猪肉产品中四环素类药物残留风险评估

本文于2013年1-12月在江西省两个区域各选择了一个农贸市场进行长期的取样监测,通过分析猪肉产品中各类四环素类药物(土霉素、四环素、金霉素、强力霉素)的残留水平,评估江西省猪肉产品中四环素类药物的残留风险。结果表明,江西省猪肉产品中未检出四环素和金霉素的残留,土霉素和强力霉素的检出率分别为2.26%和21.89%,这表明强力霉素是江西省猪产品中残留主要的四环素类药物;猪肉阳性样品中土霉素和强力霉素残留范围分别为2.10μg/kg~11.20μg/kg和0.90μg/kg~42.50μg/kg,均值分别为6.77μg/kg和11.21μg/kg,均未超过国家规定的最高残留限量(100μg/kg);江西省猪肉产品中四环素类药物残留的食品安全指数均值为3.74×10-3,最小值为0.30×10-3,最大值为14.17×10-3,远远低于1,表明江西省猪肉产品中四环素类药物的残留对人体的潜在危害水平是可以接受的,不会对人群产生不良作用。     

生鲜乳中四环素类药物残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法研究

建立生鲜乳中四环素类药物(四环素、土霉素、金霉素、多西环素)残留的超高效液相色谱-串联质谱(ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)的分析方法。样品用0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲液进行提取,用HLB固相萃取柱进行净化,以0.1%甲酸和乙腈为流动相进行梯度洗脱,ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×50 mm, 1.8μm)反相色谱柱进行分离,流速为0.4 m L/min,用UPLC-MS/MS进行分析,外标法定量。4种四环素类药物在1.0～500 ng/mL浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数R20.999,检出限为0.5μg/kg,定量限为1.0μg/kg,4种四环素类药物的平均加标回收率分别是四环素74.1%～106.8%,土霉素84.8%～99.0%,金霉素74.8%～105.5%,多西环素78.0%～104.0%, RSD≤3.3%(n=6)。该方法灵敏度高,重复性好,选择性强,适用于生鲜乳中四环素类药物残留的定量检测。     

江苏省畜禽养殖场水环境中四环类抗生素污染研究

2009年在江苏省范围内采集27个规模化养殖场排水口和周围环境水体样品53个,用高效液相色谱-三重四极杆质谱对其中的土霉素（OTC）、金霉素（CTC）、四环素（TC）和强力霉素（DOX）等四环素类抗生素污染进行了检测。结果显示,土霉素、金霉素、四环素和强力霉素在水体样品中的检出率分别为60.4%、60.4%、34.0%和17.0%,污染量分别在0.07～72.91、0.10～10.34、0.08～3.67μg·L-1和0.11～39.54μg·L-1之间,检出率以土霉素和四环素最高;猪养殖场中土霉素、四环素和强力霉素的污染量比牛和鸡场的要高,牛场中金霉素和强力霉素的污染量明显低于鸡场;从区域上看,苏南地区受到的污染明显高于苏北。     

南京典型设施菜地有机肥和土壤中四环素类抗生素的污染特征调查

在南京市范围内采集谷里村、锁石村和东庐村3个地区的典型设施菜地有机肥及土壤样品,并利用超声波提取,固相萃取-高效液相色谱-串联质谱分析的方法测定了其中的四环素、土霉素、金霉素和强力霉素等4环素类抗生素。结果表明,采集的有机肥和土壤样品中四环素类抗生素均被检测出,其浓度以土霉素为最高,四环素和强力霉素其次,金霉素浓度较低。在调查的3个地区中,谷里村的有机肥中四环素类抗生素浓度最高,锁石村其次,东庐村则相对较低,各地区抗生素总量范围分别在126~8 071、266~3 326和339~373μg/kg,平均浓度分别为2 152、1 188和356μg/kg;不同种类的有机肥中抗生素的浓度差异很大,其中人畜粪便的抗生素总量为371~7 820μg/kg;而对3个地区土壤中四环素类抗生素浓度的分析结果表明,谷里村仍为最高,总量范围为18.4~483μg/kg。由此可见,施用含有四环素类抗生素的有机肥已对土壤环境造成一定的威胁,有机肥农用的潜在问题应当引起关注。     

土壤及畜禽粪肥中四环素类抗生素固相萃取-高效液相色谱法的优化与初步应用

本研究优化了土壤和有机肥中3 种四环素类抗生素的提取和测定方法。方法经优化后,土壤和有机肥中的抗生素的提取效率达到52%~95%,且分析时间大大缩短。本研究还利用优化方法在天津进行了有机肥和菜地中3 种抗生素残留的初步调查。集约化养殖场的猪、鸡粪便中四环素类抗生素残留状况为: 金霉素（CTC）检出率达到78%,最高残留值达到563.8 mg/kg（干基）; 四环素（TC）和土霉素（OTC）检出率也高达56%,最高值分别达到34.8 mg/kg 和 22.7 mg/kg。在天津销售的几种商品有机肥中同样检测出四环素类抗生素的残留,残留水平与猪粪和鸡粪相当。菜田土壤样品中TCs的总检出率为64%,3.种抗生素中土霉素检出率最低为18%,最高值达到105.6 g/kg（风干基）; 四环素检出率为36%,最高值达到196.7 g/kg; 金霉素检出率为32%,最高值达到477.8 g/kg。在所调查土壤中,温室和大棚土壤TCs的残留水平高于露地土壤。占调查样品 27.3% 的菜田土壤中TCs总量超过欧盟规定的生态安全触发线（100 g/kg）,存在一定的潜在生态风险。     

串联两种免疫亲和柱同时检测粮食中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮

建立了一种通过串联两种免疫亲和柱的方式同时检测粮食中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的方法。样品经乙腈∶水(90∶10)提取后,通过串联的两种免疫亲和柱净化,以高效液相色谱荧光检测器检测。结果表明,赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮线性范围分别为1~30μg/mL和10~300μg/mL,相关系数R2分别为0.999 02和0.995 72,不同基质样品的回收率分别为75.25%~98.37%和83.41%~117.09%,精密度分别为1.28%~8.16%和1.23%~9.45%,最低检出限分别为0.4μg/kg和3.9μg/kg。本方法具有操作简便、快捷和准确性高等特点,适用于粮食中赭曲霉毒素A和玉米赤霉烯酮的同时检测。     

苏丹红Ⅰ直接竞争ELISA检测试剂盒的研制

直接包被多克隆抗体建立了苏丹红ⅠELISA检测技术,研制苏丹红ⅠELISA检测试剂盒。结果表明,制备的多克隆抗体对苏丹红Ⅰ亲合力强、特异性高,试剂盒标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,线性范围为1.55～100μg/L,50%抑制率(IC50)为13.52μg/L,灵敏度(IC10)为1.95μg/L,平均批内与批间变异系数分别为7.6%与10.6%,与苏丹红Ⅱ、Ⅲ的交叉反应率分别为4.40%和1.70%,与苏丹红Ⅳ及其他违禁食品染色剂交叉反应率低于0.01%;干辣椒、辣椒粉、辣椒油与辣椒酱等4种样品的苏丹红平均添加回收率分别为88.1%、91.4%、78.2%和84.3%,最低检测限分别为1.82、1.71、2.19和2.12μg/kg;与HPLC检测方法具有较高的相符性,4种样品相关系数分别为0.95,0.94,0.86和0.87;该试剂盒在4℃下至少可保存180d,可用于辣椒及其制品中苏丹红Ⅰ的批量快速低成本筛查。     

土壤和堆肥中四环素类抗生素的检测方法优化及其在土壤中的降解研究

在对土霉素(OTC)、四环素(TC)和金霉素(CTC)3种四环素类抗生素的高效液相色谱(HPLC)检测分析方法以及在土壤和堆肥中的提取方法进行改进和优化的基础上,采用该方法进行了3种抗生素在土壤中的降解试验。结果表明,选用Agilent Eclipse XDB-C8(4.6×150 mm,5μm)色谱柱,以0.01 mol/L草酸/乙腈/甲醇(79/10.5/10.5,v/v/v)为流动相,紫外检测波长268 nm,流速1.0 mL/min,进样量5μL,采用外标法定量,可使3种四环素类抗生素在20 min内全部洗脱并达到基线分离;在0～10 mg/L范围内,抗生素浓度与峰面积呈显著的线性关系,相关系数(r)均0.999。土壤和堆肥样品中的OTC、TC和CTC可用1 mol/L NaCl/0.5 mol/L草酸/乙醇(25/25/50,v/v/v)混合溶液提取,其回收率在76.0%～92.5%之间。加入到土壤中的抗生素在25℃下避光培养49 d后,在壤土和红土中的降解率分别是67%～72%和36%～46%,对应的半衰期分别为26～30 d和46～75 d,说明抗生素在壤土中比红土中容易降解。此外,3种抗生素在壤土中的半衰期没有显著性差异,而在红土中CTC和TC的降解速率显著高于OTC。     

二氟沙星残留检测直接竞争ELISA方法的建立

应用分泌抗二氟沙星(DIF)单克隆抗体(DIFmAb)的杂交瘤细胞株建立直接竞争ELISA分析方法.特异性实验结果表明,与达氟沙星的交叉反应率为0.32%,与其它氟喹诺酮类药物和磺胺类药物无交叉反应,该方法对DIF的检测限可达到0.1μg/L,半数抑制浓度IC(50)为2.2 μg/L,线性范围0.1～128.0μg/L,平均批内和批间变异系数小于15%.对牛奶和鸡肉分别添加0.4、2.0、10.0和50.0μg/L DIF标准品.平均回收率分别为89.3%和83.9%.直接竞争ELISA准确度高、重复性好、特异性强,适用于DIF残留快速检测的推广应用.     

克伦特罗化学发光快速检测系统的验证研究

为了验证克伦特罗化学发光快速检测系统的检测效果,本文用化学发光微粒子免疫法和高效液相色谱法分别对市售猪肉、猪肝、猪尿3种样品中克伦特罗残留量进行检测,比对两种方法试验结果间的差异。结果表明,该快速检测系统对猪肉、猪肝、猪尿3种样品的最低检测限分别为0.25μg/kg、0.23μg/kg、0.17μg/kg;对3种样品做加标回收试验,其回收率在81.5%~102.5%之间,变异系数均小于10%;该系统与高效液相色谱法检测实际样品的检测结果一致。因此,该系统稳定、可靠,可满足食品中克伦特罗残留快速检测的需要。     

规模化养殖畜禽粪主要有害成分测定分析研究

随着我国规模化养殖业的快速发展,畜禽粪中重金属、兽药残留、盐分及有害菌等有害污染物的增加,构成影响农田土壤健康功能的限制因素,甚至带来生态环境风险。对我国7个省、市、自治区的典型规模化养殖畜禽粪的主要化学组成进行了测定。结果表明,规模化养殖畜禽粪中富含有机质、氮、磷、钾及钙、镁、铁、钠、锰、钴等矿质元素;砷、铜、锌、铬等重金属及盐分含量较高,55个猪粪、鸡粪样中,Cu、Zn、Cr、As含量变幅分别为10.7～1591mg/kg、71.3～8710.mg/kg、0～688.mg/kg、0.01～65.4.mg/kg。同时多有四环素类抗生素残留,32个猪粪样中,土霉素、四环素、金霉素平均含量分别为9.09.mg/kg、5.22.mg/kg、3.57.mg/kg;23个鸡粪样中,土霉素、四环素、金霉素平均含量分别为5.97.mg/kg2、.63.mg/kg1、.39.mg/kg。因此,规模化养殖畜禽粪对农田施用后存在潜在危害性,规模化养殖畜禽粪必须进行无害化处理,才能资源化利用。     

光催化降解沼液中四环素类抗生素效果及反应动力学研究

该文采用光催化降解途径探究沼液中四环素类抗生素降解的最佳光源、pH值以及光催化对不同初始质量浓度抗生素的降解效果,同时进行不同初始浓度、pH值条件下抗生素光催化降解动力学研究。结果表明:不同光源对四环素类抗生素的降解效果为:高压汞灯紫外消毒灯长弧氙灯无光。高压汞灯催化2 h后,四环素、土霉素、金霉素的降解率分别达到91.68%、85.58%、81.18%。四环素类抗生素的初始质量浓度越低,光催化效果越好。四环素、土霉素、金霉素初始质量浓度为5 mg/L时,其降解率最高可达94.80%、88.35%和95.39%,沼液初始pH值对四环素、金霉素的降解率影响存在显著性差异(P0.05)。当pH值为6时,四环素的降解率最大为96.16%,反应速率常数为1.5971h-1,半衰期为0.355 3 h;当pH值为10时,金霉素的降解率最大为90.47%,反应速率常数为1.084 4 h-1,半衰期为0.338 3 h。沼液初始pH值对土霉素的降解率影响无显著差异(P0.05)。当pH值为10时,3种抗生素的平均降解率最大为89.88%。采用高压汞灯在沼液初始pH值为10时,催化降解5 mg/L四环素类抗生素效果最佳。     

不同来源畜禽粪的养分和污染物组成

畜禽粪中养分和有害物质的状况直接影响其利用价值。本文从浙江省采集了155个代表性畜禽粪样(包括93个猪粪样,31个鸡粪样,18个鸭粪样和13个牛粪样),采用化学分析和光谱分析方法鉴定了其营养物质、重金属元素和抗生素残留含量。结果表明,畜禽粪中Cd、Cr、Hg、Ni和Pb等重金属含量较低,但Cu和Zn含量普遍较高。Cu、Zn和As含量分别在18.56~1 788.04 mg·kg-1、12.46~10 056.68 mg·kg-1和0.69~76.43mg·kg-1之间,平均值分别为525.38 mg·kg-1、897.14 mg·kg-1和10.01 mg·kg-1。与我国农用污泥污染物控制的国家标准(GB4284—84)相比,Cu、Zn和As的超标率分别为53.55%、43.87%和0.65%。畜禽粪中四环素、土霉素和金霉素等抗生素的残留含量分别为0~16.75 mg·kg-1、0~29.60 mg·kg-1和0~11.63 mg·kg-1,平均残留含量:土霉素(5.10 mg·kg-1)>金霉素(2.17 mg·kg-1)>四环素(2.01 mg·kg-1)。四环素、土霉素和金霉素的检出率分别为61.29%、72.90%和69.03%。N、P和K等营养元素含量分别在9.80~43.60 g·kg-1、7.98~54.30 g·kg-1和8.76~35.20 g·kg-1之间,平均值分别为23.63 g·kg-1、24.81 g·kg-1和20.72 g·kg-1;P/N在0.40~2.98之间,平均为1.08。规模化养殖场畜禽粪中P、K、Cu、Zn、As和抗生素残留量明显高于农户家庭小规模养殖的畜禽粪。规模化养殖场中,猪粪重金属和抗生素含量高于其他畜禽粪。规模化养殖场畜禽粪中高含量Cu、Zn和抗生素的残留要求畜禽粪应限量施用,或在施用前进行适当前处理。     

高效液相色谱-串联质谱同时测定有机肥料中9种抗生素药物残留

采用高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS),同时测定有机肥料中3类9种抗生素(土霉素、四环素、金霉素、强力霉素、青霉素G和普鲁卡因青霉素、磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺噻唑)残留,对于有机肥料中抗生素残留的快速检测具有重要的意义。样品用Na2EDTA-Mc Ilvaine缓冲液超声振荡提取后,采用固相萃取小柱净化,高效液相色谱-串联质谱法检测,标准曲线外标法定量。采用多反应监测模式检测,除负离子扫描青霉素G外其他均用正离子扫描。方法在0.1、0.5、1.0 mg/kg添加水平下,样品平均回收率为63.1%~93.4%;相对标准偏差为1.7%~9.5%;四环素类药物的方法检出限均可达到0.05 mg/kg,磺胺类和青霉素类药物的检出限可达0.02 mg/kg。本方法简便、快速,重现性良好,可用于有机肥料样品中抗生素残留的快速确证检测。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中四环素类药物及其异构体

建立了应用超高效液相色谱-串联质谱法测定饲料中四环素类药物及其异构体的方法。样品经Na2EDTA-Mcllvaine缓冲液提取,PRIME HLB固相萃取小柱净化,超高效液相色谱-串联质谱仪测定,ESI正离子扫描,以多反应监测方式采集数据,外标法定量。四环素类药物及其异构体在饲料基质溶液中,在2.5~100μg/kg范围内具有良好的线性关系(r0.99);在3个不同浓度加标水平下,各药物的平均回收率为67.3%~102.6%,相对标准偏差为2.7%~8.1%,方法的检测限为5.0μg/kg,定量限为10.0μg/kg。经实际饲料样品检测分析,本研究中建立的方法适用于饲料中四环素类药物及其异构体的检测。     

检测鸡蛋中氟喹诺酮类药物的HPLC-FLD方法研究

建立了鸡蛋中氟喹诺酮类药物(环丙沙星、恩诺沙星、达氟沙星、沙拉沙星)残留的检测方法。样品由乙腈-0.5%偏磷酸溶液(5:5)提取, SPE小柱净化,采用Acclaim 120 C18色谱柱分离,流动相为0.05 mol/L磷酸/三乙胺溶液(p H=2.4)-乙腈(82+18, V/V),荧光检测器检测,其中激发波长280 nm,发射波长450 nm。结果表明,环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星在5～500μg/kg,达氟沙星在1～100μg/kg的线性范围内,相关系数均大于0.999 9。达氟沙星的定量限为2μg/kg,环丙沙星、恩诺沙星、沙拉沙星的定量限为10μg/kg。4种药物平均添加回收率为85.77%～89.46%;批内变异系数为1.58%～4.85%,批间变异系数为2.64%～4.03%。本方法适用于鸡蛋中氟喹诺酮类药物残留的检测要求。     

QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法测定饲料中的腾毒素

研究建立了饲料中腾毒素的QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分析方法。样品经水浸润后,以0.1%甲酸乙腈提取目标物, C18和PSA进行净化, Waters BEH RP18色谱柱分离, 0.1%甲酸水和0.1%甲酸甲醇等度洗脱,多反应监测(MRM)正离子模式扫描,基质匹配外标法定量。结果表明,腾毒素在浓度为1～500μg/kg范围内线性关系良好,相关系数为0.997 6～0.999 2;在饲料中添加浓度为5、 25、 125μg/kg等3个水平下,回收率为89.1%～105.7%,批内变异系数2.6%～10.3%,批间变异系数0.9%～7.4%,定量限(以信噪比≥10计)为2.0μg/kg。该方法准确、灵敏,前处理简单,可作为饲料中腾毒素快速分析和确证的检测方法。     

固相萃取-高效液相色谱法测定有机肥中四环素类抗生素药物残留

建立了固相萃取-高效液相色谱(SPE-HPLC)法测定有机肥中土霉素(OTC)、四环素(TC)和金霉素(CTC)3种四环素类抗生素残留的方法。肥料样品采用甲醇、EDTA和McIlvaine缓冲液的混合液(pH=7.2)为提取液,用强阴离子交换柱(SAX)-亲水亲脂萃取柱(HLB)串联进行纯化和富集。采用甲醇-乙腈-0.01mol/L草酸溶液为流动相,进行HPLC分析。3种抗生素的线性范围为0.10～20 mg/L,OTC、TC和CTC的检测限分别为0.03、0.03和0.05 mg/L。不同添加水平的样品加标回收率为64%～86%,RSD在4.14%～8.16%之间。该方法测定了上海市场上40种肥料,发现部分样品有四环素类抗生素的残留物。     

玉米赤霉烯酮的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

采用时间分辨荧光技术建立高灵敏的玉米赤霉烯酮（ZEN）间接竞争免疫分析法（ZEN-TRFIA）。以玉米赤霉烯酮人工抗原（ZEN-BSA）包被96孔板为固相抗原，与ZEN标准或样品中的ZEN共同竞争有限的抗ZEN的单抗；用稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠抗体进行示踪。该方法的灵敏度为0.01 μg/L（10ppt），测量范围为0.01-20 μg/L，批内和批间变异分别为7.2%和14.6%，平均回收率为94.4%，与玉米赤霉醇（ZER）的交叉反应率为15.16%。7条不同时间进行的ZEN-TRFIA的效应点值ED20、ED50、ED80分别为0.156±0.035 μg/L、0.634±0.091 μg/L和2.595±0.274 μg/L。试剂盒4℃保质期超过6个月。研究表明，ZEN-TRFIA是目前报导的ZEN检测中较灵敏的方法，该分析方法稳定性好，货架期符合要求，可测范围宽，具有很好的应用前景。     

水果中毒死蜱农药残留生物条形码免疫分析方法研究

为了更加灵敏地检测水果中毒死蜱农药残留,研究建立基于实时荧光定量PCR (qPCR)的高灵敏生物条形码免疫分析方法。研究将毒死蜱半抗原与鸡卵清白蛋白(OVA)结合,再将此偶联物连接到磁性纳米颗粒上,另将毒死蜱特异性抗体、生物条形码以及经巯基修饰的与生物条形码互补DNA链连接到胶体金纳米颗粒上,随后待检毒死蜱分子会与固定在磁性纳米颗粒上的半抗原竞争性结合胶体金纳米颗粒上的抗体,最后将生物条形码解离下来,通过qPCR检测, DNA相对量与待检农药的含量成负相关。研究结果表明,该方法的最低检测限是0.27μg/L, IC_(50)为19.3μg/L,线性范围是1～1 000μg/L。在苹果和梨两种基质中平均添加回收率为79%～90%,相对标准偏差(RSD)为11%～16%。因此,该方法的建立对于实际样品的检测具有重要意义。