苏芸金杆菌杀虫毒蛋白基因的分离和鉴定研究简报

<正> 苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称B.t)是一类能产生伴孢晶体的,革兰氏阳性的土壤细菌。这些伴孢晶体由具有高度专一杀虫活性的蛋白质组成。不同的B.t菌株具有不同的杀虫范围,大多数B.t菌株具有毒杀某些鱼翅目幼虫的活性,少数菌株能毒杀某些双翅目和鞘翅目幼虫。自Schnepf(1981年)首次报导从B.t中,成功地克隆到杀虫毒蛋白基因以来,广泛筛选具有新的杀虫谱的B.t菌株和克隆各类新的杀虫毒蛋白基因的工作受到高度的重视,并取得了丰硕的成果。本文采用醋酸钠法从川北地区不同生境的土壤中分离到四十株B.t菌株,并用鸟枪法(shot gun)从其中一株B.t菌株(91—3)中,克隆了杀虫蛋白基因。     

苏芸金杆菌的高浓度发酵研究

研究了苏芸金杆菌的菌种特性及在高浓度下的液体发酵的性质，当蔗糖浓度为９％，温度为３０℃，ＰＨ７．０时，苏芸金杆菌的生长依然良好，且每ｍｌ发酵液中菌体数量达到４００亿个，为进一步地扩大发酵规模提供了可靠的依据。     

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的研究进展

伴胞晶体是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)在芽孢形成过程中产生的一种蛋白晶体。作为生物杀虫农药之一,伴胞晶体/Bt由于具有高效、广谱、环保及生物安全等优势,在农林业中得到广泛应用。介绍了伴胞晶体的最新分类、命名情况,综述了其结构、杀虫机理及应用方面的研究进展,并对Bt生物农药的发展前景进行了展望。     

重组苏芸金杆菌杀虫晶胞蛋白的高效表达

重组质粒pSC66d(Cry IAb601)转化大肠杆菌DH5a后,接种TCB培养基,经SDS-PAGE电泳和电镜分析,晶胞蛋白基因在大肠杆菌细胞中得到高效表达,表达产物分子量约130KD,在细菌细胞中形成卵圆形包涵体.比较了重组菌株在不同培养基中的生长及晶胞蛋白的表达水平,结果说明重组菌株在LB及2×YT培养基中的生长及表达均较低,在TCB培养基中细菌生长良好,晶胞蛋白高效表达,表达量可达细菌总蛋白的63.4%,较出发菌株GH9601增加17.8倍.测定了纯化的晶胞蛋白对4种鳞翅目昆虫的杀虫活性.     

苏云金芽孢杆菌伴孢晶体的形成及降解

【研究目的】研究苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)伴孢晶体的形成及降解,为其生物学特性的系统研究和活性成分分析提供理论基础。【方法】将Bt菌株HD-1在牛肉膏蛋白胨固体培养基上30℃下培养24h,制成菌悬液后用日本电子JEM100-CX-II透射电子显微镜观察伴孢晶体的形成。采用五种溶解方法降解Bt菌株HD-1和LSZ9408伴孢晶体后,进行SDS-PAGE电泳。【结果】此研究的电镜观察表明BtHD-1在分裂过程中形成芽孢和晶体,晶体为大菱形。BtLSZ9408晶体含有130和65kDa的毒蛋白,HD-1晶体含有130、65和25kDa的毒蛋白。【结论】BtLSZ9408和HD-1伴孢晶体都包含CryI和CryII蛋白质毒素。     

苏芸金杆菌感染落叶松毛虫的组织病理

为了探讨苏芸金杆菌对鳞翅目昆虫的作用机理，笔者通过光学镜和电镜对苏芸金杆菌感染落叶松毛虫后的组织病理和细胞病理进行了研究，结果为感染初期松毛虫幼虫中肠柱状铁微绒毛受到破坏，继而中肠细胞开始出现空洞，感染４２ｈ后中肠上皮细胞完全从基低膜上脱藩。     

植物Bt抗虫基因工程研究进展

本文概述了苏云金芽孢杆菌的分类,杀虫蛋白的特性,杀虫蛋白与基因型之间的关系,Bt杀虫蛋白基因在植物抗虫基因工程中的应用;讨论了它在植物Bt抗虫基因工程研究中存在的问题及其解决的途径,并提出了今后可能发展的方向。     

苏芸金杆茵的酯酶型

用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳分析了苏芸金杆菌(Bacillus thuringiensis)21个血清型30个变种的酯酶。根据酯酶带的数量,特征和Ef值,将21个血清型30个变种,区分为24个酯酶型。并按照发表各亚种文献的时间先后,依次排列了酯酶型l到酯酶型24的序号。酯酶型能把近90%的H~-血清型变种和生化变种相区别,无鞭毛菌株也具有酯酶图型。它具有鉴定方便、迅速,重现性好等优点,又能反映细菌种间分子遗传的差异。建议将酯酶型作为苏芸金杆菌分类的一个鉴定指标。     

协同凝集反应定量检测苏云金杆菌晶体蛋白

用苏云金杆菌菌株ＨＤ－１和７２１６的伴胞晶体蛋白碱解产物作抗原,制备相应抗血清,并用协同凝集反应测定ＨＤ－１和７２１６的晶体蛋白的含量,其最低检测量分别为７８ｎｇ／ｍｌ和１３０ｎｇ／ｍｌ。用生物测定方法测定ＨＤ－１和７２１６经碱溶的晶体蛋白对小菜蛾幼虫的ＬＣ５０值分别为０．４５２μｇ／ｍｌ和０．７６３μｇ／ｍｌ。两种方法测定的结果有一定的相关性。用协同凝集反应测定苏云金杆菌晶体蛋白含量比火箭免疫电     

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1E的改造

利用ＰＣＲ片段延伸连接技术将ｃｒｙ１Ｅ的原启动子准确地更换与ｃｒｙ３Ａ启动子,重组ｃｒｙ１Ｅ经载体ＰＨＴ３１５克隆至枯草芽胞杆菌无芽胞突变株ＩＳ８和苏云金杆菌以色列亚种无晶体突变株４Ｑ７,获得重组菌３Ａ１ＥＢｓ和３Ａ１ＥＢｔ。聚丙烯酰胺凝胶电泳和生物测定表明,克隆改造后的ｃｒｙ１Ｅ可表达,表达的Ｃｒｙ１Ｅ对海灰翅夜蛾有毒。     

苏云金杆菌CT—43菌株质粒与ICPs及苏云金素产生的关系研究

对可毒杀家蝇幼虫的苏云杆菌中华亚种ＣＴ－４３菌株进行了质粒消除处理，从中分离出１５株突变株，其中７个突变株缺失了１４０ｋＤ ＩＣＰ（杀虫晶体蛋白Ｉｂｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ ｃｒｙｓｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ），８个菌株缺失了１３０和６８ｄＤ ＩＣＰ，缺失１４０ｋＤ ＩＣＰ的菌株同时失去了苏云金素的产生能力。对这些菌株进行质粒检测的结果表明，１３０ｋＤ和６８ｋＤ ＩＣＰ的产生与一个大质粒Ｌ－１有关，而对家     

苏云金芽孢杆菌HD -1δ- 内毒素蛋白的纯化及其单克隆抗体细胞株的建立

从苏云金芽孢杆菌HD-1伴胞晶体中分离得到的毒素蛋白经过Sepharose 6B和DEAE Sephadex DE-52得到了纯化,纯化后的蛋白在SDS-PAGE上呈现一条带,其分子量约为68000。用纯化蛋白作为抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术建立了抗HD -1δ- 内毒素蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。经过半年的体外培养,大多数细胞株仍能持续分泌高滴度的单克隆抗体。文中还讨论了抗体的特异性及理化特性。此单克隆抗体细胞株的建立将为植物基因工程产物的检测提供有力工具。     

苏芸金杆菌杀虫剂对落叶松毛虫卵期寄生蜂的影响

苏芸金杆菌是一类优良的微生物杀虫剂，对鳞翅目害虫有很强的致病力，但苏芸金杆菌菌体本身和制剂中的许多助剂对害虫的天敌是否有不良影响，目前研究甚少。文章就几种我国生产的苏芸金杆菌杀虫剂对落叶松毛虫卵期寄生蜂的影响进行了研究。结果证明苏芸金杆菌菌体本身对落叶松毛虫赤眼蜂、落叶松毛虫黑卵蜂、落叶松毛虫卵宽缘金小蜂和跳小蜂均无明显影响，只是由于Ｈ４ａ４ｂ－１和Ｈ５ａ５ｃ制剂中作为防腐剂的二甲苯对一些卵寄生蜂     

从土壤中分离的410株苏云金芽孢杆菌的鉴定

对从中国２０个省（区）采集的１５４２个土壤样品中分离的４１０株苏云金芽孢杆菌进行了血清学鉴定。结果表明，２１８株（５３．２％）属于已知３０个标准Ｈ－血清中的１５个Ｈ－血清型，即Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４、Ｈ５、Ｈ６、Ｈ７、Ｈ８、Ｈ１３、Ｈ１４、Ｈ１５、Ｈ１６、Ｈ１７、Ｈ２２和Ｈ２６。其余的１９２株中，除１７５株为无鞭毛或自凝菌株无法进行血清学鉴定外，１６株（３．９％）的Ｈ－抗原不与已知２７个标准Ｈ－抗