慢生型大豆根瘤菌putA基因的功能分析

重组质粒pGX300上的putA基因是从慢生型大豆根瘤菌GX201中克隆到的编码脯氨酸脱氢酶的基因。通过Tn5gusA5定位诱变方法构建了putA基因的突变株GX20120，实验表明，GX20120的结瘤时间推迟，竞争结瘤能力降低。     

慢生型大豆根瘤菌nfeC基因的定位

在前期工作中 ,从慢生型大豆根瘤菌菌株 GX2 0 1的基因文库中筛选到一个含 nfe C基因同源片段的重组质粒 p GXN2 0 1。在本工作中 ,将 nfe C基因同源片段定位在 4 kb Cla I Xba I片段上。对该片段的部分序列分析表明与已报道的 nfe C基因具有 95%的同源性     

山西省快生型大豆根瘤菌资源调查和鉴定

从山西省主要大豆产区的不同土壤和大豆品种中分离得到的38个快生型大豆根瘸菌株的鉴定表明,这些分离物的IAR除了氨苄青霉素外,均较慢生型为低。38个菌株被分为4个血清型,其中2个为新发现的,命名为2077和2120型。细胞成分N%含量为2.01-3.78,C%含量为50.52-55.53%,N/C值<10。所检测的7个菌株都有1-2个大质粒,且每个均有112 Md的大质粒。分离株的共生效应和结瘤竞争由于大豆品种不同而有显著差异。本研究表明,我国大豆起源地之一的山西省,快生型大豆根瘸菌的分布广泛,分离频率较高,菌株类型也多。     

慢生型大豆根瘤菌nfe基因的分子克隆

ｎｆｅＣ基因是从慢生型大豆根瘤菌中克隆到的,与竞争结瘤有关的基因。本研究从慢生型大豆根瘤菌菌株ＧＸ２０１的ｐＬＡＦＲ３为载体的基因文库中,筛选出与ｎｆｅ同源基因克隆。以转座子Ｔｎ５ｇｕｓＡ５诱变获得了ｇｕｓ基因表达的Ｔｎ５ｇｕｓＡ５插入突变质粒。     

用RAPDs研究大豆根瘤菌的遗传多样性

采用ＲＡＰＤｓ分子标记研究２８株中国大豆根瘤菌的遗传多样性，１２个随机引物扩增产物电濂昆计算机聚类分析，得出反映菌株基因组序列相似水平的树状图。由树状图得知：ＲＡＰＤｓ分析结果可以准确地将供试大豆根瘤菌分为快、慢两群。每群中又可以再划分为两个亚群。本研究的结果还表明来源于新疆的一群快生型大豆根瘤菌显著不同于其它地区的快生型大豆根瘤菌菌株，是独立的一群，与陈文新等用表型性状的研究方法得出的结论一致。     

海南根瘤菌S25的质粒生物学特性

根瘤菌Ｓ２５从海南岛山毛豆分离得到，在分类上比较独特。该菌株具有较强抗逆性，如耐酸，耐亚硝酸，对多种抗生素具有抗性。质粒检测，结果显示，它含有一条大允１５０ｋｂ的大质粒。以共同结瘤基因ｎｏｄＡＢＣ和固氮酶结构基因ｎｉｆＨＤＫ为探针与质粒进行分子杂交，结果表明，该质粒载有结瘤与因氮基因。     

四川高效大豆根瘤菌的筛选及初步应用研究

采用无氮水培、盆栽、田间区组试验,从采集自四川33个市县35个采样点分离获得的70个大豆根瘤菌株中,筛选与四川主栽大豆品种 贡选1号 匹配性最佳的根瘤菌。对第一批分离自21个市县23个采样点的52个菌株进行无氮水培实验,其结瘤能力和共生固氮能力表明,S8、S22、S36、S46、S55、S65菌株与贡选1号共生匹配性好。用6个菌株进行的盆栽试验结果表明,S36、S8菌株与 贡选1号 匹配性较佳。将第二批分离自四川另外12个市县的12个采样点的18个菌株进行第二次水培实验,以S8、S36和CK分别作为阳性和阴性对照,结果表明接种S151、S152、S150、S149菌株的植株鲜重和干重均极显著高于CK,且高于阳性对照（S8、S36）。结合盆栽和第二次水培实验结果选择S152、S151、S150、S149、S8进行田间试验,以不接种为对照,结果显示,接种S152、S150菌株的大豆产量分别比CK显著增加33.5%和18.5%,且显著高于其它三个供试菌株S151、S149和S8接种处理。为此筛选出与四川主栽大豆品种贡选1号共生匹配性最佳的菌株是S152、S150。     

北方地区大豆根瘤菌的生物学特性

对北方地区大豆根瘤菌的生物学特性进行了较为系统的研究,结果表明,黑、辽地区分离、纯化的17株根瘤菌均具有典型的根瘤菌的个体形态和菌落特征,生理生化指标接近,可与辽豆15共生结瘤,分为快生菌和慢生菌。所有根瘤菌均可不同程度地利用供试的5种碳源。耐酸碱度、耐盐性及温度敏感实验表明,菌株HS3可在pH6.0~9.0生长,菌株HH4可耐受1.5%氯化钠,菌株HH4,HH2可在13℃~39℃生长。     

三叶草、豌豆和快生型大豆根瘤菌类菌体繁殖研究的进展

采用单个原生质体分离和微室培养技术研究了三叶草、豌豆和快生型大豆根瘤菌在根瘤中的分化和繁殖。结果表明:快生型大豆根瘤菌体的分化和繁殖特性与慢生型大豆根瘤菌类似,多个杆状类茵体包含在一个共同的类菌体周膜中,可区分出未成熟的细小杆状类菌体和成熟的杆状类菌体;其繁殖率在刚现瘤时<0.01％,到10周瘤龄时增加到40％以上。而三叶草和豌豆根瘤菌在根瘤中的分化过程是从小杆菌→未成熟细长杆状类菌体→成熟的棒状或Y状类菌体。在一般条件下,只有小杆菌才能繁殖,其繁殖率也随瘤龄而增加。在根瘤发育后期,少数成熟的三叶草和豌豆根瘤类菌体,在含水量较多时,可以转化为活跃运动的大杆菌,然后在分裂过程中逐次缩小并最终转变为正常的根瘤小杆菌;含水量较少时,大杆菌继续生长形成假丝状体,最后再断裂为大杆菌或停止生长。渗透压保护不是根瘤类菌体或小杆菌繁殖的必要条件,除对幼小根瘤的未成熟类菌体外,它妨碍成熟类菌体或小杆菌的生长和繁殖。     

高固氮基因工程大豆根瘤菌的研制及其增氮效应

通过构建快生型大豆根瘤菌Ｂ５２的基因文库和三亲本杂交，将增效因子ＤＮＡ片段导入优良的慢生型大豆根瘤菌２２－１０中，获得携带来自快生菌增效因子ＤＮＡ片段的工程菌株ＨＮ３２，经盆栽和小区试验，证明基因工程菌株ＨＮ３２比出发菌株２２－１０平均增产６％，比对照平均增产１３．２％～１６．９％，相当于每公顷施７５～１５０ｋｇ尿素．１９９２～１９９５年，在广西推广应用基因工程大豆根瘤菌ＨＮ３２２．１６万ｈｍ２，每公顷平均增产１９％，投入产出比１：３０。增加经济效益１４０９．８万元。     

不同保藏年代的大豆根瘤菌冻干菌种的生物学活性研究

对实验室保藏的4～25年的冷冻干燥管大豆根瘤菌菌种进行了生物学活性测定。结果表明，供试4种大豆根瘤菌都有结瘤能力和固氮能力，它们之间的单株结瘤数和固氮酶活没有显著差异。同时证明冷冻干燥法是保藏根瘤菌的良好方法。     

安徽省北部大豆根瘤菌的分离,血清学分析及田间自然结瘤调查

对安徽省北部分离的２７株快生大豆根瘤菌和３８株慢生大豆根瘤菌的血清学分析及田间自然结瘤的血清学调查表明：００５血清型系安徽北部夏大豆产区占据优势的血清型，１８组样品和再现频率为１００％；３６株分离物中２６株属００５血清型，占总分离物的７２．５％。２０４８血清型出现频率为８３．３％；在３组样品中占瘤率达４１－５１。６％。２１７血清型占瘤率普遍低于１６％。讨论了自然结瘤调查中采样地点，大豆品种和土壤类     

两种扩增rDNA片段RFLP图谱用于快生型大豆根瘤菌的遗传多？…

根据Ｅ．ｃｏｌｉ基因组ｒＤＮＡ保守序列设计的两对引物,分别用于扩增３０株来源于我国不同地区的快生型大豆根瘤菌菌株。扩增产物经几种较少识别序列的内切酶消化后,得出特征的限制性内切酶酶切图谱。该图谱可用于供试菌株种水平的鉴定及菌株ｒＤＮＡ分子的遗传多样性研究。选用来源于Ｅ．ｃｏｌｉ基因组１６ＳｒＤＮＡ保守序列的一对引物将所有供试菌株都扩增出一条１．５ｋｂ的带,经四种内切酶消化后发现：新疆地区来源的菌株     

慢生型大豆根瘤菌菌株GX201的脯氨酸脱氢酶基因(putA)的分子克隆

根据已报道的脯氨酸脱氢酶基因（ｐｕｔＡ）序列,通过ＰＣＲ方法,从慢生型大豆根瘤菌菌株ＧＸ２０１的总ＤＮＡ中扩增到—ＰＣＲ产物。序列分析表明,该ＰＣＲ产物的长度为４１８ｂｐ,与已报道的ｐｕｔＡ基因具有９３．５％的同源性。以广谱寄主范围质粒ｐＬＡＦＲ３为载体,在大肠杆菌ＤＨ５α中构建了ＧＸ２０１的基因文库,并以该ＰＣＲ产物为探针,从基因文库中筛选到一重组质粒ｐＧＸＮ３００。     

不同保藏年代的大豆根瘤菌冻干菌种的生物学活性研究

对实验室保藏的4～25年的冷冻干燥管大豆根瘤菌菌种进行了生物学活性测定。结果表明,供试4种大豆根瘤菌都有结瘤能力和固氮能力,它们之间的单株结瘤数和固氮酶活没有显著差异。同时证明冷冻干燥法是保藏根瘤菌的良好方法。     

PCR技术在快生型大豆根瘤菌菌株鉴别上的应用

以基因外重复的回文因子（ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｅｘｔｒａｇｅｎｉｃｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ，ＲＥＰ）和肠杆菌基因间重复一致序列（ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅｉｎｔｅｒｇｅｎｉｃｃｏｎｓｅｎｓｕｓ，ＥＲＩＣ）的碱基顺序设计出的引物为引物，用ＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术分别扩增了８株快生型大豆根瘤菌（Ｓｉｎｏｒｈｉｚｏｂｉｕｍ）的总ＤＮＡ，得出了具有菌株特异性的扩增产物电泳图谱，称ＲＥＰ－ＥＲＩＣＰＣＲ指纹图谱，将所得图谱进行性状编码后，用计算机数值分类系统进行平均连锁聚类分析，得出这８个菌株的聚类树状图。这一聚类结果与用其它方法聚类结果基本一致，说明ＲＥＰ－ＥＲＩＣＰＣＲ是一种鉴别快生型大豆根瘤菌菌株的经济、快速而又可靠的新方法。     

两株发光酶基因标记的重组大豆根瘤菌在土壤缩影中的存活研究

研究了发光酶基因 (luxAB)标记的重组费氏中华根瘤菌HN0 1DL、大豆慢生根瘤菌TA113QD与其出发菌株HN0 1、TA11在灭菌和未灭菌土缩影中的存活动态。结果表明 :HN0 1DL和TA113QD在灭菌土缩影和未灭菌土缩影中的存活动态特征显著不同 :标记菌株在灭菌土缩影中的早期存活数量一般有所下降后而保持相对稳定的较高存活水平 ,而在未灭菌土缩影中其存活数量在整个跟踪过程中持续下降至约 4 5logcfug- 1 土。在本实验中未发现供试标记重组菌株和出发菌株在土壤缩影中的存活性存在显著差异     

根瘤菌与大豆在不同类型土壤中的生态适应性研究

结合黑龙江省大豆主产区的主要土壤类型和大豆主栽品种,采用盆栽试验分别在黑土和草甸土中对大豆品种V1和V4接种根瘤菌株R2、R5和R7,筛选与之相匹配的根瘤菌株,得到根瘤菌株、大豆品种和土壤类型三者最佳组合R2V1S1、R2V4S1、R2V1S2、R2V4S2,为获得优良大豆根瘤菌接种剂菌种提供理论基础;种植大豆可以增强土壤肥力.大豆收获后对两种土壤进行基础肥力测定得出:黑土和草甸土中有机质的含量分别较播种前增加了7.28%和10.15%,碱解氮含量较播种前增加17.44%和16.29%.