基于18S rDNA序列的涡虫纲三肠目分子系统发育研究

采用18S rRNA对我国常见的4种三肠目涡虫的18S rDNA基因进行序列测定和分析,共获得三肠目2科3属4种的序列,同时结合GenBank中的三肠目18S rDNA序列(22条),以其姐妹群原序列目中的Archimonocelis crucifer为外群,采用MEGA3.0、PHYLIP、PAUP 4.0等分子生物学软件分别构建NJ树、ME树、MP树和ML树,分析三肠目的系统发育关系。结果表明,不同构树方法所得系统树的拓扑结构基本一致。     

中国麝科动物的种类、分布、价值及其保护对策

麝(Moschus moschiferus Linnaeus)属偶蹄目(Ar-tiodactyla)麝科(Moschidae)麝属(Moschus)珍贵的野生药用资源动物,又名香獐、獐子、山驴、林獐、麝鹿等.     

提高哺乳期仔麝成活率的八项措施

<正>麝又名香獐、麝鹿,属偶蹄目(Aritiodactyla)麝科(Moschidae)麝属(Moschus),是东亚特产种,属国家一级保护动物。因雄麝分泌的外激素——麝香是名贵的中药材和香料而成为具有较高经济利用价值的物种。麝香为295种中成药的必需原料之一,是传统中医药     

菜粉蝶线粒体基因组序列测定与分析

测定了菜粉蝶(Pieris rapae)的线粒体基因组序列,分析了菜粉蝶线粒体基因组的结构特征。此外,结合GenBank已经公布的鳞翅目昆虫的线粒体基因组序列并采取最大似然法和贝叶斯法构建系统发育树,分析了粉蝶科属间的系统发育关系。菜粉蝶(P.rapae)线粒体基因组长度为15 106 bp (GenBank登录号为MW448362),包括22个tRNA基因、13个蛋白质编码基因、2个rRNA基因和一段控制区。菜粉蝶线粒体基因组具有较高的A+T含量(79.0%),其中13个蛋白质编码基因中UUA的相对密码子使用频率最高(2.91)。除trnS1之外,21个tRNA基因的二级结构皆是典型的三叶草结构。粉蝶科属间系统发育结果显示:确定小粉蝶属(Leptidea)为单系群,位于系统发育树的基部,分化较早;襟粉蝶属(Anthocharis)和鹤顶粉蝶属(Hebomoia)互为姐妹群;粉蝶属(Pieris)和飞龙粉蝶属(Talbotia)互为姐妹群,所构成的类群与云粉蝶属(Pontia)形成姐妹群;斑粉蝶属(Delias)与由绢粉蝶属(Aporia)和妹粉蝶属(Mesapia)构成的一支类群形成姐妹群,尖粉蝶属Appias单独成一支;迁粉蝶属(Catopsilia)和豆粉蝶属(Colias)聚为一支,与钩粉蝶属(Gonepteryx)形成姐妹群关系,黄粉蝶属(Eurema)单独成一支。     

利用16S rRNA基因克隆文库技术分析 德昌水牛瘤胃产甲烷菌的多样性

选取3头5岁左右的健康雌性德昌水牛作为试验动物,采用机械破壁法提取瘤胃内容物总DNA,用产甲烷菌特异性引物Met86F/Met1340R扩增16S rRNA基因,构建16S rRNA基因克隆文库,分析德昌水牛瘤胃产甲烷菌区系组成。结果表明:试验共获得99个16S rRNA基因序列,RDP分析表明94.2%的序列为甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)16S rRNA序列,按照97%的相似性划分为19个分类操作单元,其中96个序列(17个OTUs)占总序列的97.0%,与已知细菌的16S rRNA序列的相似性≥97%;3个序列(2个OTUs)占总序列的3.0%,与已知细菌16S rRNA序列的相似性为90%~97%;系统发育树分析表明,SGMT簇序列和RO簇序列所占总序列的比例分别为75.8%、1.0%,部分序列与Methanobrevibacter中任何已知相似序列都相隔较远,它们可能代表Methanobrevibacter中新的种。以上结果表明,德昌水牛瘤胃产甲烷菌以Methanobrevibacter产甲烷菌为优势菌群,其中有许多未培养的产甲烷菌需进一步分离培养,并对其功能进行分析。     

蝎蝽次目线粒体基因组22个tRNA基因的比较研究(半翅目:异翅亚目)

[目的]本研究旨在对蝎蝽次目11科线粒体基因组中22个tRNA基因的序列特征、遗传距离、同源基因相同核苷酸百分比和二级结构进行比较研究,同时基于22个tRNA序列构建蝎蝽次目的系统发育树。[方法]通过GenBank获得蝎蝽次目所有12个代表种的tRNA序列,在MEGA 6.0中计算tRNA基因序列特征和遗传距离,同源基因相同核苷酸百分比在BioEdit 7.1中进行,tRNA二级结构在RNA structure 5.8中构建。在RAxML 8.2.8和Mrbayes 3.2.5中构建系统发育树。[结果]结果显示蝎蝽次目11科核苷酸碱基组成(A+T)%平均含量为76.41%,碱基A和T的含量均高于G和C,其中多数种呈现A高于T,所有种呈现G高于C。蝎蝽次目11科间的遗传距离在0.13～0.26之间。核苷酸保守性较高的tRNA-L2、tRNA-T和tRNA-M基因均位于线粒体基因组的J链,核苷酸保守性较低的tRNA-V和tRNA-F基因均位于线粒体基因组的N链。蝎蝽次目11科内tRNA二级结构中氨基酸接受茎表现为较高的保守性,而环中除了反密码子环相对保守外,其余环都有不同程度的碱基变异。系统发育结果显示固蝽总科、仰泳蝽总科和划蝽总科均为单系,其中固蝽总科和仰泳蝽总科为姐妹群关系,其余总科的单系性没有得到很好的解析,可能与tRNA基因序列能够提供的有效系统发育信号较少有关。[结论]本研究补充了tRNA在蝎蝽次目研究中的不足,揭示了tRNA基因及其二级结构在比较线粒体基因组学研究中的重要性。     

暗纹东方鲀线粒体DNA16S rRNA基因克隆、测序与在分子系统发育分析中的应用

以暗纹东方鲀（Takifugu fasciatus）肝脏线粒体DNA为模板,按照红鳍东方鲀线粒体DNA序列设计合成特异引物进行PCR扩增,获得了暗纹东方鲀线粒体DNA 16S rRNA基因（1667bp）及3′端上游的tRNALeu基因（73bp）的全序列。16S rRNA碱基组成分别为：胸腺嘧啶（T）22．1％,胞嘧啶（C）23．6％,腺瞟呤（A）35．2％,鸟嘌呤（G）19．0％。运用DNA分析软件对暗纹东方鲀与GenBank中鲀形目其他23种鱼类的mtDNA 16S rRNA序列进行核苷酸同源性比较分析,分别在鲀形目和东方鲀属水平上利用多种鱼类DNA 16S rRNA序列构建分子系统树。结果显示,同目不同科间的16S rRNA序列核苷酸相似性在73．6％～87．4％之间,同属间的核苷酸相似性高达约99．0％。在属间、科级、亚目级水平上,利用较长的16S rRNA序列构建的NJ树和MP树在拓扑图总体趋势相似,各枝的支持率较高。而在东方鲀属内中选取同源性较高的16S rRNA部分序列构建分子系统树拓扑结构虽一致,但各枝的支持率不太高。因此认为,16S rRNA基因较适合于研究鲀形目鱼类中属间、不同种间以及分化较早的种间、科级、亚目级的系统发育分析。本研究结果有助于进一步利用线粒体基因研究分析鲀形目鱼类系统进化关系。     

亚洲玉米螟核糖体18S rRNA基因的序列分析及分子系统学研究

从鳞翅目亚洲玉米螟(Ostriniafunacalis(Guen6e))3龄幼虫提取基因组DNA.通过PCR扩增和测序,获得其核糖体小亚基18S rRNA基因(18S rDNA)的序列,利用ClustalW与六足总纲中22个目(纲)昆虫的18S rRNA基因序列进行多重联配.结果表明.昆虫18S rRNA有4段序列较为保守,其中第2区段最为保守.分别用全长序列和第2保守区段构建分子系统发育树,结果显示:保守区段构建的系统发育关系比较符合传统分类,所列各目(纲)中毛翅目与鳞翅目亲缘关系最近,昆虫纲中的衣鱼目、蜉蝣目、蜻蜓目与弹尾纲、双尾纲、原尾纲距离较近,属于比较古老的昆虫类群.     

基于线粒体基因对直翅目昆虫系统发育学的研究

简要概述了线粒体基因组的结构和特点,同时基于线粒体基因组中的13个蛋白编码基因,选螳螂目、蜚蠊目、等翅目及螳脩目的5个种为外群,对直翅目34个种进行系统发育学研究.结果表明直翅目与外群分开,形成单系群.直翅目内部形成螽亚目与蝗亚目2个单系群.在螽亚目内部形成螽次亚目与蟀次亚目2个分支,且驼螽总科与螽斯总科形成姐妹群,但...     

蝽科线粒体基因组tRNA和rRNA基因的比较及应用(半翅目：蝽总科)

对蝽科4亚科线粒体基因组中22个tRNA和2个rRNA基因的序列特征、遗传距离和二级结构进行比较研究,采用贝叶斯法分别对这两个数据集构建了系统发育树.结果表明,蝽科26个物种的22个tRNA基因碱基组成中,多数种表现AT正偏斜,所有种表现GC正偏斜;2个rRNA基因碱基组成中所有种均表现AT负偏斜和GC正偏斜.遗传距离结果表明：4亚科间舌蝽亚科和蝽亚科亲缘关系最近,益蝽亚科和短喙蝽亚科亲缘关系最远.蝽科昆虫tRNA比rRNA基因的二级结构保守.系统发育结果均表明短喙蝽亚科和益蝽亚科为单系群,蝽亚科和舌蝽亚科均未形成单系群.因此,tRNA和rRNA基因可用于蝽科昆虫的系统发育研究.     

雌性圈养马麝行为的初步研究

为了解雌性圈养马麝Moschus sifanicus的行为特征，于2002—2003年在甘肃省兴隆山麝场采用焦点取样、扫描取样和连续记录结合的方法，对雌性马麝在非交配季节及交配季节的行为进行取样和比较分析。研究结果表明，相对于非交配季节，雌麝在交配季节的静卧频次较少，但差异不显著，站立凝视、环境探究、冲突行为和运动，显著或极显著增加，而摄食、反刍行为极显著减少，亲和行为下降，但差异不显著。此外，在繁殖交配季节，雌麝有蹭尾行为发生。雌麝季节间的行为差异同它们繁殖策略和时间、能量投资的调整有关。     

林麝毛发DNA的提取及系统发育分析

针对林麝及麝属动物系统分类存在较大争议的问题,采用分子标记方法,分析林麝的系统发育。利用非损伤取样方法,从秦岭林麝的毛发样品中提取得到线粒体DNACytb基因的部分序列,并对其进行分析。结果表明,林麝、原麝、马麝、喜马拉雅麝、黑麝是5种独立的种,林麝与原麝的亲缘关系最近。秦岭林麝种群的遗传多样性较低,单倍型多样度(Hd)为0.558,核苷酸多样度(Pi)为0.015 42。可弥补现有形态分类研究的不足,得到更有说服力的分析结果。     

圈养林麝泌香期的行为多样性及与麝香分泌的关系

行为多样性可综合量化动物行为特征。根据林麝Moschus berezovskii摄食量和生理反应,泌香期划分为不同时期。为阐明圈养林麝泌香期行为多样性与泌香量的关系,2016年5月1日至7月31日,综合采用焦点取样和所有事件记录法,对四川马尔康林麝繁育中心的57头雄性林麝进行了行为取样和记录,计算了行为多样性指数,并根据年龄将林麝分为亚成体、成体和老年麝,结合个体的摄食量计测,利用单因素方差分析和相关系数法,分析了林麝各泌香时期的行为多样性及与年龄和麝香分泌量的关系。结果表明:马尔康圈养林麝亚成体雄麝麝香分泌前的行为多样性指数（n=38）显著高于老年麝（n=14,P < 0.05）,后者与成体麝行为多样性指数（n=7）间无显著差异（P>0.05）;泌香后期老年麝行为多样性指数（n=49）显著低于亚成体（n=84,P < 0.05）,并极显著地低于成体林麝（n=73,P < 0.01）。麝香分泌不同阶段的行为多样性与其泌香量间的相关不显著（r=-0.016,n=57,P>0.05）。老年林麝的行为多样性指数在麝香分泌前期（n=14）及后期（n=49）均显著低于同期的亚成体行为多样性（n=38,n=84,P < 0.05）,2个时期行为多样性居中个体的麝香分泌（n=4,n=28）相对更多;麝在泌香中期的行为多样性（n=71）随年龄增加呈攀升趋势,而且行为多样性低的个体泌香量（n=3）更高。圈养林麝泌香期的行为多样性可作为其泌香量的预测指标,可应用于麝类动物驯养及麝香生产实践。     

陕西凤县林麝生境破碎化及其景观指数评估

应用遥感和地理信息系统技术,从大尺度上分析陕西凤县林麝Moschus berezovskii生境相关因子的重要性。通过对景观连接度进行模糊相对赋值,建立景观连接度评价模型,分析该地区林麝生境的景观连接度水平,评价生境的适宜性,并组建林麝生境模型。结果表明：在被研究的陕西西南部山区3 187 km2面积中,林麝最适宜生境的总面积仅有168 km2,占研究地区的5.28%,且在空间分布上处于极度破碎化状态。从景观指数上看,最适宜生境的斑块面积小,形状狭长复杂,呈孤立分布状态,对林麝的繁衍十分不利。提出了相应的生境恢复建议。     

PCR仪法从林麝毛发中提取基因组DNA

采用PCR仪法从林麝(Moschus berezovskii)毛发中提取基因组DNA,并与酚/氯仿法进行比较.结果表明,采用PCR仪法提取所得的DNA浓度高、纯度好.以提取所得的DNA为模板扩增林麝雄性激素受体基因外显子1,获得的PCR产物务带清晰、位置正确.PCR仅法与酚/氯仿法相比操作简单,提取所得的DNA质量较高,值得推广.     

发情周期圈养雌性林麝粪样孕酮的变化

本试验运用非损伤的取样方法,结合行为观察,通过酶联免疫法对雌性成年圈养林麝在分娩以后发情期粪便中的孕酮进行了测定,在此期间每2天采集粪样1次。结果显示,用酶联免疫法对林麝粪样中孕酮含量的分析来区别其发情周期中的黄体期和黄体间期是可行的。行为上的发情也是与其粪样中孕酮较低的含量相一致的。通过对5只林麝发情周期粪样孕酮含量的分析结果得出,林麝为季节性多发情动物,平均发情周期（n=10）是21.94d±1.2d。     

甘肃兴隆山保护区圈养马麝行为模式的性间差异

用焦点取样、扫描取样和所有事件综合记录方法,对甘肃兴隆山麝场圈养马麝的卧息等行为型进行了取样记录,比较分析了雌雄个体在非交配季节（8-10月）和交配季节（11月-翌年1月）行为特征和表达模式的性间差异.结果表明：由于雌麝在非交配季节正处于产后恢复期和哺乳期,其能量耗损和育幼投资相对增加,警戒性增强,其站立凝视及摄食等行为型的发生持续时间相对雄麝较多,但差异不显著（p〉0.05）,而雄麝为补充麝香分泌期的能量消耗及为繁殖季节作能量储备,相对地展现较多卧息（p〈0.01）,而运动较少（p〉0.05）.在交配季节,雄麝卧息较少（p〉0.05）,而较多地展现冲突行为（p〈0.05）,站立凝视、运动和信息标记等行为也表达较多（p〉0.05）,雌麝表达较多的环境探究和尾阴探究行为收集环境信息和其他个体的性信息（p〉0.05）.作为一种性别特征性的气味标记,雄麝全年均有蹭尾行为的表达.研究发现：雌麝在交配季节也有蹭尾行为表达,但表达模式异于雄麝,持续时间也极显著地少于雄麝（p〈0.01）.     

驯养马麝麝香产量及其影响因素

【目的】分析圈养雄性马麝（Moschus sifanicus）的麝香生产,确定马麝个体来源、亲本来源、取香时间、年龄及饲养管理模式对其麝香平均产量的影响,为高生产力麝类驯养及发展可持续麝香供给提供参考。【方法】在甘肃兴隆山马麝繁育场进行人工取香,对取香马麝进行个体识别和数据收集,准确记录麝香产量（用吸水纸吸去表面浮液后的麝香重）。【结果】驯养雄麝的年平均麝香产量为（（7.90±0.17）g,n=732）,产香区间为0.00-34.20 g;雄麝来源影响其平均麝香产量,野捕雄麝的年均麝香产量（（8.76±0.27）g,n=272）显著高于驯养繁殖雄麝（（7.39±0.22）g,n=460）（P＜0.05）,但雄麝父母来源对其平均麝香产量的影响不显著（P＞0.05）,繁殖前取香和繁殖后取香的麝香产量也缺乏显著差异（P＞0.05）;受驯养管理模式的影响,马麝麝香产量的年度间差异显著（P＜0.05）;个体年龄影响其平均麝香产量（P＜0.05）,麝香产量的高峰年龄段为1.5-8.5岁。【结论】驯养雄性马麝的麝香产量与个体来源、年龄和饲养管理模式有关,父母来源和取香时间对麝香产量无显著效应（P＞0.05）。     

甘肃兴隆山圈养雌性马麝（Moschus sifanicus）发情次数、间情期及影响因素

 【目的】分析圈养雌性马麝（Moschus sifanicus）的发情交配时间格局,探查性经历、年龄、来源及繁殖成效等因素对发情交配的周期数、间情期的影响,为麝类成功驯养及异地保护提供参考。【方法】采用随机取样法和所有事件记录的行为取样方法,观察马麝的交配行为,准确记录发情交配的启动和结束时刻。【结果】兴隆山麝场圈养雌麝的间情期为（12.23±0.52）d（n=22）,平均动情次数为（1.88±0.13）次（n=22）。各年龄及年龄组雌麝的间情期无显著差异（P＞0.05）,但年龄极显著影响动情次数（P＜0.01）;首次参配雌麝的动情次数[（3.00±0.32）次,n=9]显著高于具多次交配经历的雌麝[（1.55±0.11）次,n=13]。雌麝的间情期和动情次数与雌麝的来源无关,野外捕获雌麝的间情期[（12.01±0.66）d,n=16]和动情次数[（1.95±0.15）次,n=16]与驯产雌麝[（12.83±0.75）d,n=6;（1.67±0.23）次,n=6]无显著差异。雌麝动情次数和间情期与上年的繁殖成效无直接关系,而与翌年繁殖成效有关,翌年繁殖成功的雌麝的动情次数[(1.71±0.16)次,n=7]和间情期[（10.13±2.24）d,n=3]显著地低于翌年空怀雌麝[动情次数：（2.20±0.18）次,n=7;间情期：（13.00±2.00）d,n=7]低。【结论】圈养雌性马麝的发情交配时间格局受圈群内个体间社会行为及环境因子的影响,雌麝年龄及性经历因素影响雌麝的发情,雌麝的间情期及动情次数与雌麝的来源无关;雌麝动情次数和间情期与上年繁殖成效无直接关系,而翌年繁殖成功雌麝的动情次数和间情期显著低于翌年空怀雌麝。     

林麝雌体粪便甲状腺激素的测定及其生物学意义

林麝饲养繁育承担着重建野生种群和保障麝香可持续利用的艰巨任务,然而其饲养种群长期受到健康状态不稳定和疾病高发的困扰,同时,受到濒危等级和试验样品的限制,迄今鲜有涉及林麝生理参数的文献。本研究于2014年7—8月分别采集陕西火烧店和四川米亚罗林麝饲养场的林麝粪样,采用酶联免疫法(ELISA)测定雌麝粪便中三碘甲腺原氨酸(T3)的含量,以探讨雌麝粪便T3值表达的生理状态及变化趋势。结果表明,陕西火烧店和四川米亚罗饲养场雌麝粪便T3在所研究的时段内不存在显著差异;两地雌麝粪便T3在3岁至5岁期间随着年龄的增长呈现逐渐上升的趋势,但在5岁之后随着年龄的增大而逐渐下降,这可能意味着雌麝在5岁左右达到生理盛期;雌麝粪便T3的聚类结果发现,不同年龄组均存在差异显著的3个类型,即生理代谢的低、中、高类型。利用粪便T3从能量代谢角度揭示雌麝的生理特性,可能有助于麝繁育群的组建、饲养管理及健康评判。