠。利用抗原抗体反应原理,通过免疫磁珠对样品中的鼠伤寒沙门菌进行富集分离,将鼠伤寒沙门菌捕获到磁珠表面,达到检测鼠伤寒沙门菌的目的。【结果】制备出的血清效价达1∶51 200,纯化后的抗体特异性强,仅与鼠伤寒沙门菌有凝集反应,与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、单增李斯特菌均无凝集反应;制备的免疫磁珠能够富集奶样样品、肉样样品与蛋黄样品中的鼠伤寒沙门菌,灵敏度为10¹CFU/mL。【结论】该研究制备的鼠伤寒沙门菌免疫磁珠,能够有效富集各种样品基质中的鼠伤寒沙门菌,有望用于鼠伤寒沙门菌快速检测方法的建立。     

转基因玉米MIR604结构特异片段实时荧光定量检测方法的建立

根据转基因玉米MIR604外源载体序列,设计引物和探针,并优化反应体系和热循环条件,建立了MIR604结构特异片断实时荧光定量PCR检测方法。采用该方法对6种非转基因作物、MIR604及其他非目标转基因作物进行检测,除MIR604外,其余样品均未检测到MIR604分子片段的扩增信号;对含量为1%的MIR604标准品进行定量检测,测试样品平均含量为1.05%;灵敏度测试结果显示该方法能检测到仅5个拷贝的MIR604分子片段。因此,本研究建立的方法具有较高的特异性、准确度及灵敏度,能为中国转基因生物安全监管提供技术支持。     

动物布鲁氏菌病不同初筛及确诊方法组合检测差异性比对分析

为探讨布鲁氏菌病采用先初筛、后确诊不同方法及试剂组合检测结果的差异性，对实验室保存的133份牛、羊血清，以英国布病参考实验室RBT、SAT、APHA-cELISA方法为标准确定布病阳性血清73份、阴性血清60份。选择4种初筛方法共6种试剂、2种确诊方法共3种试剂，按照先初筛，对结果阳性样品再确诊的检测程序对确定的133份血清样品分别用6种方法(9种试剂)进行检测，结果表明：用18种组合方法检测牛阳性血清样品，符合率100%的有3种，检测结果假阴性率为0～53.33%;用12种组合方法检测羊阳性血清样品，符合率100%的有2种组合方法，检测结果假阴性率为0～50.00%。用所有方法检测牛阴性血清样品，符合率100%的有1种方法(试剂),检测结果假阳性率为0～77.78%;检测羊阴性血清样品，符合率100%的有4种方法(试剂),检测结果假阳性率为0～41.67%。应用不同的初筛、确诊组合方法检测同批样品，结果出现了多样性。建议布病初筛可优先选择iELISA、RBT、FPA,确诊可优先选择cELISA。     

乐果检测方法的研究进展

为乐果检测方法的选择提供参考,以及为乐果检测新方法的研究提供借鉴,介绍了近年来在食品、土壤、血液等多种样品中的乐果残留含量检测技术的研究进展,包括样品前处理技术和分析检测方法。样品前处理主要从乐果的提取和样品的净化两方面阐述,分析检测方法则包括了气相色谱法、液相色谱法、质谱法、超临界流体色谱法、光度法、酶联免疫法等,最后对乐果检测方法进行了展望。     

猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测及注意事项

正猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测是检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体水平的一种方法,是检验免疫效果的重要依据。检测过程中如果不严格遵守操作规程检测,将对检测结果产生影响,现将本人多年来检测操作及注意事项归纳如下,供大家参考。1样品准备血清稀释板中,用样品稀释液按1:1比例稀释待检血清、阳性和阴性对照血清(例如:120μl样品稀释液中加120μl待     

环境监测取样在农田土壤中的运用分析

我国作为农业大国,农田是人们赖以生存之本,而土壤质量检测则是环境监测的重要组成部分.为做好农田土壤的检测工作,则需要提高环境监测取样的工作水平.从农田土壤的监测点选择、样品采集、土壤检测取样、采集样品的运送、制备样品、样品的保存等具体过程与要点进行了深入的分析与探索,旨在为进一步提高农田土壤质量提供更多的实施依据和指导...     

牛结核病PPD皮内变态反应和ELISA检测方法对比分析

本试验采集了2个牛场的10头疑似结核病的血清,采用ELISA方法进行牛结核病抗体检测,同时对该10份样品进行了PPD皮内变态反应,通过两种检测方法的比较,以期筛选出切实可行牛结核病的检测方法,为牛结核病的净化提供基础。