用改进的方法提纯禽脑脊髓炎病毒

将AEV VR株种毒经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚复壮,然后取复壮的病毒作为种毒经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚扩大培养病毒,继续孵化至18日龄,收取病变明显的鸡胚脑组织、胰腺和小肠,充分研磨后经差速离心和CsC l密度梯度离心提纯AEV,取经密度梯度离心后的样品进行电镜观察其纯度,并经脑内接种1日龄SPF雏鸡观察其致病情况及其病理变化,结果证明获得了纯化的AEV。     

AE油佐剂灭活疫苗对鸡胚和仔鸡的保护力试验研究

用三批AE（Avian Encephalomyelitis）油佐剂灭活疫苗免疫开产前种鸡，免疫后定期采集种蛋进行孵化，当孵至6日龄时取部分鸡胚，卵黄囊途径接种AEV VR株，进行鸡胚AE易感性试验，余鸡胚孵化出雏，分别为1、7、14、21日龄雏鸡采用肌肉途径攻击AEV VR株，攻毒后观察不同日龄仔代雏鸡AE的保护能力。结果疫苗免疫后2－3个月的种鸡所产种蛋的鸡胚AE易感性试验的保护率达100％，而同期所产种蛋孵出的仔代雏鸡，在出雏后3周内对AEV工VR株攻毒的保护率亦达100％，免疫后6－7个月种鸡所产种蛋的鸡胚AEV VR易感性试验的保护率达75％－805，而同期所产种蛋孵出的仔代雏鸡，在出雏后3周内对AEV VR株攻毒的保护率达70－90％。试验结果表明，鸡胚AE易感笥试验的鸡胚保护率与同批种蛋孵出雏鸡对AEV VR肌肉途径攻毒的保护率基本相同。     

AE油佐剂灭活疫苗对鸡胚和仔鸡的保护力试验

三批禽脑脊髓炎(AE)油佐剂灭活疫苗免疫开产前种鸡,种鸡免疫2~3个月后所产种蛋对禽脑脊髓炎病毒(AEV)鸡胚易感性试验的受保护率达100%,而同期所产种蛋孵出的仔代雏鸡,在出雏后3周内对AEV VR株攻毒的受保护率亦达100%; 种鸡免疫6~7个月后所产种蛋对AEV VR鸡胚易感性试验的受保护率达75%~80%,而同期所产种蛋孵出的仔代雏鸡,在出雏后3周内对AEVVR株攻毒的受保护率达70%~90%。试验结果表明,AE灭活疫苗AEV鸡胚易感性试验的鸡胚保护率与同期雏鸡对AEV VR肌肉途径攻毒的保护率基本相同。     

AE油佐剂灭活度苗对鸡胚和仔鸡的保护力试验

三批禽脑脊髓炎(AE)油佐剂灭活疫苗免疫开产前种鸡，种鸡免疫2～3个月后所产种蛋对禽脑脊髓炎病毒(AEV)鸡胚易感性试验的受保护率达100％，而同期所产种蛋孵出的仔代雏鸡，在出雏后3周内对AEVVR株攻毒的受保护率亦达100％；种鸡免疫6～7个月后所产种蛋对AEVVR鸡胚易感性试验的受保护率达75％～80％，而同期所产种蛋孵出的仔代雏鸡，在出雏后3周内对AEVVR株攻毒的受保护率达70％～90％。试验结果表明，AE灭活疫苗对AEV鸡胚易感性试验的鸡胚保护率与同期雏鸡对AEVVR肌肉途径攻毒的保护率基本相同。     

AE油佐剂灭活疫苗对鸡胚和仔鸡保护力的试验

用三批AE（Avian Encephalomyebius)油佐剂灭活疫苗免疫开产前种鸡，免疫后定期采集种蛋进行孵化，当孵至6日龄时取部分鸡胚，卵黄囊途径接种AEVVR株，进行AE鸡胚易感性试验，剩余鸡胚孵化至出雏后，分别于1，7，14，21日龄肌肉途径攻击AEV VR株，攻毒后观察不同日龄仔代雏鸡AE的保护能力。结果疫苗免疫后2-3个月的种鸡所产种蛋的AE鸡胚易感性试验的保护率达100%，而同期所产种蛋孵出的子代雏鸡，在出雏后3周内对AEVVR株攻毒的保护率亦达100%，免疫后6-7个月种鸡所产种蛋的AEVVR鸡胚易感性试验的保护率达75%-80%，而同期所产种蛋孵 出的子代雏鸡，在出雏后3周内对AEVVR株攻毒的保护率达70%-90%，试验结果表明，AE鸡胚易感性试验的鸡胚保护率与同期雏鸡对AEV VR肌肉途径攻毒的保护率基本相同。     

鹅副粘病毒强毒YNG-1株的分离及人工感染试验

采用鸡胚接种法从云南省某鹅场发生烈性传染病的鹅群中分离到一株病毒，经HA，HI试验，鸡胚接种试验，血清中和鸡胚接种试验，确定所分离病毒为副粘病毒，鸡胚半数致死量（ELD50）为10^-8.57/0.1ml。参照国际上规定的新城疫病毒毒力制定标准及其方法，测定该分离株的鸡胚是小致死量致死鸡胚的平均时间（MDT）54h,1日龄雏鸡脑内接种致病指灵敏（ICPI）为1.71,6周龄鸡静脉内接种致病指数（IVPI）为2.36。表明该分离株具有与新城疫病毒速发型相类似的毒力，为强毒株，命名为YNG-1株。人工感染试验结果表明该分离株对6日龄鹅及16日龄鸡致死率均为100%，对6日龄肉鸭无致病性。     

利用鸡胚成纤维细胞培养禽脑脊髓炎病毒的研究

利用鸡胚成纤维细胞 (CEF)培养禽脑脊髓炎病毒 (AEV) ,经过六次盲传发现 :AEV在 CEF上无细胞病变 (CPE) ,但利用 CEF细胞上清接种 SPF鸡胚 ,可产生不同程度的 AE鸡胚病变。分别取不同时间的感染细胞上清 ,测定 AEV浓度 ,结合培养条件 ,进而确定 AEV培养的最佳时机。结果表明 :以 AEV在 CEF上培养 7天最好 ,病毒滴度可达 10 2 .8EID50 / 0 .2 ml。将经 CEF培养的 AEV差速离心 (浓缩约 5 0 0倍 ) ,接种 SPF鸡胚 ,可产生典型的鸡胚病变 ,其滴度为 8× 10 5.0 EID50 / 0 .2 m l。通过 Cs Cl密度梯度离心提纯病毒 ,在电镜下观察到了大小基本一致的病毒粒子 ,病毒直径约为 2 5 nm。利用 AEV感染的 CEF或通过“细胞飞片”制备荧光片 ,建立了间接免疫荧光快速检验 CEF是否感染 AEV的方法。     

抗禽脑脊髓炎病毒单克隆抗体的研究——禽脑脊髓炎病毒抗原的培养和纯化

为获得用于制备AEV单克隆抗体的抗原，将禽脑脊髓炎病毒（AEV VR）接种于鸡胚成纤维细胞（CEF）盲传，通过间接免疫荧光试验（IFA）监测AEV增殖情况，以第六代CEF培养物作为种毒扩大培养，将其培养物经差速率心后的半提纯物接种6日龄SPF鸡胚、1日龄SPF鸡，再将半提纯物经密度梯度离心后进行PAGE－SDS电泳，电镜观察。结果证实，AEV VR在CEF上增殖成功。     

AE油佐剂灭活疫苗对鸡胚和仔鸡的保护力试验

三批禽脑脊髓炎(AE)油佐剂灭活疫苗免疫开产前种鸡,种鸡免疫2～3个月后所产种蛋对禽脑脊髓炎病毒(AEV)鸡胚易感性试验的受保护率达100%,而同期所产种蛋孵出的仔代雏鸡,在出雏后3周内对AEVVR株攻毒的受保护率亦达100%;种鸡免疫6～7个月后所产种蛋对AEVVR鸡胚易感性试验的受保护率达75%～80%,而同期所产种蛋孵出的仔代雏鸡,在出雏后3周内对AEVVR株攻毒的受保护率达70%～90%。试验结果表明,AE灭活疫苗对AEV鸡胚易感性试验的鸡胚保护率与同期雏鸡对AEVVR肌肉途径攻毒的保护率基本相同。     

鸽新城疫病毒的分离鉴定

用SPF鸡胚从疑似鸽新城疫的信鸽饲养场分离到一株新城疫病毒。分离株利用电镜负染技术观察到典型的新城疫病毒粒子。生物学试验表明,该株病毒具有较强的毒力,最小致死量鸡胚平均致死时间（MDT）为68.4小时,1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）为1.375,6周龄雏鸡静脉接种致病指数（IVPI）为1.34,在鸡胚成纤维细胞上能引起细胞病变。动物回归试验证明,分离株能致2月龄鸽死亡。     

几种鸡IBD活疫苗毒株的生物学特性比较研究

为了筛选出安全性和免疫原性较好的理想免疫毒株,试验对6种传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)活疫苗中等毒力毒株(IBDV-CE、IBDV-M65、IBDV-V877、IBDV-NF8、IBDV-L、IBDV-B87)的生物学特性进行了比较。将传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)的6个毒种分离繁殖后,分别接种SPF鸡胚测定其对鸡胚的毒力和鸡胚半数致死量(ELD50),再分别接种雏鸡测定毒株的安全性、对鸡新城疫病毒的免疫抑制性和免疫原性。结果表明:接种IBDV-CE株、IBDV-M65株的雏鸡法氏囊出现萎缩,接种IBDV-NF8株的雏鸡法氏囊稍萎缩,接种IBDV-L株的雏鸡出现肾脏出血,接种IBDV-B87株和IBDV-V877株的雏鸡法氏囊及肌肉组织无异常变化;6种毒株对鸡新城疫的免疫效果无影响。     

鸽Ⅰ型副粘病毒的分离与鉴定

采用鸡胚接种的方法从病死鸽中分离到了一株病毒，其血凝效价（HA）平均为2^8，该病毒株能凝集鸡红细胞的作用可被新城产凤标准阳性血清所抑制，所分离的病毒株Ⅰ型副粘病毒，该病毒对1日龄雏鸡脑 内致死指数（ICPI）为0.39,肌肉注射1日龄雏鸡不发病，该毒株对雏鸡和鸡胚来说为弱毒力株。用30日龄的幼鸽做人工发病试验时可复制此病，并使其HI平均抗体滴度由第15d的2.9log2上升到第25d的7.25log2。     

用感染组织经鸡胚静脉接种检测大肝大脾病的病原体

用感染大肝大脾病鸡部分纯化的肝匀浆静脉接种肉用成年种母鸡和鸡胚，接种后肉种鸡出现ＢＬＳ感染的典型病理学和血清学反应，不同日龄鸡胚接种后所孵出的雏鸡，也产生持续性病毒血症，该法非常敏感并可用于组织样品中病毒的检测和滴定，对鸡胚接种的最佳条件进行了研究，结果证明对１１日龄鸡胚接种能获得病毒制的最佳结果，出壳鸡体内病毒的复制随日龄而增加，接种鸡胚所孵出的雏鸡８日龄时病毒血症的发生率增加。     

山东省新城疫病毒的分离、鉴定及其毒力测定

在山东多个疑似新城疫的鸡群中，分离到13株具有血凝性的病毒，与多种阳性血清进行血凝抑制交叉试验。确定11株分离株均为新城疫病毒。为评价ND分离株的致病特性，对此11株病毒的毒力进行了测定，具体包括1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)、6周龄雏鸡静脉内接种致病指数(IVPI)和最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间(MDT)，结果表明：这些分离株均为新城疫强毒株。     

嗜神经型新城疫病毒的分离与鉴定

从一群自然发病疑似新城疫的病鸡脑中分离出一株野毒株，经过鸡胚传代、ＨＡ测定、电镜观察以及回归试验等确认是新城疫病毒。该分离毒株毒力极强，以１００倍稀释后，接种ＳＰＦ鸡胚，２４－６０小时内鸡胚全部死亡，接种易感雏鸡后，潜伏期短、发病早，呈现典型的神经症状。     

嗜神经型新城疫病毒的分离与鉴定

从一群自然发病疑似新城疫的病鸡脑中分离出一株野毒株，经过鸡胚传代、ＨＡ测定、电镜观察以及回归试验等确认是新城疫病毒。该分离毒株毒力极强，以１００倍稀释后，接种ＳＰＦ鸡胚，２４－６０小时内鸡胚全部死亡，接种易感雏鸡后，潜伏期短、发病早，呈现典型的神经症状。     

鸡传染性支气管炎病毒的分离和鉴定

为掌握发病鸡场的致病原,将临床病料接种SPF鸡胚分离得到一株病毒,通过胚体病变特征、血凝试验、RT-PCR检测、动物回归试验等对该病毒进行了鉴定,结果显示:病料处理接种鸡胚后48~144 h内鸡胚全部死亡,剖检死亡鸡胚可见胚体存在蜷缩、发育矮小等特异性病痕,收获的鸡胚尿囊液无血凝性,RT-PCR检测为鸡传染性支气管炎病毒阳性,动物回归试验中接种的SPF雏鸡可复制出现鸡传染性支气管炎的典型症状。     

鸵鸟新城疫病毒野毒株的分离及其生物学特性

用鸡胚从疑似鸵鸟新城疫的送检病料中分离到 2株病毒。 2株病毒均能凝集鸡红细胞 ,且能被抗新城疫病毒 ( NDV)阳性血清抑制 ;用抗 NDV单抗 PEG夹心 ELISA测定 2株分离毒均为阳性。对其中 1株作进一步生物学特性鉴定 ,按照国际上规定的 NDV毒力判定标准测定的该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间 ( MDT)为 54h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数 ( ICPI)为 1 .88,6周龄雏鸡静脉接种致病指数 ( IVPI)为2 .75。结果表明 ,本分离株为鸵鸟新城疫病毒强毒     

鸡传染性支气管炎病毒M41株鸡胚增殖工艺研究

为研究鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41标准毒株在鸡胚上的最佳生产工艺,试验用IBV M41株分别以不同剂量接种同一胚龄不同鸡胚、不同胚龄普通鸡胚,以及IBV M41株接种普通鸡胚后不同培养时间收获鸡胚尿囊液,比较不同培养条件下制备病毒液的产量及病毒效价。结果显示:IBV M41株接种无传染性支气管炎病毒母源抗体的SPF鸡胚最佳病毒接种剂量为104.5EID50,接种含有IBV母源抗体的普通鸡胚最佳病毒接种剂量为105.1EID50,最佳接种胚龄为11日胚龄,最佳收毒时间为48 h。按照此工艺制备疫苗,免疫SPF鸡,IBV抗体效价均符合规程标准。研究结果为用鸡胚高效、大量生产IBV M41株病毒抗原进而生产合格的IB疫苗提供了数据支持。     

AE油佐剂灭活疫苗对鸡胚和仔鸡免疫保护力试验观察

用 3批AE (AvianEncephalomyelitis)油佐剂灭活疫苗免疫开产前种鸡 ,免疫后定期采集种蛋进行孵化。当孵至 6日龄时取部分鸡胚 ,卵黄囊途径接种AEVVR株 ,进行AE鸡胚易感性试验。剩余鸡胚孵化至出雏后 ,分别于 1 ,7,1 4 ,2 1日龄肌肉注射AEVVR株攻毒。攻毒后观察不同日龄子代雏鸡AE的保护能力。结果疫苗免疫后 2～ 3个月的种鸡所产种蛋胚对AEV保护率达 1 0 0 % ,而同期所产种蛋孵出的子代雏鸡 ,在出雏后 3周内对AEVVR株攻毒的保护率亦达 1 0 0 %。免疫后 6～ 7个月种鸡所产种蛋胚对AEVVR保护率达 75 %～ 80 % ,而同期所产种蛋孵出的子代雏鸡 ,在出雏后 3周内对AEVVR株攻毒的保护率达 70 %～ 90 %。试验结果表明 ,AE鸡胚易感性试验的鸡胚保护率与同期雏鸡对AEVVR肌肉注射攻毒的保护率基本相同