山羊卵泡母细胞体外受精及受精卵的体外发育

对山羊卵泡卵母细胞的体外成熟,体外及受精卵体外培养的系列研究表明、在成熟培养液中添加１５μｇ／Ｌ,重组牛生长激素,与ＦＳ睡ＬＨ配合使用,卵泡卵母细胞的成熟率（６７．９％）显著高于不含ｒｂＧＨ的培养组;３８．５℃和３９．０℃的培养温度以 卵母细胞体外成熟培养的影响无显著差异;ＢＯ液上浮法对山羊冷冻精子的活精子分离效果优于Ｐｅｒｃｏｌｌ分层液法,并得到较高的受精率;颗粒细胞单层和输卵管上皮细胞单层扔共     

山羊卵泡卵母细胞体外受精及受精卵的体外发育

对山羊卵泡卵母细胞的体外成熟、体外受精及受精卵体外培养的系列研究表明,在成熟培养液中添加１５μｇ／Ｌ重组牛生长激素（ｒｂＧＨ）,与ＦＳＨ和ＬＨ配合使用,卵泡卵母细胞的成熟率（６７．９％）显著高于不含ｒｂＧＨ的培养组（５３．１％,Ｐ＜０．０５）;３８．５℃和３９．０℃的培养温度对卵泡卵母细胞体外成熟培养的影响无显著差异（Ｐ＞０．０５）;ＢＯ液上浮法对山羊冷冻精子的活精子分离效果优于Ｐｅｒｃｏｌ分层液法,并得到较高的受精率（６４．３％∶４９．０％,Ｐ＜０．０５）;颗粒细胞单层和输卵管上皮细胞单层的共同培养体系均有益于受精卵的体外发育。     

两种方法对牛体外受精及体外发育的影响

本研究包括２个试验。试验１，采用由多种大分子物质组成的生物试剂Ｐｅｒｃｏｌ做成离心梯度，离心处理精液获得较高活率的精子。将其用于卵母细胞的体外受精，在使用４５μＬ大小的受精滴及２×１０６个／ｍＬ的最终受精精子浓度时，加入２０个或４０个卵母细胞，二者均获得较高的分裂率（％）８９．０±５．０、８８．１±３．８及囊胚率（％）５１．０±７．０、４６．３±１６．７。试验２，为了更接近胚胎在母牛体内发育的实际状态（动态），采用一种新的方法即将摇床振动培养引入牛早期胚胎的体外发育阶段，以期提高胚胎发育质量。结果表明，在早期胚胎基数及环境因素完全一致的前提下，振动培养组的囊胚发育率（％）及囊胚卵化率（％）分别为６１．１±１２．２、８２．６±６．８，而常规的静置培养组为６７．４±６．３、８８．０±７．４，方差计算表明二者无显著差异（Ｐ＞０．０５）。     

牛孤雌生殖胚与体外受精胚体外发育比较

从卵巢采集的卵丘-卵母细胞复合体(COCs)经体外成熟培养24 h后,随机分为2组分别用于孤雌激活与体外受精.在相同培养条件下,比较孤雌生殖胚与体外受精胚的发育率和发育速度.结果表明将牛孤雌生殖胚与体外受精胚分别置于mSOFaa和mBECMaa培养液中培养,卵裂率(89.3%vs.80.1%;83.2%vs.82.5%)、囊胚发育率(27.5%vs.24.0%;28.9%vs.21.9%)和孵化率(58.7%vs.56.7%;51.5%vs.53.3%),均无显著差异(P＞0.05);孤雌生殖胚与体外受精胚在体外发育的速度基本相同.对孤雌生殖胚胎进行培养可以代替体外受精胚胎筛选最佳体外培养系统.     

氨基酸、维生素对水牛体外受精胚胎体外发育的影响

通过在培养液中添加不同浓度的氨基酸或维生素,探讨其对水牛体外受精(IVF)胚胎体外发育的影响.结果表明:(1)非必需氨基酸可显著提高水牛卵母细胞IVF后胚胎的分裂率,但对囊胚发育率无显著影响;(2)低浓度的必需氨基酸对水牛IVF胚胎的发育具有一定促进作用,但高浓度则有抑制作用;(3)维生素对水牛IVF胚胎发育则有促进作用.在培养液中添加维生素,水牛IVF胚胎的分裂率和第7天囊胚发育率显著提高.     

L-谷氨酰胺、BSA对家兔卵母细胞体外受精及受精卵体外发育的影响

目前,体外受精技术在治疗人类不孕症以及提高动物繁殖率和优秀母畜繁殖力等方面已成为一种有效手段.笔者以家兔为试验动物,探讨L-谷氨酰胺、牛血清白蛋白(BSA)对家兔卵母细胞体外受精及受精卵体外发育的影响,旨在更好地了解整个受精过程的生理机制,为畜牧业生产提供更多的胚胎来源与相关技术.     

家畜体外受精技术研究新进展

体外受精技术是由卵母细胞成熟、精子获能、受精、受精卵体外培养、胚胎移植等程序组成的完整系统.笔者较详细地综述了该技术近年来的研究现状、进展,并对其发展前景进行了探讨.     

体外受精温度、时间及卵子质量对延边黄牛受精卵体外发育的影响

本研究探讨了体外受精温度、时间及卵子质量对延边黄牛卵母细胞体外受精后体外发育的影响。试验结果表明，体外受精温度为39℃、体外受精时间12h时，卵裂率、囊胚发育率及囊胚孵化率最佳；卵子的质量对受精卵体外发育的影响很大。     

家畜体外受精技术研究新进展

体外受精技术是由卵母细胞成熟、精子获能、受精、受精卵体外培养、胚胎移植等程序组成的完整系统。笔者较详细地综述了该技术近年来的研究现状、进展，并对其发展前景进行了探讨。     

猪卵巢卵母细胞的体外成熟及体外受精

从屠宰猪的狼巢卵包中抽取卵母细胞，在ＣＯ２培养箱中成功地进行了卵母细胞体对成熟和体外受精试验。在５％ＣＯ２和９５％空气的湿润条件下把带有卵丘细胞２的卵母细胞在ＴＣＭ－１９９＋ＰＭＳＧ＋ｅｓｔ．ｒａｄｉｏｌ－１７．     

Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响

本研究的目的是探讨Ghrelin对水牛体外受精和孤雌激活胚胎体外发育的影响.体外成熟的水牛卵母细胞经体外受精或离子霉素孤雌激活后.分别在舍0,0.5,5,50和500 μg/L Ghrelin的培养液中进行体外培养,观察各组胚胎的卵裂率和囊胚率.结果显示,在培养液中添加不同浓度的Ghrelin对体外受精和孤雌激活胚胎的卵裂率均无显著影响(P>0.05),但添加500 μg/L的Ghrelin显著提高体外受精胚胎的囊胚发育率(33.5% vs 13.7%,P<0.05),50 μg/L或500 μg/L的Ghrelin均显著提高孤雌激活胚胎的囊胚发育率(32.4%和34.6% vs 14.5%,P<0.05).结果表明,培养液中添加Ghrelin对胚胎的早期卵裂没有影响,但可促进水牛体外受精和孤雌激活胚胎囊胚的形成.     

貉卵母细胞体外成熟的研究

采用不同生理期的貉（Ｒａｃｏｏｎ ＤＯＧ）卵巢卵母细胞,用两种不同培养基进行培养,观察其扩展率和生发泡破裂（ＧＶＢＤ）率。结果表明在培养２４￣３６ｈ之间为发育的高峰期,而３６ｈ后其发育率均不再显著的增加,同时表现出含ＨＣＧ的培养基其ＣＯＣ扩展率和ＧＶＢＤ率,显著高于无ＨＣＧ组。而繁殖期与非繁殖期其发育效果有显著的差异。     

牛体外受精胚胎卵裂阶段对其体外发育能力影响的研究

将经过体外成熟培养（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）后获得的牛早期胚胎，按其所处卵裂阶段的不同，划分为２细胞、３～４细胞和５细胞以上３个试验组，在体外条件下继续培养到发育囊胚和孵化囊胚阶段，以观察在胚胎早期，受精卵裂发育的快慢与其后胚胎所获得的继续发育能力的关系。结果显示，牛早期胚胎体外囊胚发育率的高低，与其在体外培养（ＩＶＣ）前卵裂发育的快慢成正比。在ＩＶＦ后４２～４６ｈ处于２细胞、３～４细胞和５细胞以上卵裂阶段的早期胚胎，其囊胚发育率分别为６．５％、２１．４％和４４．９％，差异非常显著（Ｐ＜０．００１）；而经过７～９ｄ的ＩＶＣ后仍滞留在ＩＶＣ前原卵裂阶段，丧失继续发育下去能力的胚胎比率则分别为５１．６％、３２．７％和２５．７％，与其ＩＶＣ前卵裂发育的快慢成反比。在ＩＶＦ后６６～７０ｈ仍处于２细胞和３～４细胞卵裂阶段的早期胚胎，其体外发育能力明显降低，囊胚发育率只有１．３％和８．２％；而滞留胚胎率则分别高达９０．９％和５９．４％。结果表明，牛体外受精早期胚胎卵裂发育的快慢，直接影响到其后体外发育的能力。     

诱导荷斯坦犊牛卵泡发育及体外受精研究

从日龄、培养条件和供体个体差异3个方面对4~9周龄犊牛JIVET(juvenile in vitro embryo transfer)技术的影响进行了初步研究。试验结果如下:不同日龄的10头母犊激素诱导后,30~40 d母犊平均获卵数为(31.8±9.75)枚,46~63 d的母犊平均获卵数为(21.8±11.67)枚,二者差异不显著(P>0.05);犊牛胚胎在3气(5%CO2,5%O2,90%N2)条件下和与颗粒细胞共培养条件(5%CO2,95%空气)下卵裂率分别为48.5%和54.1%,二者差异不显著(P>0.05),但是桑葚胚率差异显著(0%,15.2%,P<0.05);供体间个体差异很大,70%(7/10)的个体对激素诱导反应良好。     

白细胞介素和干扰素γ对绵羊体外受精胚胎体外发育影响的研究

利用SOFM+0.8%BSA+1mM谷氨酰胺作为绵羊胚胎的培养液,分别添加LIF、IL-1β、IL-2、IL-6及IFN-γ,以研究LIF、IL-1β、IL-2、IL-6及IFN-γ对绵羊早期胚胎发育的影响。结果说明,LIF促进2～8细胞胚胎发育至桑椹胚,同时也能够促进桑椹胚向扩大囊胚和孵化囊胚发育。但IL-1β、IL-2、IL-6及IFN-γ对绵羊早期胚胎的发育无显著影响。     

貉卵母细胞成熟发育的细胞学研究

【目的】探究貉卵母细胞成熟发育特征,为貉卵母细胞的体外成熟培养及优质成熟卵母细胞的挑选提供依据,以提高貉的体外受精效率。【方法】采集1～3岁(性成熟)繁殖期母貉的新鲜卵巢,制备光、电镜样品,观察貉卵母细胞成熟发育过程中细胞器变化;利用X射线微分析技术探索卵母细胞质膜化学元素变化与成熟发育的关系。【结果】根据颗粒细胞层数、卵泡直径、卵母细胞大小以及透明带的变化,将貉卵母细胞成熟发育划分为8个时期。貉卵母细胞在早期发育阶段(第Ⅰ～Ⅳ期)由颗粒细胞包围,逐渐出现透明带、卵泡腔,生发泡内的染色质越来越致密;随着卵母细胞的成熟发育(第Ⅴ～Ⅶ期),微绒毛、皮质颗粒出现;高尔基复合体、线粒体等细胞器数量明显增加,且逐渐迁移至皮质区,同时线粒体、脂滴形态发生变化。卵母细胞成熟时(第Ⅷ期),高尔基复合体及粗面内质网消失,皮质颗粒在质膜下排列;排卵后,核仁发生致密化。随着卵泡腔的增大,卵母细胞质膜表面的钠、氯和硫含量呈下降趋势,第Ⅴ期卵母细胞质膜中钠、氯和硫含量显著高于第Ⅶ期(P<0.05),钙含量显著低于第Ⅵ期和第Ⅶ期卵母细胞(P<0.05);钾含量呈现低-高-低的变化规律,第Ⅵ期卵母细胞质...     

白细胞介素和干扰素γ对绵羊体外受精胚胎体外发育影响的研究

利用SOFM 0．8％BSA 1mM谷氨酰胺作为绵羊胚胎的培养液，分别添加LIF、IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ，以研究LIF、IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ对绵羊早期胚胎发育的影响。结果说明，LIF促进2—8细胞胚胎发育至桑椹胚，同时也能够促进桑椹胚向扩大囊胚和孵化囊胚发育。但IL—1β、IL—2、IL—6及IFN—γ对绵羊早期胚胎的发育无显著影响。     

树鼩卵母细胞的体外成熟培养及体外受精

利用树鼩卵母细胞的成熟培养、体外受精等方法,生产树鼩的试管婴儿,期望通过此路径来实现生产转基因树鼩动物模型。使用促性腺激素进行树鼩超数排卵、TCM199完全培基对卵母细胞进行体外成熟培养、卵母细胞与体外获能的附睾精子进行体外受精、受精卵发育至桑椹胚、囊胚的实验。结果表明,卵母细胞成熟率A级76.7%、B级55.01%、C级17.39%。受精率52%,受精卵采用体细胞共培养与非共培养的分裂率分别为37.14%和9.6%。桑椹胚/囊胚发育率分别为13.57%和0,(P<0.05)。树鼩卵母细胞的成熟培养、体外受精实验方法可行,受精卵在体外能发育到囊胚阶段。     

体外受精所获得公牛的繁殖性能

最近日本4名繁殖学专家对移植体外受精卵获得的5头公犊的繁殖性能进行了详细研究,这在世界尚属首例。研究结果表明,经体外受精获得的胚胎,不论是鲜胚还是冻胚,移植后产下的公犊出生重略大,发育正常。14月龄后开始采精,其精液性状(采精量、pH值、精