两种快速提取甘薯块根总RNA的方法

甘薯块根富含的次生物质严重干扰了总RNA的提取。本试验采用异硫氰酸胍"一步法"和CTAB法提取甘薯块根总RNA,并对改进前后两种方法提取的总RNA产量和纯度进行了比较。结果表明,提取RNA过程中用氯仿代替液氮研磨样品同样可获得完整性和纯度较好的总RNA;CTAB法提取RNA质量较好,纯度较高,排除了甘薯块根中多糖、多酚以及纤维等次生物质的干扰,提取出高质量的甘薯总RNA。     

甘薯块根总RNA提取与psy基因保守序列的克隆

甘薯块根富含的次生物质严重干扰了总RNA的提取.本试验采用 4种方法对甘薯块根总RNA进行提取,筛选出 1种最佳的改进方法,排除了甘薯块根中淀粉、多糖、多酚以及纤维等次生物质的干扰,提取到了高质量的甘薯块根总RNA.所提取的RNA得率较高,完整性好,纯度高,以其逆转录的cDNA为模板,克隆出了甘薯psy基因 422bp的保守序列.     

利用改良的CTAB-LiCl法提取甘薯块根RNA

甘薯块根中含有大量的淀粉、酚类化合物、多糖、色素以及纤维等次生代谢物质,严重影响了块根总RNA的提取。本试验对CTAB法进行改良,采用PVPP和β-巯基乙醇去除酚类物质,氯仿/异戊醇去除蛋白质,LiCl过夜沉淀法去除DNA,得到的RNA纯度、完整性以及质量均好。结果表明改良的CTAB法适合甘薯块根RNA的提取。     

一种适于枯草芽孢杆菌总RNA提取的改良方法

枯草芽孢杆菌分泌多种胞外酶,采用普通试剂盒提取方法难获得完整、有效的RNA.在RNA试剂盒提取法的基础上,通过增加DEPC水洗涤菌体、溶菌酶裂解细胞、液氮冷冻预处理及调整RNA提取试剂添加比例等处理,可得到完整性良好的RNA.电泳检测结果表明,所获RNA条带清晰完整,无降解现象;提取的RNA可满足RT-PCR要求.     

一种适合于提取香蕉果实总RNA的简便方法

本文介绍香蕉果实RNA提取的一种简便方法,可从香蕉果肉和果皮中成功提取高质量的RNA,产量可达45~65μg.g-1.FW-1,有效降低RNA提取过程中多糖、酚类物质和其它次级代谢物等的污染,纯度较高;未发生明显降解,可用于cDNA合成。     

甘薯NPR1基因半定量RT-PCR检测方法的建立

为进一步研究甘薯病原微生物的侵染对甘薯病程相关非表达子1基因(NPR1)表达的影响,以甘薯肌动蛋白(β-ac-tin)基因为内参照基因,提取甘薯叶片总RNA,反转录为cDNA,同批异管对该2个基因进行PCR扩增.通过对循环数的优化和对体系重复性、准确性的分析,建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系.     

一种有效的提取月见草种胚RNA的方法

介绍了1种改进的提取月见草种胚RNA的CTAB-LiCl提取法,该法能有效地去除种胚中带有的大量多酚、多糖和脂质的干扰,所得RNA样品经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分析证明具有较高的纯度和完整性.方法简便、经济、有效,所提取的RNA质量较高,可直接用于cDNA合成、cDNA文库的构建以及RACE等分子生物学操作.     

一种适于枯草芽孢杆菌总RNA提取的改良方法

枯草芽孢杆菌分泌多种胞外酶,采用普通试剂盒提取方法难获得完整、有效的RNA。在RNA试剂盒提取法的基础上,通过增加DEPC水洗涤菌体、溶菌酶裂解细胞、液氮冷冻预处理及调整RNA提取试剂添加比例等处理,可得到完整性良好的RNA。电泳检测结果表明,所获RNA条带清晰完整,无降解现象;提取的RNA可满足RT-PCR要求。     

一种快速提取甘薯基因组DNA方案的建立

建立了一种小量快速提取甘薯基因组DNA的方法。用该法以甘薯幼叶为实验材料,用小量快速法提取甘薯基因组DNA。提取的DNA经酶切、琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明DNA质量较好,所提取的DNA可用于RAPD、AFLP等技术。此方法具有提取速度快、利于规模化提取、DNA质量好和经济实用等优点,为甘薯及其它相关植物基因组DNA的提取提供了一种快速、简便的途径。     

Trizol法提取厚皮甜瓜果实RNA条件的筛选

采用改良的Trizol法提取厚皮甜瓜‘银帝’果实中的RNA.利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和RT-PCR法进行纯度、浓度和RNA完整性检测.结果表明:1 mL Trizol用于提取200 mg甜瓜果实量时,得到的RNA产量最大,氯仿抽提2次时提取到的RNA的A260/A280在1.9~2.0之间,所提取的RNA无蛋白质和DNA污染,室温沉淀和低温沉淀对RNA的产量无明显影响.将提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段,扩增的条带与设计大小一致,验证了该方法提取的RNA可用于RT-PCR.     

木耳总RNA提取方法研究

为了获得木耳总RNA理想的提取方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以木耳菌丝为试验材料,采用了CTAB法、RNA prep pure Plant Kit试剂盒和 Trizol法3种方法提取木耳总RNA。结果表明3种方法均能从木耳菌丝中提取分离到总RNA,然而Trizol 法能提取到纯度较高、完整性较好的总RNA,28S及18S带型清晰无弥散,A260/A280值为191,RNA 产率为68264 μg·g-1,提取的总 RNA 适用于 RT PCR等分子生物学试验研究。     

木薯块根总RNA提取方法的比较和改进

[目的]为更好地利用基因操作手段改良木薯品质和提取高质量的木薯总RNA提供科学依据。[方法]采用4种方法提取木薯块根RNA,筛选一种最简单、有效的方法,并利用RT-PCR技术克隆木薯淀粉分支酶,分析所提取RNA的质量。[结果]结果表明,用改进的CTAB法和plant RNAReagent kit均能提取高质量的RNA,用plant RNAReagent更能节省时间,而且纯度比较高。对plant RNAReagent提取的RNA进行RT-PCR克隆,克隆出了与木薯淀粉合成有关的SBEII基因。[结论]plant RNAReagent kit提取的RNA,其质量可以满足基本的试验要求。     

不同方法提取狗脊蕨叶片总RNA的比较分析

[目的]为构建狗脊蕨叶cDNA文库,保存珍贵基因资源,克隆和研究与有效成分合成相关的基因等提供技术参考。[方法]以狗脊蕨叶片为材料,采用CTAB法、一步法、酚-SDS法和RNA试剂盒提取分离法提取总RNA,通过比较分析确定最优方法。[结果]这4种方法都能提取出182、8 S的RNA,但CTAB法和试剂盒提取分离法的总RNA质量较高,CTAB法还提取出清晰的5S RNA。一步法和SDS法带型模糊,有降解现象。CTAB法提取的狗脊蕨叶片总RNA质量较好,28S1、8S和5S条带清晰,且无明显降解。CTAB提取法OD260/OD280的值在1.93~2.06,试验中其OD260/OD280值为2.012,接近2.0,纯度较高。一步法和SDS法OD260/OD280>2.0,试剂盒法OD260/OD280<2.0。[结论]CTAB法适合提取的狗脊蕨叶片总RNA,质量较好,可用于cDNA合成、文库构建等后续分子生物学试验。     

胡杨、柽柳总RNA提取方法的建立

以胡杨和柽柳的叶片为材料，建立了一种从植物组织中快速分离总RNA的方法。该方法具有三个显著的特点：RNA提取周期短，应用改进的LiCl沉淀RNA方法，仅需l0min即可；方法简单易行，仅需要几种常用试剂，操作步骤简单；提取的RNA杂质少，得率高，并能在提取过程中较有效抑制RNA的褐化效应。RNA质量可以满足cDNA文库构建、DDRT—PCR等要求。     

桑黄总RNA提取方法研究

为探索适合桑黄总RNA的提取方法,以桑黄菌丝体为试验材料,比较了用Trizol法、CTAB法和RNA prep pure Plant Kit试剂盒法提取后总RNA的质量。结果表明,3种方法均能从桑黄菌丝体中提取分离到总RNA,其中 Trizol 法能提取到纯度较高、完整性较好的总RNA,28S及18S带型清晰无弥散,A260/A280值为196,RNA 产率为60464 μg·g-1,提取的总 RNA 适用于基因克隆与基因表达分析等分子生物学试验研究。     

一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法

在药用植物中开展分子生物学研究时的常见困难是RNA提取困难,提取的RNA质量不能满足下一步试验要求。探索了一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法并对提取的RNA质量在随后的分子生物学中进行了检验。结果证实通过该方法提取的RNA纯度和完整性较好,完全可以满足后续的分子生物学实验要求,也可以作为其它药用植物RNA提取的参考方法。     

适用于转录组测序的大豆根总RNA的提取方法研究

[目的]获得高质量、高产量并能满足转录组测序要求的大豆根总RNA。[方法]比较分析了Trizol法、CTAB-Li Cl法和试剂盒法的提取效果。[结果]3种方法均能从大豆根中提取出总RNA。但与Trizol法、CTAB法相比,试剂盒法提取的大豆根总RNA纯度高、完整性好,平均浓度达413.9 ng/μL,A260/A280≈2.14,A260/A230≈2.10,方法可重复性好。[结论]试剂盒法提取的RNA满足转录组测序的质量要求,可进行后续的转录组测序和其他分子生物学相关研究工作。     

白菜总RNA的高效提取方法及常见问题分析

[目的]建立从白菜叶片组织中快速提取高质量RNA的方法,为进行LD—PCR、AnP、SRAP及其他分子生物学试验奠定基础。[方法]通过增加高速离心时间,用3％H2O2处理试验器皿等措施对Trizol试剂法进行优化,建立了一种简单、快捷、经济、高效的RNA提取方法。[结果]在1．5h左右可得到高质量的总RNA,经琼脂糖凝胶电泳、蛋白核酸分析仪检测,提取的总RNA具有清晰的28S、18S、5S3条带,且28S的宽度是18S的2倍左右,0D260／DD280比值为1．90—2．16。进一步以提取的总RNA为模板成功进行了单链cDNA的合成和LD—PCR。[结论]改良的Trizol试剂法所提取的RNA纯度和完整度极高,可用于LD—PCR、SRAP、基因克隆及表达分析等后续分子生物学试验。     

番木瓜果肉RNA提取方法的比较

为了从成熟末期的番木瓜果肉中提取纯净完整的RNA,本试验采用了TRIzol试剂盒、改良TRIzol、SDS法、CTAB法等4种方法从番木瓜果实中提取总RNA。从RNA的完整性、产率和纯度等方面对这几种方法进行比较和评价,结果表明,采用改良TRIzol所得RNA完整性较其他方法好,条带清晰无明显降解,28S和18S RNA的亮度比约为2∶1,D260/D280达1.9且得率较高,为380.5μg.g-1,经RT-PCR后得到一特异条带表明该RNA可用于后续分子生物学操作。     

两种桃芽总RNA提取方法的比较研究

以‘曙光油桃’芽为试材,采用改良CTAB法、Trizol法进行总RNA提取,并通过凝胶电泳、核酸蛋白分析仪和Q-PCR检测所提取总RNA样品的质量。结果表明:改良CTAB法提取的RNA,经Q-PCR后扩增桃芽HK基因,可以得到与目的片段大小一致的条带,条带清晰,能满足基因表达分析等后续试验的要求;而Trizol法所提取的RNA,条带较弱,经Q-PCR后扩增桃树芽内HK基因,得不到与目的片段大小一致的条带,难以达到进一步试验的要求。