PCR检测临床病例中PCV-2、PRRSV和CSFV的混合感染

参照GenBank中已发表的有关基因序列,分别设计合成针对PCV-2、PRRSV和CSFV的3对引物,分别建立检测临床病例中PCV-2、PRRSV和CSFV感染的PCR或RT-PCR方法。结果显示,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳,分别各呈现1条大小约1154,372,375bp的特异条带。采用建立的PCR方法对江西各地发病猪和死亡猪的133份临床病料进行PCV-2检测,结果总检出率53.38%(71/133)。在71份PCV-2阳性的病料中检测出PRRSV20份,阳性率28.17%(20/71);CSFV9份,阳性率12.68%(9/71);PRRSV和CSFV共同感染9份,阳性率12.68%(9/71)。     

PMWS患病猪群中PCV2与CSFV、PPV、PRRSV混合感染的调查

应用套式PCR方法对采自辽宁、河北、河南、湖北、湖南、山东、浙江、福建和广西9个省份的733份临床发病猪肺脏和淋巴结样品进行了PCV2的检测,然后对鉴定为PCV2阳性的283份病料再分别进行PRRSV、PPV和CSFV的检测,以确定猪群中PCV2与CSFV、PRRSV和PPV双重感染情况,结果表明:CSFV、PRRSV和PPV阳性样品分别为74份、94份和46份,阳性率分别为26.1%、33.2%和16.3%。表明这些地区发病猪群中PCV2与这三种病毒的双重感染普遍存在,其中以PCV2和PRRSV的双重感染较为突出;但在河北和湖北两省,则以PCV2与CSFV的双重感染为主。     

猪瘟合并猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)感染

2004年初以来，杭州地区的几个规模化猪场陆续发生仔猪腹泻、保育猪呼吸困难的疾病，剖检见肺部呈橡皮样，全身淋巴结水肿，部分猪脾脏边缘梗死等，发病率、死亡率较高。设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）的特异性引物，进行RT—PCR或PCR检测；运用伪狂犬病（PR）鉴别试剂盒检测PR，运用免疫荧光法检测猪瘟（HC），并进行了细菌分离培养，通过全面检查认为，这几个猪场发生了猪瘟合并猪PRRSV、PCV2感染。     

一起PRRSV、PCV-2和App混合感染的诊断

宜兴某猪场仔猪出现以体温升高，两耳的耳根部和四肢末端及腹部呈紫色，剖检以肺部肉变，胸腔积液等为特征的疫病。经流行病学调查、临床症状观察、病理变化分析并结合实验室检测，诊断该病为猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型和胸膜肺炎放线杆菌混合感染。经过紧急免疫接种和综合治疗，疫情得到基本控制。     

CSFV、PRRSV和PCV2多重PCR检测方法的建立及初步应用

为建立同时检测猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的多重PCR,参照GenBank中发表的3种病毒的基因序列,针对猪瘟病毒的E2、猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF7和猪圆环病毒2型的ORF2等基因,分别设计出3对特异引物,通过优化反应条件,建立了同时检测3种病毒的多重PCR,该PCR可同时扩增出204 bp(猪瘟病毒)、314 bp(猪繁殖与呼吸综合征病毒)和485 bp(猪圆环病毒2型)的目的条带,猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒和猪流行性腹泻病毒的扩增结果为阴性。选取96份疑似有繁殖障碍病的母猪,采集病猪血清样品进行检测,其中感染2种以上病毒的样品比例为34.3%(33/96)。结果表明,多重PCR与单一PCR的符合率为100%,该方法可用于猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型等病毒的临床快速检测与流行病学调查。     

一起PRRSV、PCV-2和App混合感染的诊断

宜兴某猪场仔猪出现以体温升高,两耳的耳根部和四肢末端及腹部呈紫色,剖检以肺部肉变,胸腔积液等为特征的疫病.经流行病学调查、临床症状观察、病理变化分析并结合实验室检测,诊断该病为猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型和胸膜肺炎放线杆菌混合感染.经过紧急免疫接种和综合治疗,疫情得到基本控制.     

应用IIF和PCR方法对病猪肺泡巨噬细胞PRRSV、PCV2的检测

对66份2004年10月至2005年8月患呼 吸道疾病发病猪的肺组织进行PBS灌洗处理,获得肺泡巨噬细胞(PAM),用PAM抹片,应用间 接免疫荧光试验(IIF)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV);同时提取PAM DNA作为模板, 应用PCR方法检测猪圆环病毒2型.结果在66份PAM中,26份PRRSV阳性,23份PCV2阳性,其中 8份同时检测出PRRSV和PCV2.以上结果表明,猪群中PRRSV和PCV2混合感染情况比较严重; 应用IIF和PCR方法可以在PAM中检测PRRSV和PCV2.     

NADC30-like PRRSV和PCV2d共感染与继发感染PCV2抗体阳性断奶仔猪的致病性

为了确定近年来国内主要流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like谱系与猪2型圆环病毒(PCV2d亚型)共感染与继发感染后对猪的致病作用,使用本实验室分离的NADC30-like谱系PRRSV与PCV2d毒株感染PCV2抗体阳性断奶仔猪。选取30只5周龄PCV2抗体阳性断奶仔猪,随机均分为6组,分别为PBS、PCV2、PRRSV、PCV2-PRRSV、PRRSV-PCV2和Co-PRRSV-PCV2感染组。记录各组临床指征(体温、体质量、临床症状和存活率);检测特异性抗体及TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10共4种细胞因子的变化;并对主要组织脏器的病理变化进行分析。结果显示,各感染组在感染PRRSV后均出现体温升高、体质量减轻、咳喘、腹泻、精神沉郁等临床症状;Co-PRRSV-PCV2、PRRSV-PCV2和PRRSV组表现出更为严重的肉样变和淋巴细胞浸润;先感染PCV2可以延迟PRRSV特异性抗体的产生;PRRSV组表现出高水平的TNF-α和IL-10;NADC30-like PRRSV与PCV2d共感染与继发感染PCV2抗体阳性仔猪会出现严重的临床症状和...     

上海地区出现猪繁殖与呼吸综合征和2型猪圆环病毒混合感染

上海地区6个规模化猪场断奶后仔猪出现全身消耗性综合征，剖检的18头病仔猪都表现肺脏严重病变和淋巴结肿大出血。分别设计针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)N蛋白和2型猪圆环病毒(porcine circovirus type2，PCV-2)部分基因的特异性PCR引物，通过RT—PCR和PCR技术从患病猪肺脏组织均扩增出PRRSV和PCV-2的特异基因片段。结合临床症状和流行病学调查，证实上海地区出现PRRSV和PCV-2的混合感染。     

广西出现猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染

2004年4月以来,广西的桂林、玉林、南宁、崇左、贵港、来宾6市共8个规模化猪场均发生以肺部严重病变、淋巴结肿大出血为主要特征的疫病。在流行病学调查、临床症状、病理剖检的基础上,采用已建立的诊断猪繁殖与呼吸综合征病毒的RTPCR技术和诊断猪圆环病毒2型的PCR技术,从这几个规模化猪场的病料中均扩增出特异的目的基因片段,证实为猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型混合感染研究进展

1病原简介 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的，以母猪的繁殖障碍、哺乳仔猪的高死亡率及呼吸症状为特征的一种传染病。PRRSV是有囊膜的单股正链RNA病毒，属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属。该病1987年在美国首先发生，随后在世界各主要养猪国家流行。按其遗传差异和抗原性差异，可分为欧洲型（A群）与美洲型（B群）。该病毒的基因组全长约为15kb，含有8个开放阅读框架（ORFs），其中ORF1a和ORF1b编码病毒非结构蛋白，ORF2-ORF7编码病毒的结构蛋白。我国1996年由郭宝清等首次报道该病，研究证明其为美洲型。PRRS在我国大部分地区均有流行，造成巨大的经济损失。     

应用PCR检测猪圆环病毒2型和猪繁殖呼吸综合征混合感染

猪圆环病毒病自1991年加拿大首次报道以来，包括我国在内的世界上许多国家和地区都报道有该病发生。近年来，该病发生呈上升趋势，给世界的养猪业造成了相当大的经济损失。目前猪圆环病毒在猪场中的感染率是很高的，它主要侵害断奶后2-3周的仔猪，发病率为20％。60％，死亡率为5％-35％。已成为阻碍当今养猪业发展的重要病原之一。     

PRRSV和PCV-2二重PCR检测方法的建立及初步应用

参考GenBank上已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2基因序列和猪圆环病毒2型ORF1基因序列,分别设计并合成了可用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的2对引物,扩增目的片段大小分别为421 bp和714 bp。在建立了用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的单项PCR检测方法并优化单项PCR条件的基础上,建立了针对两种病毒的二重PCR检测方法。通过检测143份临床病料对二重PCR方法和单项PCR/RT-PCR方法进行了对比验证。结果显示,两者的总符合率在92.6%以上,表明该二重PCR检测方法可以用于临床病料的检测。     

II型PCV和PRRSV单独与共同感染未吃初乳猪病例人工复制

3周龄剖腹产不吃初乳(CD/CD)猪分别感染II型猪圆环病毒(PCV-2),猪繁殖-呼吸综合征病毒(PRRSV),PCV-2和PRRSV共同感染,比较这些病毒的单独或联合作用。并于接种后不同日龄及猪濒死时剖检。接种后第10天(10DPI),PCV-2和PRRSV共同感染猪出现严重的呼吸困难、昏迷,偶尔出现黄疸,10DPI后,91%死亡,20DPI时,全部死亡。PCV-2单独感染猪出现昏迷,散发性黄疸,42%出现渗出性皮炎,死亡率26%。PRRSV感染猪出现呼吸困难和昏迷,至28DPI时恢复。PCV-2感染猪和PCV-2/PRRSV共同感染猪皆出现与断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)相同的组织病变。PCV-2/PRRSV共同感染猪亦出现严重的增生性间质肺炎和更相似的肝病变,出现极大量的含有PCV-2抗原的细胞。PRRSV感染猪出现中等程度的增生性间质肺炎,但未出现支气管或肝病变以及淋巴组织萎缩。研究结果表明:1PCV-2共感染能加重PRRSV对CD/CD猪引起的间质性肺炎的严重程度;2是PCV-2而不是PRRSV引起PMWS的淋巴组织萎缩,肉芽肿性炎症,坏死性肝炎等特征病变。     

广西某猪场猪繁殖与呼吸综合征和猪圆环病毒2型混合感染的诊断

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是20世纪80年代后期发现的一种新的高度传染性的疾病,临床上以母猪流产、死胎、木乃伊胎、弱仔等繁殖障碍及仔猪呼吸道症状、死亡率高为主要特征.该病自1987年在美国发现以来,至今已蔓延至世界所有养猪国家,给养猪业带来巨大的经济损失.     

猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的混合感染

2005年以来,贵州省一些猪场发生以母猪流产、产弱仔、死胎,仔猪腹泻、消瘦、行动障碍等为特征的疾病,剖检病猪可见心肌、肾、淋巴结等出血,肺水肿,肝脏表面有灰白色坏死点,脾脏边缘有出血性梗死,发病率和死亡率较高。运用荧光抗体技术检测猪瘟（CSF）,设计套式引物用RT PCR或PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV-2),并进行了细菌分离培养。综合临床症状、病理变化、实验室检验,确诊为猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪圆环病毒2型（PCV-2）混合感染。     

猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染病例的实验室诊断

为确诊贵阳市某养猪场生猪发病死亡的原因,采集3头病猪的血液、肺脏、肾脏、脾脏、淋巴结病料,采用PCR、qRT-PCR方法进行猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒核酸检测.结果:在血液及组织样品中猪圆环病毒2型核酸检测均为阳性,猪瘟病毒核酸检测均为阴性;在血液样品中猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸检测结果为阴性,而...     

PRRSV、PCV2与CSFV多重SYBRGreenⅠ实时荧光PCR检测方法的建立与初步应用

旨在建立一种能快速、灵敏、同时检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)与猪瘟病毒(CSFV)3种病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。参照GenBank中登录的相关基因序列,设计了3对引物分别用于扩增PRRSV ORF7基因、PCV2ORF2基因与CSFV 5′端保守序列的部分片段。将测序正确的3段基因片段分别克隆入pGEM-T Easy载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果表明,PCV2、PRRSV与CSFV荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为84.6、86.7、89.3℃,溶解曲线特异,灵敏度分别可达181、202、177拷贝/μL,是普通PCR检测方法的100倍。本试验建立的PRRSV、PCV2与CSFV的荧光定量PCR检测方法实现了3种病毒的同时检测,能够对PRRSV、PCV2、CSFV混合感染的临床病料进行快速诊断。