实时荧光定量PCR技术及其在植物中的应用

阐述了实时荧光定量PCR技术的基本原理及方法,综述了近几年实时荧光定量PCR技术在转基因植物、植物病害及与植物表皮气孔变化相关激酶检测过程中的运用情况;展望了实时荧光定量PCR反应在植物核酸定性、定量检测及分析其在植物中的应用前景。     

实时荧光定量PCR技术研究进展及其应用

实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速高效,高通量,而且高敏感性等特点,该技术在分子诊断、分子生物学研究、动植物检疫以及食品安全检测等方面有广泛的应用。文章对实时荧光定量PCR的原理、影响因素以及在植物病害和遗传育种方面的应用等进行了综述。     

PCR相关技术方法在植物病害检测中的应用(综述)

PCR和建立在PCR基础上的分子生物学技术以其灵敏、快速、简便等优点在植物病害检测中得到了广泛应用。本文综述PCR相关技术(RT—PCR、IC-PCR、PCR—SSCP、实时荧光PCR、RAPD和RFLP)的原理及其在植物病害检测中的应用现状，同时概述我国已检测的植物病害病原体的种类。     

实时荧光定量PCR技术在番茄研究中的应用

随着实时荧光定量PCR技术的不断完善和发展,该技术越来越受到人们的青睐。它以快速、灵敏、高特异性和安全性高等优点广泛应用于科学研究等各个领域。近年来,实时荧光定量PCR技术在番茄的各研究领域不断深入,大大提高了番茄的病害检测能力、特异基因的表达水平和转基因的检测效率。     

实时荧光定量PCR技术在植物检疫中应用的研究进展

实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析,具有操作简便、快速高效、高通量、高敏感性等特点。近年来,实时荧光定量PCR技术在植物检疫研究上不断深入,大大提高了植物疫情的检测效率和监测防治水平。综合论述了实时荧光定量PCR技术在由真菌、细菌、病毒和线虫引发的植物疫情的检测与应用。     

梅州地区柑橘黄龙病的常规PCR与实时荧光定量PCR检测技术研究与应用

本文利用TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测技术对梅州地区疑似柑橘黄龙病样品进行检测,并与常规PCR检测进行对比。结果表明,实时荧光定量PCR用于检测柑橘黄龙病菌结果快速、准确、可靠且无污染。采用2种方法对梯度稀释的阳性样本进行检测发现,实时荧光定量PCR的灵敏度较常规PCR更高,能够检出样品中痕量的病原菌。本研究在梅州地区建立了以实时荧光定量PCR方法进行柑橘黄龙病疑似植株的检测,可以为梅州地区提供更准确、更灵敏、快速的黄龙病检测技术。     

实时荧光定量PCR技术在植物中的应用

实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累来实现实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析.该技术实现了PCR从定性到定量的飞跃.介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、分类及优缺点,综述了近年来实时荧光定量PCR技术在植物中的应用及其研究进展,旨在为该技术的进一步开发应用提供理论参考.     

荧光定量PCR技术在土传病害生物防治中的应用研究

荧光定量PCR技术是进行生防菌和病原菌动态变化监测的有效手段,文章从定量PCR技术原理及其在植物病害生物防治中的应用两个方面进行了阐述.     

实时荧光定量PCR技术的实验研究

实时荧光定量PCR技术是在普通PCR定性技术基础上发展起来的核酸定量技术,已广泛应用于不同研究领域。论述了荧光定量PCR技术的基本原理、主要类型和定量实验方法,探讨了实验条件的控制、影响因素和优化实验结果的方法。     

实时荧光定量PCR技术在乳品微生物学中的应用研究进展

越来越多的基因组测序给特异性引物和探针的设计带来了极大的支持。最近有研究表明,基于定量聚合酶链式反应（qPCR）方法的技术成功应用于发酵过程中的微生物计数以及乳制品中益生菌数量的计算。基于qPCR方法的技术进步包括实时荧光定量PCR技术,不仅可以计数活菌数量,还可以在单一反应体系中检测多个微生物菌群数量,且能构建高通量PCR流程。实时荧光定量PCR技术在食品工业中的应用已证明其可靠性,尽管如此,该技术在乳品工业中的广泛使用还需要更多的技术支持和标准化方法。综述了实时荧光定量PCR技术及其在乳品微生物学中的最新研究与应用进展。     

喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立

为寻求喀斯特炭疽菌的快速检测方法,利用TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,以喀斯特炭疽菌基因组中的ACT基因为靶序列设计并筛选特异性引物探针,通过特异性、灵敏度、重复性试验建立喀斯特炭疽菌TaqMan探针实时荧光PCR检测方法。结果表明:建立方法的特异性较强、灵敏度较高、重复性稳定性较好,最低检测限为0.2pg DNA/反应,标准曲线的线性关系良好,相关系数为0.998。该方法操作简便,可用于进出境口岸喀斯特炭疽菌的检疫。     

烟草糖基转移酶基因SM-Ngt1在拟南芥中抗菌核病的初步研究

通过对转糖基转移酶基因SM-Ngt1的拟南芥T2代阳性植株接种油菜菌核病菌,鉴定其对菌核病的抗性,并应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)确定植株中SM-Ngt1的表达水平。结果表明,拟南芥中SM-Ngt1基因对菌核病具有一定的抗性,且抗性的高低与体内SM-Ngt1的表达量具有明显的一致性。     

嗜水气单胞菌的检测方法比较

[目的]比较实时荧光定量PCR法、PCR法及细菌培养法检测嗜水气单胞菌的灵敏度与特异性。[方法]在常规PCR法的基础上设计并建立了实时荧光定量PCR法,并采用该法与常规PCR及传统细菌培养法3种方法同时对嗜水气单胞菌进行检测与比较。[结果]实时荧光定量PCR检测的灵敏度可达12.5 cfu/ml,达到了只需13个细菌就可得到阳性结果的灵敏度,具有很高的特异性,且检测速度快,从细菌核酸提取至完成检测仅需3 h左右,比传统细菌培养法和常规PCR法所需时间大大缩短。实时荧光定量PCR检测由于在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染。[结论]实时荧光定量PCR检测是3种方法中最为快速敏感的方法,是一种比较实用的嗜水气单胞菌的检测方法。     

荧光定量PCR技术优化及在草莓上的应用

[目的]为优化荧光定量PCR技术体系并在草莓研究中应用.[方法]以二倍体草莓(Fragaria vesca‘Ruegen’)为试材,草莓当中两个β-肌动蛋白基因家族成员Actin1和Actin2为内参基因,对比分析10 μL和20 μL反应体系条件下荧光定量PCR扩增反应.[结果]内参基因引物组合Actin1的扩增效率等指标优于Actin2;10μL反应体系中的扩增效率等指标优于20 μL反应体系;内参基因Actin1在10 μL反应体系下是草莓最优的荧光定量PCR技术体系.[结论]优化了草莓荧光定量PCR体系并应用该技术体系检测了草莓CrRLK1Ls家族成员的时空表达情况.     

低表达甘蓝花药发育相关基因小体积荧光定量反应体系的建立和可靠性分析

植物发育过程中很多重要基因拷贝数较低。为建立稳定可靠、适于低拷贝微量模板表达分析的实时qRT-PCR小体积反应体系,采用在甘蓝花药中表达量较少的AT-HOOK基因进行小反应体积荧光定量表达分析,研究小反应体积的扩增效率和可行性,并通过对其在甘蓝不同植物器官、不同花药组织和花药发育不同时期的表达特征的重复性和可靠性分析,最终建立了稳定可靠而且成本较低的10μL荧光定量分析体系,为进一步大规模深入研究甘蓝花药发育相关基因表达特征及发育调控基因功能分析奠定基础,同时也为其他低拷贝表达基因的研究提供参考。     

实时定量PCR技术及其应用

实时定量PCR技术在基因表达分析、病原物检测、基因突变分析、转基因安全性检测等方面得到了广泛应用。就实时定量技术的应用原理、相关重要概念、检测仪器、结果的分析方法、应用现状等进行了综述分析,以期为更多研究者掌握该技术的应用提供参考。     

海岛棉抗枯萎病相关基因实时荧光定量PCR分析

【目的】以不同抗性海岛棉为材料,利用实时荧光定量PCR技术对11个棉花抗枯萎病相关基因进行表达量分析,为海岛棉抗枯萎病育种及抗病机理提供候选基因资源。【方法】选择海岛棉抗枯萎病材料06－146、易感材料新海14号,及以其为父母本杂交的RIL系高代材料10893（超抗）、10895（高抗）、10897（感病）、10796（易感）为实验材料,进行接菌处理。分别取接菌0、4、10、18、28和40 h后的幼苗下胚轴,提取mRNA并反转录。根据已知陆地棉抗枯萎病相关的EST序列和海岛棉抗病转录组测序筛选到的抗病相关基因序列设计引物,进行实时荧光定量 PCR反应。根据各基因在不同材料中的表达值,分析各基因与海岛棉抗枯萎病间的关系。【结果】CFW3、CFW10、comp62810、comp71372四个基因在海岛棉抗枯萎病过程中可能起着比较重要的作用,尤其是利用抗病材料和感病材料转录组测序后得到的与抗病性有关的comp62810、comp71372基因。【结论】不同棉花品种对病菌侵染的灵敏程度,不同的品种的灵敏度不同,用以判断基因的作用。     

Establishment of Real-Time TaqMan-Fluorescence Quantitative RT-PCR Assay for Detection and Quantification of Porcine Lipoprotein Lipase mRNA

Porcine lipoprotein lipase （LPL） cDNA was cloned as the standard for real-time quantifying LPL mRNA and the TaqMan-fluorescence quantitative PCR assay for detection was established. The total RNA extracted from Longissimus dorsi of porcine was reverse-transcribed to cDNA. LPL cDNA was ligated with pGM-T vector and transformed into Escherichia coli TOP10. Plasmid DNA extracted from positive clones was verified by PCR amplification and sequenced. LPL was amplified by real-time fluorescence quantitative PCR from the plasmid DNA. The concentration of DNA template purified was detected by analyzing absorbance in 260 nm and then the combined plasmid was diluted to series as standard for fluorescence quantitative PCR （FQ-PCR）. The method of LPL mRNA real-time PCR was well established, which detected as low as 103 with the linear range 10^3 to 10^10 copies. The standard curves showed high correlations （R2 = 0.9871）. A series of standards for real-time PCR analysis have been constructed successfially, and real-time TaqMan-fluorescence quantitative RT-PCR is reliable to quantitatively evaluate FQ-PCR mRNA in L. dorsi of porcine.