培养三倍体柑桔植株的研究

以柑桔异源四倍体体细胞杂种[哈姆林甜橙（CitrussinensisOsbeckcv．Hamlinsweetorange）＋粗柠檬（C．jambhiriLush　cv．Rough　lemon）]为父本与单胚的二倍体柑桔类型[宜昌橙（C．ichangensisSwingle）与华农本地早（C.reticulataBlancocv．Huanongbendizao）的杂交后代]杂交,通过幼胚早期离体培养,获得了113株再生植株,其中89％为三倍体,并初步筛选出了适宜的幼胚离体培养时间为授粉后80d。     

三倍体柑桔幼胚离体培养研究

三倍体柑桔幼胚离体培养研究伊华林１邓秀新２史永忠２郭文武２（１华中农业大学园艺系；２华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉４３００７０）关键词柑桔；三倍体；体细胞杂种；胚抢救；有性杂交ＳｔｕｄｉｅｓｏｎＣｕｌｔｕｒｅｏｆＩｍｍａｔｕｒｅＴｒｉ...     

柑桔体细胞杂种的抗性研究

以４个柑桔体细胞杂种哈姆林甜橙＋飞龙炽（ＣｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｈａｍｌｉｎ＋ＰｏｎｃｉｒｕｓｔｒｉｆｏｌｉａｔａＲａｆ．ｃｖ．ＦｌｙｉｎｇＤｒａｇｏｎ）、哈姆林甜橙＋粗柠檬（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｈａｍｌｉｎ＋Ｃ．ｊａｍｈｉｒｉＬ．）、伏今夏橙＋宁波金柑（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｏｓｂ．ｃｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａ十ＦｏｒｔｕｎｅｌｌａｃｒａｓｓｉｆｏｌｉａＳｗｉｎｇｌｅｃｖ．Ｍｅｉｗａ）、伏令夏橙＋宜昌橙（Ｃ．ｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂ．ｃｖ．Ｖａｌｅｎｃｉａ＋Ｃ．ｉｃｈａｎｇｅｎｓｉｓＳｗｉｎｇｌｅ）及其融合亲本为试材，对其抗寒性、耐热性和抗脚腐病性能进行了研究，并从叶片膜脂脂肪酸成分分析了体细胞杂种的抗寒性和耐热性。研究结果表明，哈姆林甜橙＋飞龙枳杂种表现抗脚腐病、抗寒（－１４℃）、耐热（５２℃）、矮化、半落叶、扦插易生根，是极有希望的新砧木类型；伏令夏橙＋宜昌橙杂种表现抗寒（－１２℃）；哈姆林甜橙＋粗柠檬杂种表现耐热（５３℃）。４个体细胞杂种的抗性较之抗性弱的亲本一方都有提高。     

柑桔胚珠培养及胚状体发生的研究

选用‘Peng柑’、‘锦橙’、‘桃叶橙’、‘华农本地早’花后7周幼果胚珠进行培养，其胚状体发生的百分率分别是：48.5%、21.2%、19.8%、6.4%；胚性愈伤组织则为：28.2%、13.5%、15.8%、5.8%。各品种胚状体和胚性愈伤组织发生的百分率明显不同，与品种胚数多少相一致。不同激素和有机物对柑桔胚珠培养、胚状体的发生及胚性愈伤组织形成产生不同的影响，多单胚的‘华农本地早’仅从基本培养基中产生胚状体和胚性愈伤组织。胚珠培养中，胚状体发生的方式，根据来源不同分为三种：第一种是由胚珠（或已黄的球形胚上）长出白色的胚性愈伤组织，继而产生胚状体；第二种是在已分化的幼苗下胚轴或根部产生胚性愈伤组织和胚状体；第三种是在畸形胚上直接不断的分化出胚状体。     

柑桔胚珠培养及胚状体发生的研究

选用‘椪柑’、‘锦橙’、‘桃叶橙’、‘华农本地早’花后7周幼果胚珠进行培养.其胚状体发生的百分率分别是:48.5%、21.2%、19.8%、6.4%;胚性愈伤组织则为:28.2%、13.5%、15.8%、5.8%.各品种胚状体和胚性愈伤组织发生的百分率明显不同.与品种胚数多少相一致.不同激素和有机物对柑桔胚珠培养、胚状体的发生及胚性愈伤组织形成产生不同的影响.多单胚的‘华农本地早’仅从基本培养基中产生胚状体和胚性愈伤组织.胚珠培养中,胚状体发生的方式,根据来源不同分为三种:第一种是由胚珠(或已黄的球形胚上)长出白色的胚性愈伤组织,继而产生胚状体:第二种是在已分化的幼苗下胚轴或根部产生胚性愈伤组织和胚状体;第三种是在畸形胚上直接不断的分化出胚状体.     

柑桔RAPD技术体系建立与体细胞杂种鉴定

通过优化反应条件,建立起柑桔ＲＡＰＤ分析技术体系,并成功地应用于体细胞杂种鉴定。柑桔ＲＡＰＤ以Ｍｇ２＋为１．５ｍｍｏｌ／Ｌ、〔ｄＮＴＰｓ〕为１００μｍｏｌ／Ｌ时扩增稳定,效果良好。用１６个引物扩增〔哈姆林甜橙（＋）粗柠檬〕融合植株,体细胞杂种表现为双亲谱带之和。结合染色体计数,可将〔Ｐａｇｅ桔柚（＋）粗柠檬〕融合再生的体细胞杂种（异源四倍体）、叶肉亲本类型及同源融合植株区别开来。     

试管嫁接提高柑桔三倍体组培苗成苗率试验

选育三倍体类型是柑桔育种的热点之一。四倍体与二倍体杂交是获得三倍体的一条有效途径。但三倍体胚有早期败育的现象,为了获得三倍体植株,幼胚须进行早期离体培养。本实验室以异源四倍体柑桔体细胞杂种为父本与二倍体有籽品种或类型杂交,通过幼胚早期离体培养,获得了一批三倍体植株。但是,由于三倍体幼胚离体培养再生的试管苗大部分生长势很弱,生长慢,根发育不良,难以形成完整植株,即使成株,移栽成活率也较低。为了提高三倍体幼胚成苗率及移栽成活率,获得生活力强的三倍体材料,我们进行了试管微嫁接及不同时期移栽的试验。１材…     

柑桔体细胞胚胎高频发生及再生植株的研究

柑桔体细胞胚胎高频发生及再生植株的研究＊洪勇何永睿陈善春张进仁（中国农业科学院柑桔研究所重庆４００７１２）基因工程的快速发展为柑桔品种改良开辟了一条新途径,但在转基因过程中,较低的出芽频率及难以生根致使实际成株率并不高［１］,从而影响了基因工程研究进...     

柑桔体细胞杂种植物学性状,生长特性及其扦插繁殖研究

采用宜昌橙和伏令夏橙,金柑和伏令夏橙,哈姆林和粗柠檬融合的３个体细胞杂种,进行高接和扦插繁殖,并以尊或枳作比较,试验结果表明：体细胞杂种之间的生长量存在显著差异,并均受亲本影响;杂种的叶子植物学性状,与亲本相比,叶形指数变小;杂种的刺生长并与不两亲本均成正相关;杂种扦插成活率偏向高值亲本,其中两个杂种具有与枳扦插应用一样的潜力。     

柑桔畸形胚再生植株的研究

在柑桔胚状体高频发生、三倍体幼胚培养、败育胚的抢救和原生质体培养及融合研究过程中 ,常常伴随着畸形胚的大量形成 ,如多胚、多子叶、次级胚、幼根愈伤化肥大等 ,难以萌发成苗 ,实际上降低了植株再生频率 ,从而影响了柑桔的生物技术育种进程。本研究的目的是通过改变培养方式和培养条件探讨畸形胚成苗能力 ,这对进一步提高植株再生频率具有一定的指导意义。1　材料与方法1 1　畸形胚的诱导从花后 6～ 7周龄的新会橙、柑、葡萄柚的幼果中挑出幼胚珠接种于愈伤组织诱导培养基 (ＭＴ +ＢＡ 10ｍｇ 1)上 ,2 0天后长出白色的愈伤组织 ,经继…     

柑桔体细胞杂种扦插繁殖及其有关性状研究

对３个由原生质体融合产生的柑桔体细胞杂种繁殖特性的研究表明，金柑与甜橙属间体细胞杂种扦插生根成活率较低。甜橙＋宜昌橙以及甜橙＋粗柠檬种间体细胞杂种扦插萌发和生根能力与权及粗柠檬没有显著差异；插条发根平均为２．０条和１．８条，一年生植株根系总长分别为１２２．２ｃｍ和８０．７ｃｍ，与积和粗柠檬均无显著差异；粗柠檬＋甜橙杂种的须根数为３９条，株－１，与权（５４．５条·株－１）差异显著，而宜昌橙＋甜橙种间杂种（４７．７条·株－１）与积差异不显著；体细胞杂种的抗寒性有介于双亲之间的趋势     

柑桔三倍体苗的试管嫁接及微繁殖研究

甜橙胚乳三倍体试管苗茎段及顶芽采用试管扦插培养难于生根,亦不能正常生长;而将其茎段和顶芽嫁接于试管中的砧木上,成苗率达90％以上。在含BA0.1mg/L的MT培养基中,每株嫁接苗形成3～4个芽,可作试管快速繁殖。嫁接苗移植于无菌土中,成活率高达95％以上。田间二重接可加速三倍体小苗生长。本方法为解决柑桔试管苗移植问题提供了一条新途径。     

柑桔体细胞杂种的花粉育性及其遗传稳定性

对原生质体融合产生的５个已开花的体细胞杂种的花粉育性观察表明，它们的花粉染色活力在０－９０．１８％之间，其中４个体细胞杂种的花粉育性介于双亲之间，偏向亲值亲本，种间异源四倍体体细胞杂种产生７．１８％￣１８．５９％的小花粉，这类花粉只有正常花粉粒的１／３左右大小、内空，脐橙与结桔的体细胞杂种不产生花粉，墨西哥来檬与伏令夏橙的体细胞杂种花粉育性稳定，年份间无显著差异，粗柠檬与哈姆林甜橙的体细胞杂种无性     

柑桔胚性细胞系的建立

将乙烯作用的专化抑剂──硝酸银应用于柑桔胚珠培养中，通过交替继代处理和不断选择，成功地建立起能供给原生质体分离并具有良好再生能力的胚性愈伤组织。     

椪柑胚乳三倍体植株诱导研究

简述了椪柑胚乳三倍体植株的研究过程,研究了不同培养基和激素配比对椪柑胚乳的影响,结果表明:基本培养基相同时,激素配比对椪柑胚乳愈伤组织诱导影响很大;激素配比相同时,不同培养基对椪柑胚乳愈伤组织的胚状体诱导差异较大。     

柑桔体细胞杂种植物学性状、生长特性及其扦插繁殖研究

采用宜昌橙和伏令夏橙、金柑和伏令夏橙、哈姆林和粗柠檬融合的3个体细胞杂种,进行高接和扦插繁殖,并以亲本或枳作比较。试验结果表明：体细胞杂种之间的生长量存在显著差异,并均受亲本影响;杂种的叶子植物学性状,与亲本相比,叶形指数变小;杂种的刺生长并不与两亲本均值成正相关;杂种扦插成活率偏向高值亲本,其中两个杂种具有与枳扦插应用一样的潜力。即使两亲本的扦插成活率均为0,而杂种仍有部分扦插成活。