肝窦内皮细胞和枯否细胞中bcl—2和GAPDH mRNA半衰期的测定

通过反转录PCR（RT－PCR）测定了肝窦内皮细胞和枯否细胞中bcl-2和GAPDH mRNA的半衰期。结果表明，在窦内皮细胞中bcl-2和GAPDH mRNA的半衰期分别为6．13和大于20h，在枯否细胞中bcl-2和GAPDH mRNA的半衰期分别为5．86和13．74h。     

枯否细胞凋亡和周期基因mRNA的表达

研究了经ＴＡＡ慢性处理而诱发的肝纤维化期间枯否细胞中凋亡基因和细胞周期基因的表达。按照肝脏损伤的程度把实验动物Ｗｉｓｔａｒ大白鼠分为２组（ＴＡＡ－１和ＴＡＡ－２）。经核Ｒｕｎ－ｏｆｆ转录分析表明,在２个试验组的枯否细胞中,总的ＲＮＡ合成率下降约２０％。在ＴＡＡ－１的枯否细胞中,ｂｃ１－２和ｂｃ１－ｘ的ｍＲＮＡ合成增加了４倍,而ｃｙｃｌｉｎ Ｅ在肝损伤的前期有所降低。在ＴＡＡ－２中,ｂａｄ、ｃｙｃｌ     

纤维化肝窦内皮细胞中基因表达的研究

按照肝脏受TAA损伤的程度把试验动物Wisatr大白鼠分为两组（TAA－1和TAA－2），Northern杂交分析表明，在TAA－1的窦内皮细胞中，bcl-x和bax基因的表达水平轻微降低，随着肝损伤的增加，表达水平再度下降。核Run-off转录分析表明，两组的窦内皮细胞、总的RNA合成率下降约30％（P＜0．001）；TAA－1、bad、bax和cyclinE的mRNA合成有所降低，而cyclinA的mRNA合成则明显增加；TAA－2、bad、bax和bcl-2的mRNA合成增加了2－3倍，bcl-x的mRNA合成增加了7培多。     

纤维化肝窦内皮细胞中基因表达的研究

按照肝脏受 TAA损伤的程度把试验动物 Wistar大白鼠分为两组 ( TAA- 1和 TAA- 2 )。Northern杂交分析表明 ,在 TAA- 1的窦内皮细胞中 ,bcl- x和 bax基因的表达水平轻微降低 ;随着肝损伤的增加 ,表达水平再度下降。核 Run- off转录分析表明 ,两组的窦内皮细胞、总的 RNA合成率下降约 30 %( P<0 .0 0 1 ) ;TAA- 1、bad、bax和 cyclin E的 m RNA合成有所降低 ,而 cyclin A的 m RNA合成则明显增加 ;TAA- 2、bad、bax和 bcl- 2的 m RNA合成增加了 2～ 3倍 ,bcl- x的 m RNA合成增加了 7倍多     

LPS对小鼠枯否细胞核因子-κB活性的促进效应

为探讨细菌胞壁主要内毒素脂多糖 (Lipopolysaccharide ,LPS)对与炎症反应紧密相关的核因子 -κB(NF -κB)活性的影响 ,从正常对照和不同剂量的LPS刺激后不同时相的小鼠中分离出其肝脏枯否细胞 (Kupffercell,KC)。用凝胶迁移率改变分析法 (Electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)检测KC核提取物中NF -κB的活化与LPS的量效、时效关系。结果发现 :刺激 3h后 ,低剂量的 (1mg/kg)LPS ,即可检测到NF -κB活性 ;中剂量组 (5mg/kg)的NF -κB活性达峰值 ,高剂量组 (10mg/kg)则仍可维持NF -κB的活化状态。中剂量 (5mg/kg)刺激 0 .5h即可检测到NF -κB活性 ,3h时NF -κB活性达峰值 ,并可持续到至少 8h。表明抑制NF -κB的过度活化可能有助于炎症的治疗。     

过量铁和酒精对大鼠肝损害的电镜观察

20只Wistar断奶雌性大鼠随机分为酒精组、铁组,酒精/铁组和对照组。12个月后剖杀所有大鼠,取肝脏作电镜观察,用原子吸收分光光度计作肝内铁含量测定。结果表明,试验各组肝铁含量比对照组高8～15倍;超微病变为细胞核皱缩和异常;线粒体肿大变形,粗面内质网扩张和脂滴形成;枯否氏细胞和肝细胞内含大量铁质沉着体,多数沉积于溶酶体内;肝淋巴间隙和肝窦内有胶原束。     

槲寄生碱对人肝癌细胞株SMMC-7721 bcl-2mRNA表达的影响

为研究槲寄生碱对人肝癌细胞株SMMC-7721对bcl-2mRNA表达的影响。采用半定量RT-PCR法测定bcl-2mRNA表达变化。结果表明,RT-PCR检测SMMC-7721细胞中bc1-2、mRNA表达的相对强度,发现bc1-2mRNA的表达强度降低(P0.05)。说明中药槲寄生碱抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖作用与降低bcl-2mRNA表达水平有关。     

半定量RT-PCR测定中药成分对小鼠脾T细胞IL-2mRNA水平的影响

 应用半定量RT-PCR方法，测定了9种中药成分对小鼠脾脏T细胞IL-2mRNA水平的影响。结果显示，体内注射黄芪多糖、淫羊藿多糖、当归多糖、蜂胶黄酮和黄芪皂甙能够使ConA诱导的小鼠脾T细胞IL-2mRNA水平显著升高，蜂胶多糖、板兰根多糖、人参皂甙、淫羊藿黄酮不能影响细胞内IL-2mRNA丰度；中药成分体外诱导时与体内应用时的作用效应相同，但与对照相比较，蜂胶多糖在体外能够显著促进IL-2mRNA的诱生，与体内不同。     

bcl-2基因在成年和胚胎鸡免疫器官中的表达及其与细胞凋亡的关系

用一步法从17 日龄来克亨SPF鸡胚和90 日龄成年鸡的法氏囊、脾脏和胸腺组织中提取总RNA(TRNA),用鸡B-细胞淋巴瘤/白血病-2基因 (bcl-2) cDNA探针进行Northern blot杂交。发现bcl-2 在成年和胚胎鸡的不同免疫器官中表达量不同, 成年鸡bcl-2 的表达量多少依次为胸腺、脾脏、法氏囊, 而胚胎鸡则是胸腺、法氏囊、脾脏。同时用流式细胞法测定这些器官的细胞凋亡情况, 胚胎鸡法氏囊、脾脏和胸腺的细胞凋亡率分别是0.40% , 0.68% 和0.38% ; 成年鸡则是6.98% , 1.17% 和0.61% 。结果表明, 鸡bcl-2 基因通过阻抑细胞凋亡直接调控正常免疫器官的发育, 在淋巴细胞发育过程中bcl-2是免疫细胞亚型选择的重要调节物。     

MOB2敲低表达调控NDR1/2-YAP对肝癌细胞迁移和细胞自噬的研究

以肝癌细胞SMMC-7721和SK-HEP1为研究对象,构建慢病毒介导的单极纺锤体1结合蛋白2 (MOB2)稳定干扰表达的细胞模型;应用RT-qPCR和Western blotting方法检测相关基因的表达水平;利用Transwell细胞迁移试验和自噬流试验检测MOB2敲低表达对细胞迁移和细胞自噬的影响。结果表明:MOB2敲低表达可抑制肝癌细胞SMMC-7721和SK-HEP1的迁移,促进细胞自噬; MOB2敲低表达可上调NDR1/2的磷酸化水平(pT444/442)和YAP的磷酸化水平(pS127YAP),下调受YAP转录调控的下游靶基因CTGF和CYR61的表达; MOB2敲低表达可上调ULK1、LC3BII,下调SQSTM1/p62,促进细胞自噬流的形成。这一研究说明MOB2敲低表达可通过促进NDR1/2的磷酸化而负调控YAP的转录激活活性,调控下游与细胞迁移和自噬相关基因的表达,影响肝癌细胞的迁移和细胞自噬过程。     

siRNA对猪肝细胞THRSP基因mRNA表达的干扰效率

应用改良的剪切消化法(1%Ⅳ型胶原酶)消化分离仔猪肝脏细胞,建立稳定的仔猪肝脏细胞的分离与原代培养体系;通过siRNA途径及RT-PCR技术检测肝细胞THRSP基因mRNA表达水平。结果表明,平均每g肝脏可获得6.2×106个细胞,接种即时存活率达94.84%,培养存活率达50%左右,细胞转染后细胞存活率达80%以上;设计合成的siRNA的干扰效率为75.3%     

不同剂量胰岛素、胰高血糖素和甲状腺素处理对奶牛乳腺上皮细胞FcRn mRNA表达的影响

 【目的】采用real-time PCR方法检测体外激素处理对奶牛乳腺上皮细胞FcRn（neonatal Fc receptor,FcRn）mRNA表达的影响。【方法】在乳腺上皮细胞培养液中添加不同浓度胰高血糖素（0.01、0.1和1 μmol•L-1）、胰岛素（0.005、0.1和0.5 μmol•L-1）、甲状腺素T4（0.01、0.1和1 μmol•L-1）,体外培养并收集细胞,提取细胞mRNA后,利用real-time PCR检测FcRn mRNA的相对丰度。【结果】在一定添加剂量范围内,随着添加剂量的增加,甲状腺素和胰高血糖素能够显著地促进FcRn mRNA表达量升高（P＜0.05）,胰岛素在添加量为0.005 μmol•L-1和0.5 μmol•L-1时FcRn mRNA的表达量低,但在0.1 μmol•L-1添加时表达量显著升高（P＜0.05）。【结论】添加外源胰岛素、胰高血糖素和甲状腺素能够影响FcRn mRNA的表达,为进一步研究乳腺内FcRn受体变化以及影响因素提供了依据。     

绿茶多酚诱导肝癌细胞凋亡时Caspase-3蛋白活性与mRNA的变化

[目的]研究绿茶多酚(EGCG)诱导肝癌细胞Hep-G2凋亡过程中半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白活性与mRNA的变化。[方法]100 mg/L的EGCG处理Hep-G2细胞48 h,DAPI染色观察细胞形态学,用MTT检测EGCG对Hep-G2细胞生长的影响,流式细胞技术Annexin V-FITC PI法检测不同浓度EGCG诱导细胞的凋亡率,分光光度法检测Caspase-3的活性,用半定量RT-PCR法检测Caspase-3的mRNA变化。[结果]100 mg/L的EGCG作用Hep-G2细胞48 h后,荧光显微镜观察到细胞出现核碎裂和凋亡小体;MTT法检测到EGCG对肝癌细胞Hep-G2的生长均有显著抑制作用,呈浓度依赖性;Annexin V-FITC PI法检测到不同浓度的EGCG作用与肝癌细胞Hep-G2后,凋亡率较对照组明显升高,并随诱导浓度的增加而增加;不同浓度的EGCG处理组和不同时间EGCG处理组的Caspase-3活性和mRNA表达量均比对照组明显升高。[结论]Caspase-3蛋白活性与mRNA上调是EGCG诱导肝癌细胞凋亡的的重要原因和机制。