泡桐丛枝病类菌原体(MLO)的抽提及其抗血清的制备

<正> 泡桐丛枝病是我国重要的林木病害。病原可通过嫁接传染和昆虫介体传染,将泡桐丛枝病病枝作超薄切片,电镜观察,发现病株的新梢和叶柄的皮部组织中存在大量的类菌原体。但是泡桐丛枝病与其它植物类菌原体病一样,病原物至今未能分离培养成功,病原的研究尚在电镜研究阶段。为了进一步研究泡桐丛枝病病原类菌原体的性质,我们采用抽提的方法获得数量较多,纯度较好的泡桐丛枝病的病原类菌原体,并用病原抽提物制备成功泡桐丛枝病的抗血清。     

PCR检测树木菌原体的研究

按莱氏无胆甾原体和ＭＬＯ的核糖体蛋白基因序列的保守区域，合成一对寡核苷酸引物，用ＣＴＡＢ法直接提取田间发病的桑萎缩和泡桐丛枝病树皮层的ＤＮＡ，以健康树作平行对照。结果用ＰＣＲ成功地从病树ＤＮＡ模板中扩增出１．２６ｋｂ左右的产物，而对照样品均未出带，表明此项技术可以检测ＭＬＯ，并用于研究其分子系统学关系。     

PCR检测树木菌原体的研究

按菜氏无胆甾原体和ＭＬＯ的核糖体蛋白基因序列的保守区域，合成一对寡核苷酸引物，用ＣＴＡＢ法直接提取田间发病的桑萎缩和泡桐丛枝病树皮层的ＤＮＡ，以健康树作平行对照，结果用ＰＣＲ成功地从病树ＤＮＡ模板中扩增出１．２６ｋｂ左右的产物，而对照样品均未出带，表明此项技术可以检测ＭＬＯ，并用于研究其分子系统学关系。     

泡桐丛枝病病树中的类菌原体与病毒

泡桐丛枝病是常见的泡桐严重病害。1967年以来,国内外已有在泡桐丛枝病病树中发现类菌原体的报道。近来,又有泡桐丛枝病病树中发现病毒病原的报道。本文介绍我们对泡桐丛枝病病原的进一步研究结果。     

泡桐丛枝病研究新进展

介绍了近年来泡桐丛枝病研究取得的一些进展,主要包括病原类菌原体(MLO)的检测和鉴定、病原致病机理、病原在树体内的分布和季节变动规律、寄主抗病性鉴定、治疗药剂的筛选等方面的最新研究结果和动向。并且根据新提出的泡桐丛枝病原MLO浸染循环模式,探讨了我国发生泡桐丛枝病流行的关键因子,以及今后防治的策略问题。     

温度处理和茎尖培养结合脱除泡桐丛枝病类菌原体（MLO）

将患有丛枝病的泡桐组培苗进行温度处理，结合茎尖培养用来脱除病原ＭＬＯ。结果表明，在４５℃下，病茎段２４—４８小时内脱水枯死；在４０℃下３周内病苗黄化枯萎；但在３０℃和２５℃处理的茎段萌发新枝条仍表现典型丛枝症状。而在３５℃下处理的茎段，１周后，新生长茎叶外观恢复正常，继续处理至８０天，植株仍能正常生长。组织经ＤＡＰＩ染色后荧光显微镜检查显示出在３５－４０℃下处理的病苗体内ＭＬＯ４周之内的变化和降解情况。分别剪取３５℃下处理２９、３３、５５和８０天的组培苗０．５ｃｍ的茎尖，转入ＭＳ培养基或改良的ＭＳ培养基上，在２５℃下培养，长成的组培苗一直生长正常。荧光显微镜和电镜检察结果均显示病原ＭＬＯ已被脱除。     

间接免疫荧光显微术检测泡桐丛枝病原MLO的研究

以感染类菌原体ＭＬＯ的泡桐组培苗为病原繁殖材料，采用差速离心和Ｐｅｒｃｏｌｌ不连续密度梯度离心来提纯ＭＬＯ作为免疫抗原制备兔抗血清。抗血清经健康汁液吸收后，作为第一抗体，用异硫代氰酸荧光素ＦＩＦＣ标记的羊抗兔免疫球蛋白作为第二抗体，进行间接免疫荧光显微镜检查染病组织中的ＭＬＯ特异性荧光。经与ＤＡＰＩ染色技术比较，找出了适宜的徒手切片和减少非特异性反应的途径。此技术具有灵敏度高、特异性强和测定简便等特点。适用于ＭＬＯ组织定位、组培苗脱毒效果评估、病原株系鉴定和病害检疫等。     

南洋楹丛枝病病原的研究

南洋楹丛枝病的病原为类菌原体（ＭＬＯ），存在筛管细胞内，ＭＬＯ形态多为圆形、椭圆形，乃至不规则形。大小直径为１２０—５００ｕｍ，单位膜厚度６．５—８．０ｎｍ。病组织经Ｄｉｅｎｃｅ’ｓ液染色后，筛管细胞不规则地染成深蓝色，健康组织不着色。病株经四环素或土霉素处理后，效果较为明显，症状减退或消失。     

泡桐丛枝病传毒昆虫研究(Ⅰ)

<正> 泡桐丛枝病是一种发生普遍为害严重的传染性病害。国内外皆证实由类菌质体(MLO)病原引起。开展泡桐丛枝病传毒昆虫试验是解决丛枝病传播途径及病害消长规律的重要环节,有助于生产上采取有效的防治措施。南朝鲜罗瑢俊等证实,烟草盲蝽传播丛枝病,日本进行追踪试验未成功;日本盐泽宏康等证实茶翅蝽传播丛枝病。我们自1975年研究泡桐丛枝病病原及防治时,对泡桐上刺吸式口器害虫做了系统调查,并进行了昆虫接种试验。本材料为在北京虫传试验初步结果,河南、安徽、山东等各协作点1981年扩大试验材料不包括在内。     

类菌原体的侵入对泡桐组织和细胞的影响

通过类菌原体ＭＬＯ侵入泡桐筛管，引起寄主细胞变化的观察和对细菌差别透性的分析，病健组织结构的观察，研究了ＭＬＯ侵入泡桐后地寄主和细胞的影响，结果表明，ＭＬＯ的侵入使筛管细胞产生胶胝质，胼胝质的聚集堵塞了筛板孔和由胞间连丝连接筛管与相邻细胞的通道，使得皮部细胞的判别透性增大，木质部的差别透性减小，形成层相对厚度变薄。     

泡桐丛枝病的媒介昆虫研究(1)——茶翅蝽传毒试验

研究泡桐丛枝病的媒介昆虫,有助于选择有效防治措施和进一步开展对病原及发病规律的研究。关于泡桐丛枝病媒介昆虫传毒试验,目前国内尚无报道。日人盐(氵尺)宏康曾用桔茶翅青蝽(plautia stali scotl)和另一种蝽象(Halyomorpha mista uhler)作接种试验,后者可使泡桐实生苗发病,但关于虫体内是否存在类菌原体,未作报道。我们自1978年开展泡桐丛枝病病原研究,同时进行了媒介昆虫的传毒试验。现将试验情况简报如     

泡桐组培脱毒苗田间育苗、造林及防治丛枝病效果的研究

泡桐组培脱毒苗田间育苗、造林及防治丛枝病效果的研究孔德广（河南省西华县林业局４６６６００）陈桂华袁新华（西华县森林病虫害防治检疫站）泡桐丛枝病是目前泡桐生产上一大难题。该病能引起泡桐属植物普遍发病,使整株或部分枝条表现病状。其病原为植物菌原体,侵染...     

施磷肥防治泡桐丛枝病试验

泡桐丛枝病是泡桐的严重病害,其病原为类菌质体(MLO)。近几年,国内有人测定分析,发现泡桐丛枝病的感病指数与土壤磷钾比有关。据我们试验,也发现幼龄期泡桐追施磷肥,很少发病。从1982年开始,我们对农桐间作和“四旁”的泡桐追施鸡粪,泡桐丛枝病的治愈率达90％。为了调整土壤的磷钾比,防治泡桐丛枝病,自1984年9月至1987年9月,在芝灵乡东卜头村兰考泡桐林内追施钙镁磷肥、鸡粪进     

泡桐丛枝病人工修除病枝研究初报

研究表明，泡桐丛枝病对中龄泡桐的胸径生长没有显著影响；人工修除病枝对泡桐丛枝病的防治效果不明显，现阶段不宜提倡修枝法防治泡桐丛枝病。     

注射传播泡桐丛枝病类菌原体的初步研究

以泡桐丛枝病类菌原体的敏感指示植物长春花苗为材料,用叶柄注射法注入感病泡桐叶汁液进行接种试验,结果表明,有1/4供试植株感病,其症状与泡桐丛枝病相一致,将感病植株叶脉切片镜检,发现有类菌原体,其形态、大小及结构,均与泡桐丛枝病类菌原体相同。为该病病原的传播及回接提供了一条简便的途径。     

泡桐丛核病病原及传毒途径的研究

本文研究了泡桐丛枝病病原和传毒途径。结果表明:类菌原体多为圆形或椭圆形,直径180～800mμ。多存在于病丛枝韧皮部筛管细胞内。繁殖方式分芽殖和两两分裂两种。种根和茶翅蝽、小绿叶蝉是泡桐丛枝病的传毒介体。种子不传毒,嫁接能够传毒。     

泡桐丛枝病传病昆虫研究(Ⅰ) 茶翅蝽传病试验及电镜观察

泡桐丛枝病传病昆虫试验,是深入开展病原、发病规律及防治措施研究的关键.我们自1978年开展了泡桐丛枝病病原等项研究时,对泡桐树上刺吸式口器害虫作了全面调查,并以茶翅蝽(Halyomorpha halys(Stal))等6种昆虫作了传病试验.本文报道了我们1980—1981年对茶翅蝽传病试验和电镜观察结果.其他虫种的传病试验,尚在进行中.     

泡桐对丛枝病原MLO的抗性研究*

本试验通过试验林自然发病调查、病根苗抗病性测定及ＤＡＰＩ染色等方法，对不同无性系及杂交组合的泡桐试材抗病性进行了评估。结果表明，５－７年生泡桐自然感染ＭＬＯ后的地面部分发病现象可归纳为四种类型；丛枝型（ＷＢ）、黄化型（Ｙ）、丛枝黄化型（ＷＢ＋Ｙ）和丛枝花变叶型（ＷＢ＋Ｐ）。外部发病差异与其韧皮部筛管中ＭＬＯ的含量有直接联系。一般情况下，ＭＬＯ的浓度高低依次为花变叶部位、丛枝部位、黄化部位、无症或健     

泡桐丛枝病综合防治技术介绍

泡桐丛枝病是泡桐病害中最重要的病害之一。目前该病已严重威胁着我省泡桐生产,直接影响到群众发展泡桐的积极性。对丛枝病的防治,国内外虽进行了多年研究,但取效甚微。为了把我省泡桐丛枝病的危害控制在最低限度,特根据省内外的防治经验及我们在1982～1985年对全省泡桐丛枝病的调查和进行综合防治的初步效果,提出泡桐丛枝病综合防治技术如下,供泡桐适栽区在防治丛枝病中参考。1.严格实行种苗检疫泡桐种根、苗木的调运与繁殖是传播丛枝病的重要途径,因此,严格实行种苗检     

泡桐种源抗丛枝病性状的遗传变异

泡桐丛枝病是影响泡桐生长的一种主要病害，种源试验表明在毛泡桐种源中，除甘肃平凉未见发病以外，其它种源均有病害发生。江苏南京、湖北十堰、黄冈、陕西商县和辽宁大连5个种源发病较重，病情指数超过30％；白花泡桐丛枝病发病率较低，自然分布区南部的种源很少见到丛枝病发生，分布区北部与毛泡桐分布区有重叠的种源，丛枝病发病相对较重。毛泡桐起源靠西的种源发病较轻，随着经度的增加，丛枝病发病有增大趋势；白花泡桐发病与种源经度无关，而与纬度相关明显，呈现出纬度越高，发病率越低，病情指数越小的趋势。泡桐品种间丛枝病发病率和病情指数差异明显，通过品种选择可以获得抗病优良品种。