随机扩增多态DNA(RAPD)技术及其在农业上的应用(综述)

随机扩增多态DNA技术是近年发展起来的一种DNA多态性检测技术。它以一系列不同的随机排列碱基顺序的寡核苷酸单链(通常是十聚体)为引物,对所研究的基因组DNA进行单引物扩增。扩增DNA片段的多态性反映了基因组相应区域的DNA多态性。RAPD技术可以在对物种没有任何分子生物学研究的情况下,对其进行DNA多态性分析,同RFLP及DNA指纹图谱法等其他DNA多态性检测技术相比,RAPD具有检测效率高、样品用量少、灵敏度高和检测容易的优点。RAPD技术已广泛的应用于农作物和畜禽品种及品系的遗传纯度的测定、品种和品系的鉴定、品种和品系遗传关系的确定、基因的定位和分离以及构建基因图谱等方面的研究。     

澳洲鸵鸟的随机扩增多态DNA研究

采用随机扩增多态性DNA标记技术对澳洲鸵鸟20个个体进行了遗传变异分析,从60个随机引物中筛选出17个多态性丰富的引物,并对其所有个体的总基因组DNA进行了PCR扩增,结果17条引物共产生103种扩增片段,其中共有片段13条,多态片段90条,平均每条引物的扩增带数为6．06,各引物多态性片段范围在2—9,多态频率在40％-100％。表明澳洲鸵鸟的遗传多样性较丰富。     

小白菜品种的随机扩增多态DNA分析

用随机扩增多态DNA(RAPD)标记方法对目前生产上广泛采用的12个小白菜品种进行了分析,利用RAPDistance软件的4种方法计算距离矩阵,并利用邻接法进行聚类分析.结果表明:4种统计方法估算的12个小白菜品种间遗传距离均显示12个小白菜品种间的遗传相似度较高,品种2与品种3的遗传相似度最高,而品种10与其它品种间的遗传距离较大,相似度较低.不同的统计方法均显示12个小白菜品种基于RAPD数据可被分成3个独立的小组,其中A、B小组与地理种源密切相关,而C组跨地区范围较大.     

藏獒随机扩增多态DNA分析

采用随机扩增多态DNA技术,对不同品种的20只藏獒个体之间的亲缘关系进行了分析。从80条随机引物中筛选出了27条引物,共扩增出369条条带,其中339条表现出多态性,多态性位点百分率为91.87%。根据20只藏獒个体之间的遗传距离,用UPGMA法构建了聚类分析图。结果表明,河曲藏獒和青海藏獒同类群个体之间亲缘关系较近,在聚类图上形成了河曲藏獒类群和青海藏獒类群各自独立的分支,这一结果有力地支持了按地域对藏獒进行类群划分的说法。     

大鲵野生亲代与人工繁育子二代的随机扩增多态DNA分析(英文)

用15个能稳定扩增的随机引物对大鲵亲代与子二代各7个个体进行RAPD分析,结果表明,大鲵人工繁育子二代与野生亲代群体间具有较高的遗传相似度,其平均值为0.9515,这说明子二代群体在基因型上并没有发生明显的变异。遗传相似性和遗传多样性分析的结果表明,大鲵亲代与子二代的平均遗传距离分别为0.0497和0.0166,Shannon多样性指数分别为0.237和0.078,经t检验差异均极显著(P<0.01),这说明大鲵子二代遗传多样性水平低于亲代,因此必须加强谱系建立与繁育管理。     

绒山羊随机扩增多态DNA研究

利用RAPD技术对西藏绒山羊、内蒙绒山羊、辽宁绒山羊的遗传变异进行了分析比较 ,用 37个随机引物和 5 5个两两组合的随机引物组合进行筛选 ,筛选出了 5个多态性较为丰富的随机引物 (组合 )。用其对 3个品种 ,每个品种 2 8个个体进行扩增。由RAPD指纹图计算出西藏绒山羊同内蒙绒山羊的遗传距离为 0 0 876 ,西藏绒山羊同辽宁绒山羊的遗传距离为 0 16 0 1,内蒙绒山羊同辽宁绒山羊的遗传距离为 0 0 80 3,西藏绒山羊、内蒙绒山羊、辽宁绒山羊的遗传变异分别为 0 32 6 6 ,0 2 6 2 2 ,0 2 4 75。     

大鲵野生亲代与人工繁育子二代的随机扩增多态DNA分析

用15个能稳定扩增的随机引物对大鲵亲代与子二代各7个个体进行RAPD分析,结果表明,大鲵人工繁育子二代与野生亲代群体间具有较高的遗传相似度,其平均值为0.9515,这说明子二代群体在基因型上并没有发生明显的变异。遗传相似性和遗传多样性分析的结果表明,大鲵亲代与子二代的平均遗传距离分别为0.0497和0.0166,Shannon多样性指数分别为0.237和0.078,经t检验差异均极显著(P<0.01),这说明大鲵子二代遗传多样性水平低于亲代,因此必须加强谱系建立与繁育管理。     

叉尾斗鱼遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD标记技术对叉尾斗鱼Macropodus opercularis 5个地理群体（南宁群体、桂林群体、龙岩群体、福州群体和广州群体）的遗传多样性进行了检测。结果表明：从40个随机引物中筛选出11个有效引物,对每条叉尾斗鱼的基因组DNA进行扩增,共扩增出139条片段;各群体的多态位点比例为26.44%～40.95%,Nei基因多样性指数为0.1042～0.1457,Shannon指数为0.1543～0.2176;而总体的多态位点比例、Nei基因多样性指数和Shannon指数分别高达84.89%、0.3110和0.4606。研究表明,叉尾斗鱼的遗传变异主要来自群体间,而群体内部的遗传多样性水平较低。     

叉尾斗鱼遗传多样性的RAPD分析

采用RAPD标记技术对叉尾斗鱼Macropodus opercularis 5个地理群体(南宁群体、桂林群体、龙岩群体、福州群体和广州群体)的遗传多样性进行了检测。结果表明:从40个随机引物中筛选出11个有效引物,对每条叉尾斗鱼的基因组DNA进行扩增,共扩增出139条片段;各群体的多态位点比例为26.44%～40.95%,Nei基因多样性指数为0.1042～0.1457,Shannon指数为0.1543～0.2176;而总体的多态位点比例、Nei基因多样性指数和Shannon指数分别高达84.89%、0.3110和0.4606。研究表明,叉尾斗鱼的遗传变异主要来自群体间,而群体内部的遗传多样性水平较低。     

汉江上游鲫鱼RAPD遗传多样性研究

采用RAPD技术从26个随机引物中筛选出8个引物对汉江上游汉中段野生鲫鱼群体的遗传多样性进行研究,结果共检测出512个位点,其中多态位点347个,其多态位点比例(P)为67.77%;利用POPGEN软件获得汉江上游汉中段野生鲫鱼群体11个个体间的遗传距离,个体间遗传距离(D)在0.008 6~0.535 0,个体间遗传相似系数(S)在0.585 6~0.991 5,Shannon遗传多样性指数(H0)为0.652 5。试验表明,汉江上游汉中段野生鲫鱼群体仍保持着较丰富的遗传多样性,应加以保护。     

用RAPD及mtDNA D-loop区序列揭示长江下游长春鳊遗传多样性

应用RAPD和mtDNA D-loop区序列对长江下游长春鳊群体的遗传多样性进行分析.从40个随机引物中筛选出扩增条带清晰的28个引物,对24尾采自长江下游常熟江段长春鳊的基因组DNA进行扩增,共检测到178个位点,扩增片段大小在0.2～2 kb之间,其中多态位点有83个,占46.63%;个体间最大的遗传距离为0.132 6,最小的遗传距离为0.047 6,平均遗传距离为0.088 5;群体的Shannon多样性指值为0.098 6.RAPD结果表明该长春鳊群体的遗传多样性处于中等水平.对其中8尾长春鳊mtDNA D-loop区序列(938 bp)进行了分析,发现了8种单倍型,检测出17个多态性核苷酸变异位点,多态位点比例为1.81%,变异位点为15个转换,2个颠换;单倍型多态性(h)为1.000,核苷酸多态性(pi)为0.006 2,平均核苷酸差异数(K)为5.821,单倍型间平均遗传距离为0.006 3.结果说明长春鳊mtDNA D-loop区在个体间的遗传差异较小.     

用RAPD及mtDNA D-loop区序列揭示长江下游长春鳊遗传多样性

应用RAPD和mtDNA D-loop区序列对长江下游长春鳊群体的遗传多样性进行分析.从40个随机引物中筛选出扩增条带清晰的28个引物,对24尾采自长江下游常熟江段长春鳊的基因组DNA进行扩增,共检测到178个位点,扩增片段大小在0.2～2 kb之间,其中多态位点有83个,占46.63%;个体间最大的遗传距离为0.132 6,最小的遗传距离为0.047 6,平均遗传距离为0.088 5;群体的Shannon多样性指值为0.098 6.RAPD结果表明该长春鳊群体的遗传多样性处于中等水平.对其中8尾长春鳊mtDNA D-loop区序列(938 bp)进行了分析,发现了8种单倍型,检测出17个多态性核苷酸变异位点,多态位点比例为1.81%,变异位点为15个转换,2个颠换;单倍型多态性(h)为1.000,核苷酸多态性(pi)为0.006 2,平均核苷酸差异数(K)为5.821,单倍型间平均遗传距离为0.006 3.结果说明长春鳊mtDNA D-loop区在个体间的遗传差异较小.     

芥菜遗传多样性的RAPD分析

随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）是一种新的分子标记技术,利用ＲＡＰＤ标记对芥菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｃｏｓｓａ）１６个变种的遗传多样性进行了分析,从６０个１０ｂｐ随机引５物中筛选出２７个有效的,这２７个有效引物共扩增出３３６条ＤＮＡ带,其中２７５条为多态性带,占总数的８１．８５％,平均每个引物扩增出的ＤＮＡ带数为１２．４４,不同引物扩增出各自不同的ＤＮＡ指纹图谱,大部分图谱均有特征或特     

长江口日本鳗鲡群体遗传多样性RAPD初步分析

对2005年采集自长江口地区4个采样点、5批、共10尾性成熟前成鳗、82尾玻璃鳗的日本鳗鲡样本的遗传多样性进行了RAPD分析。在51条随机引物中筛选出具有稳定扩增、条带清晰的多态性引物16条，16条引物共检测到132个位点，其中多态位点114个（86．36％）。五个采样群体各自的平均杂合度（Hc）在0．2053～0．3150之间，平均基因多样性指数（Ho）在0．2974～0.4526之间；采样群体两两间的遗传分化指数几，在0．0508～0．1524之间。群体内遗传变异和群体间遗传变异对群体总遗传变异的贡献率分别为79．18％和20．82％；Nei的遗传距离在0．0593～0．1425之间；在玻璃鳗采样群体间未发现遗传差异同采样地点及月份有何显著关系，显示它们可能同属一个大混合群体。而遗传距离、遗传分化指数及NJ树分析结果一致表明：成鳗和玻璃鳗之间可能存在相当的遗传距离和遗传分化。     

长江口日本鳗鲡群体遗传多样性RAPD初步分析

对2005年采集自长江口地区4个采样点、5批、共10尾性成熟前成鳗、82尾玻璃鳗的日本鳗鲡样本的遗传多样性进行了RAPD分析。在51条随机引物中筛选出具有稳定扩增、条带清晰的多态性引物16条,16条引物共检测到132个位点,其中多态位点114个（86．36％）。五个采样群体各自的平均杂合度（Hc）在0．2053～0．3150之间,平均基因多样性指数（Ho）在0．2974～0.4526之间;采样群体两两间的遗传分化指数几,在0．0508～0．1524之间。群体内遗传变异和群体间遗传变异对群体总遗传变异的贡献率分别为79．18％和20．82％;Nei的遗传距离在0．0593～0．1425之间;在玻璃鳗采样群体间未发现遗传差异同采样地点及月份有何显著关系,显示它们可能同属一个大混合群体。而遗传距离、遗传分化指数及NJ树分析结果一致表明：成鳗和玻璃鳗之间可能存在相当的遗传距离和遗传分化。     

基于线粒体COII基因序列的长江下游翘嘴群体遗传多样性分析

【目的】明确长江下游翘嘴鲌（Culter alburnus）群体遗传多样性的丰富程度和进化历史,为其育种及遗传改良打下基础。【方法】在长江下游水域（淀山湖、高邮湖、太湖、长荡湖及长江江苏段）设点捕获收集翘嘴鲌野生样本,基于线粒体COII基因序列分析5个翘嘴鲌野生群体的遗传多样性,使用DNASPv5计算群体单倍型并进行Tajima’s D和Fu’s Fs中性检验,运用Arlequin 3.5进行遗传多样性分析、群体分子方差分析（AMOVA）及计算遗传距离和基因流（Nm）。【结果】 5个翘嘴鲌野生群体197个个体的COII基因序列有效长度为425 bp,存在31个变异位点,变异率为7.29%;其碱基含量排序为T （29.61%） >C （28.03%） >A （24.19%） >G （18.17%）,AT含量为53.8%,CG含量为46.2%。31个变异位点在197个个体中共定义出13种单倍型（hap1~hap13）,单倍型多样性指数（H_d）为0.273~0.603,以长江群体和长荡湖群体的最高,太湖群体的最低;核苷酸多样性指数（P_i） 为0.001~0.017,以长荡湖群体的最高,淀山湖群体的最低。5个翘嘴鲌野生群体间的遗传距离为0.002~0.015,即群体间无显著差异;不同群体间的Nm为2.443~54.325,以太湖群体与淀山湖群体间的Nm最大（54.325）,长荡湖群体与淀山湖群体间的Nm最小（2.443）; AMOVA分析结果显示,不同群体间的遗传变异为10.47%,而群体内的遗传变异为89.53%。在5个翘嘴鲌野生群体中,仅长江群体的Tajima’s D和Fu’Fs均为负值且具有显著意义,故推测该群体曾发生过群体扩张现象。【结论】长江下游翘嘴鲌群体表现出低单倍型多样性和高核苷酸多样性,遗传多样性较丰富,群体间存在遗传分化但分化程度差异不显著。因此,后续研究应增加野生翘嘴鲌群体的样品数量和调查水域,全面而系统地评估长江下游各水域翘嘴鲌的种质资源状况,为建立自然保护区及人工增殖放流提供科学依据。     

铜鱼、圆口铜鱼和长鳍吻鮈外周血细胞显微观察

[目的]为鱼类血液学研究积累资料,同时为进一步驯养提供借鉴。[方法]对29尾铜鱼、27尾圆口铜鱼和17尾长鳍吻的尾静脉取血,常规方法每尾制作血涂片2-5张,Gimesa和Wright染液联合染色,Nikon—DXM1200数码显微摄影系统观察和拍照,ImageProplus软件随机测量各类血细胞。[结果]观察到红细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞5种血细胞;红细胞有直接分裂现象;成红细胞有2种类型,单核细胞呈不规则球形,淋巴细胞有“大”、“小”2型。[结论]共有5种血细胞,无嗜碱和嗜酸性粒细胞;“大”、“小”2型淋巴细胞并无定量区别;各种血细胞单核细胞最少,血栓细胞最多。     

铜鱼肌肉营养组成与评价

对采自长江宜昌江段铜鱼肌肉的营养组成进行了分析与评价,以期为其人工养殖的开展和综合利用提供基础数据。结果表明：铜鱼含肉率为68．13％;肌肉中水分含量为69．58％;肌肉干物质中粗蛋白、粗脂肪、灰分、钙、磷的含量分别为72．98％、17．10％、5．14％、0．64％、1．14％;氨基酸含量为62．27g／100g干物质;必需氨基酸与总氨基酸的比值为42．90％,必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为75．12％,鲜味氨基酸与总氨基酸的比值为44．05％;必需氨基酸指数为71．32。     

铜鱼肌肉营养组成与评价

对采自长江宜昌江段铜鱼肌肉的营养组成进行了分析与评价，以期为其人工养殖的开展和综合利用提供基础数据。结果表明：铜鱼含肉率为68．13％；肌肉中水分含量为69．58％；肌肉干物质中粗蛋白、粗脂肪、灰分、钙、磷的含量分别为72．98％、17．10％、5．14％、0．64％、1．14％；氨基酸含量为62．27g／100g干物质；必需氨基酸与总氨基酸的比值为42．90％，必需氨基酸与非必需氨基酸的比值为75．12％，鲜味氨基酸与总氨基酸的比值为44．05％；必需氨基酸指数为71．32。     

德州驴RAPD遗传多态性分析

采用RAPD技术探讨了德州驴的遗传多态性。从20条随机引物中筛选出8条引物对德州驴56个个体的基因组DNA进行随机扩增。结果表明,8条随机引物共扩增产生了784条谱带,其中多态性条带为165条,多态比率在11.1%～37.5%之间;与其他驴的遗传多样性研究结果相比,德州驴的遗传多样性处于中等水平。