共查询到20条相似文献,搜索用时 172 毫秒
1.
甘薯块根富含的次生物质严重干扰了总RNA的提取。本试验采用异硫氰酸胍"一步法"和CTAB法提取甘薯块根总RNA,并对改进前后两种方法提取的总RNA产量和纯度进行了比较。结果表明,提取RNA过程中用氯仿代替液氮研磨样品同样可获得完整性和纯度较好的总RNA;CTAB法提取RNA质量较好,纯度较高,排除了甘薯块根中多糖、多酚以及纤维等次生物质的干扰,提取出高质量的甘薯总RNA。 相似文献
2.
甘薯块根总RNA提取与psy基因保守序列的克隆 总被引:3,自引:1,他引:3
甘薯块根富含的次生物质严重干扰了总RNA的提取.本试验采用 4种方法对甘薯块根总RNA进行提取,筛选出 1种最佳的改进方法,排除了甘薯块根中淀粉、多糖、多酚以及纤维等次生物质的干扰,提取到了高质量的甘薯块根总RNA.所提取的RNA得率较高,完整性好,纯度高,以其逆转录的cDNA为模板,克隆出了甘薯psy基因 422bp的保守序列. 相似文献
3.
4.
枯草芽孢杆菌分泌多种胞外酶,采用普通试剂盒提取方法难获得完整、有效的RNA.在RNA试剂盒提取法的基础上,通过增加DEPC水洗涤菌体、溶菌酶裂解细胞、液氮冷冻预处理及调整RNA提取试剂添加比例等处理,可得到完整性良好的RNA.电泳检测结果表明,所获RNA条带清晰完整,无降解现象;提取的RNA可满足RT-PCR要求. 相似文献
5.
6.
为进一步研究甘薯病原微生物的侵染对甘薯病程相关非表达子1基因(NPR1)表达的影响,以甘薯肌动蛋白(β-ac-tin)基因为内参照基因,提取甘薯叶片总RNA,反转录为cDNA,同批异管对该2个基因进行PCR扩增.通过对循环数的优化和对体系重复性、准确性的分析,建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系. 相似文献
7.
8.
枯草芽孢杆菌分泌多种胞外酶,采用普通试剂盒提取方法难获得完整、有效的RNA。在RNA试剂盒提取法的基础上,通过增加DEPC水洗涤菌体、溶菌酶裂解细胞、液氮冷冻预处理及调整RNA提取试剂添加比例等处理,可得到完整性良好的RNA。电泳检测结果表明,所获RNA条带清晰完整,无降解现象;提取的RNA可满足RT-PCR要求。 相似文献
9.
一种快速提取甘薯基因组DNA方案的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
建立了一种小量快速提取甘薯基因组DNA的方法。用该法以甘薯幼叶为实验材料,用小量快速法提取甘薯基因组DNA。提取的DNA经酶切、琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明DNA质量较好,所提取的DNA可用于RAPD、AFLP等技术。此方法具有提取速度快、利于规模化提取、DNA质量好和经济实用等优点,为甘薯及其它相关植物基因组DNA的提取提供了一种快速、简便的途径。 相似文献
10.
Trizol法提取厚皮甜瓜果实RNA条件的筛选 总被引:3,自引:1,他引:2
采用改良的Trizol法提取厚皮甜瓜‘银帝’果实中的RNA.利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和RT-PCR法进行纯度、浓度和RNA完整性检测.结果表明:1 mL Trizol用于提取200 mg甜瓜果实量时,得到的RNA产量最大,氯仿抽提2次时提取到的RNA的A260/A280在1.9~2.0之间,所提取的RNA无蛋白质和DNA污染,室温沉淀和低温沉淀对RNA的产量无明显影响.将提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段,扩增的条带与设计大小一致,验证了该方法提取的RNA可用于RT-PCR. 相似文献
11.
12.
[目的]为更好地利用基因操作手段改良木薯品质和提取高质量的木薯总RNA提供科学依据。[方法]采用4种方法提取木薯块根RNA,筛选一种最简单、有效的方法,并利用RT-PCR技术克隆木薯淀粉分支酶,分析所提取RNA的质量。[结果]结果表明,用改进的CTAB法和plant RNAReagent kit均能提取高质量的RNA,用plant RNAReagent更能节省时间,而且纯度比较高。对plant RNAReagent提取的RNA进行RT-PCR克隆,克隆出了与木薯淀粉合成有关的SBEII基因。[结论]plant RNAReagent kit提取的RNA,其质量可以满足基本的试验要求。 相似文献
13.
不同方法提取狗脊蕨叶片总RNA的比较分析 总被引:2,自引:0,他引:2
[目的]为构建狗脊蕨叶cDNA文库,保存珍贵基因资源,克隆和研究与有效成分合成相关的基因等提供技术参考。[方法]以狗脊蕨叶片为材料,采用CTAB法、一步法、酚-SDS法和RNA试剂盒提取分离法提取总RNA,通过比较分析确定最优方法。[结果]这4种方法都能提取出182、8 S的RNA,但CTAB法和试剂盒提取分离法的总RNA质量较高,CTAB法还提取出清晰的5S RNA。一步法和SDS法带型模糊,有降解现象。CTAB法提取的狗脊蕨叶片总RNA质量较好,28S1、8S和5S条带清晰,且无明显降解。CTAB提取法OD260/OD280的值在1.93~2.06,试验中其OD260/OD280值为2.012,接近2.0,纯度较高。一步法和SDS法OD260/OD280>2.0,试剂盒法OD260/OD280<2.0。[结论]CTAB法适合提取的狗脊蕨叶片总RNA,质量较好,可用于cDNA合成、文库构建等后续分子生物学试验。 相似文献
14.
胡杨、柽柳总RNA提取方法的建立 总被引:39,自引:7,他引:39
以胡杨和柽柳的叶片为材料,建立了一种从植物组织中快速分离总RNA的方法。该方法具有三个显著的特点:RNA提取周期短,应用改进的LiCl沉淀RNA方法,仅需l0min即可;方法简单易行,仅需要几种常用试剂,操作步骤简单;提取的RNA杂质少,得率高,并能在提取过程中较有效抑制RNA的褐化效应。RNA质量可以满足cDNA文库构建、DDRT—PCR等要求。 相似文献
15.
16.
17.
[目的]获得高质量、高产量并能满足转录组测序要求的大豆根总RNA。[方法]比较分析了Trizol法、CTAB-Li Cl法和试剂盒法的提取效果。[结果]3种方法均能从大豆根中提取出总RNA。但与Trizol法、CTAB法相比,试剂盒法提取的大豆根总RNA纯度高、完整性好,平均浓度达413.9 ng/μL,A260/A280≈2.14,A260/A230≈2.10,方法可重复性好。[结论]试剂盒法提取的RNA满足转录组测序的质量要求,可进行后续的转录组测序和其他分子生物学相关研究工作。 相似文献
18.
白菜总RNA的高效提取方法及常见问题分析 总被引:1,自引:1,他引:0
[目的]建立从白菜叶片组织中快速提取高质量RNA的方法,为进行LD—PCR、AnP、SRAP及其他分子生物学试验奠定基础。[方法]通过增加高速离心时间,用3%H2O2处理试验器皿等措施对Trizol试剂法进行优化,建立了一种简单、快捷、经济、高效的RNA提取方法。[结果]在1.5h左右可得到高质量的总RNA,经琼脂糖凝胶电泳、蛋白核酸分析仪检测,提取的总RNA具有清晰的28S、18S、5S3条带,且28S的宽度是18S的2倍左右,0D260/DD280比值为1.90—2.16。进一步以提取的总RNA为模板成功进行了单链cDNA的合成和LD—PCR。[结论]改良的Trizol试剂法所提取的RNA纯度和完整度极高,可用于LD—PCR、SRAP、基因克隆及表达分析等后续分子生物学试验。 相似文献
19.
番木瓜果肉RNA提取方法的比较 总被引:5,自引:0,他引:5
为了从成熟末期的番木瓜果肉中提取纯净完整的RNA,本试验采用了TRIzol试剂盒、改良TRIzol、SDS法、CTAB法等4种方法从番木瓜果实中提取总RNA。从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这几种方法进行比较和评价,结果表明,采用改良TRIzol所得RNA完整性较其他方法好,条带清晰无明显降解,28S和18S RNA的亮度比约为2∶1,D260/D280达1.9且得率较高,为380.5μg.g-1,经RT-PCR后得到一特异条带表明该RNA可用于后续分子生物学操作。 相似文献
20.
两种桃芽总RNA提取方法的比较研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以‘曙光油桃’芽为试材,采用改良CTAB法、Trizol法进行总RNA提取,并通过凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和Q-PCR检测所提取总RNA样品的质量。结果表明:改良CTAB法提取的RNA,经Q-PCR后扩增桃芽HK基因,可以得到与目的片段大小一致的条带,条带清晰,能满足基因表达分析等后续试验的要求;而Trizol法所提取的RNA,条带较弱,经Q-PCR后扩增桃树芽内HK基因,得不到与目的片段大小一致的条带,难以达到进一步试验的要求。 相似文献