绵羊X染色体59578440位点多态分析及其与尾(臀)脂性状相关性研究

[目的]检测绵羊X染色体59578440位点在尾型极端差异的阿勒泰羊、湖羊和中国美利奴细毛羊群体中的多态性,并验证该位点是否可作为一个有效的分子标记应用于低脂绵羊新品种培育.[方法]采用PCR-RFLP方法进行SNP分型,并使用卡方检验的方法验证各基因型在群体中的Hardy-Weinberg平衡性.[结果]扩增出了含绵羊X染色体59578440位点SNP的296 bp片段,经AatⅡ核酸内切酶酶切分型后鉴定出了三种基因型(CC、TT和TC).C/T等位基因的比值显示阿勒泰羊群体中C等位基因属优势等位基因.[结论]X染色体59578440位点SNP可作为阿勒泰羊选育的一个实用性分子标记.     

绵羊Fsp27基因5'-UTR区碱基突变与 尾脂沉积能力的关联性

[目的]明确绵羊脂肪特异蛋白27基因(Fsp27)5'端非编码区(5'-UTR)g.16767527位点和g.16767779-16767780位点突变与其尾脂沉积能力的关联性,为低脂肪绵羊品种选育提供理想的分子标记,提高低脂肪绵羊品种改良选育效率.[方法]以5个不同尾脂沉积能力的绵羊品种为研究对象,包括脂尾型绵羊品种阿勒泰羊,短脂尾型绵羊品种小尾寒羊和湖羊,长瘦尾型绵羊品种中国美利奴细毛羊和萨福克羊,采用PCR-SSCP结合基因测序对绵羊Fsp27基因5'-UTR区碱基突变情况进行检测,并分析相关突变与绵羊尾脂沉积能力的关联性.[结果]绵羊Fsp27基因5'-UTR区g.16767527位点为C/A突变,在所检测的绵羊群体中均存在3种基因型(CC、CA和AA),但在不同尾脂沉积能力绵羊品种群体中的基因型频率存在明显差异:阿勒泰羊群体中以CC基因型为主,基因型频率为0.869;小尾寒羊和湖羊群体中以CA基因型为主,基因型频率分别为0.698和0.628;中国美利奴细毛羊和萨福克羊群体则以AA基因型为主,基因型频率分别为0.616和0.833.g.16767527位点的基因型分布在阿勒泰羊、小尾寒羊和湖羊群体中极显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(PHWE<0.01),在萨福克羊群体中显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态(PHWE<0.05).g.16767779-16767780位点为双碱基突变,对应为GG/GG、GG/TC和TC/TC基因型;在尾脂沉积能力强的阿勒泰羊、小尾寒羊和湖羊群体中,g.16767779-16767780位点以TC为优势等位基因,对应的等位基因频率分别为0.862、0.954和0.927;在尾脂沉积能力差的中国美利奴细毛羊和萨福克羊群体中则以GG等位基因为主,其等位基因频率分别为0.980和0.983.这2个位点的突变均对绵羊Fsp27基因5'-UTR区二级结构产生明显影响.[结论]绵羊Fsp27基因5'-UTR区g.16767527位点的C/A突变和g.16767779-16767780位点的GG/TC突变与其尾脂沉积能力密切相关,可作为分子标记应用于低脂肪绵羊品种的辅助选育.     

X染色体60149273位点在脂尾（臀）和瘦尾绵羊品种中的多态性及其基因定位

【目的】研究绵羊X染色体60149273位点在不同沉脂尾型绵羊品种中的多态性,为解析绵羊尾脂沉积性状的遗传机制提供基础数据。【方法】首先,采用PCR-SSCP分型方法检测X染色体60149273位点在不同脂尾类型绵羊品种的多态性,并借助PCR产物直接测序的方法确认各基因型相应序列,利用卡方检验的方法检测各基因型分布在不同品种中的平衡性。其次,利用生物信息方法将该SNP定位与绵羊androgen receptor（AR）,并使用电子克隆的方法克隆出绵羊AR全长编码序列。同时以阿勒泰羊臀部脂肪RNA为材料,采用RT-PCR的方克隆绵羊AR第3—8外显子序列,利用生物信息学方法分析序列同源性以及序列的物种进化保守性。【结果】①PCR-SSCP结果显示,在脂尾（臀）型绵羊品种阿勒泰羊和湖羊群体中X染色体60149273位点未检出多态性,GG基因型占100%;而瘦尾（臀）型绵羊品种中国美利奴和萨福克羊群体中则出现了多态性,GG基因型分别下降至10%和21%。②利用比较基因组学首次电子克隆出该SNP所属基因AR的全长编码区,并从阿勒泰羊臀脂mRNA中成功扩增羊源AR第3—8外显子片段,测序结果与电子克隆序列完全一致。③物种同源性比对进一步显示,AR在哺乳类动物中高度保守,哺乳动物各物种间同源性高达90%;进化树分析结果显示,牛、绵羊、海豚和猪等哺乳动物亲缘较近。【结论】首次发现绵羊AR第3内含子一处SNP在脂尾（臀）与瘦尾绵羊品种中存在较大差异,该SNP将可作为一个分子标记运用于低脂绵羊新品种的培育,同时该SNP所属AR也可作为一个重要候选功能基因应用于绵羊尾（臀）脂沉积分子机制的相关研究。     

MTNR1A基因ExonⅡ T/C突变与绵羊季节性繁殖的关联性分析

【目的】分析MTNR1A基因ExonⅡ T/C突变与绵羊季节性繁殖性状的关联性,为深入研究MTNR1A基因在绵羊繁殖活动中的作用机制打下基础。【方法】以季节性繁殖的阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)及常年繁殖的湖羊和小尾寒羊为研究对象,采用PCR-SSCP及测序技术检测MTNR1A基因ExonⅡ T/C突变在4个绵羊品种群体中的分布情况,并分析其与绵羊季节性繁殖性状的关联性。【结果】MTNR1A基因ExonⅡ T/C突变致使MTNR1A蛋白的胞内无规卷曲结构域构象发生变化。在4个绵羊品种群体MTNR1A基因ExonⅡ处均可检测到T/C突变,其中阿勒泰羊和小尾寒羊中以TT基因型为主,T等位基因频率分别为C等位基因的3.4和11.2倍;在中国美利奴羊(军垦型)中则以TC基因型为主,TC基因型频率分别为TT和CC基因型的17.6和19.6倍;在湖羊中3种基因型的分布无明显差异。在阿勒泰羊群体中MTNR1A基因ExonⅡ T/C突变位点处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05),而在中国美利奴羊(军垦型)、湖羊和小尾寒羊群体中处于极度不平衡状态(P<0.01)。【结论】在季节性繁殖的阿勒泰羊和中国美利奴羊(军垦型)及常年繁殖的湖羊和小尾寒羊群体MTNR1A基因ExonⅡ处均可检测到T/C突变,但该突变与绵羊的季节性繁殖性状无关联。     

6个绵羊群体MC4R基因CRS-PCR多态性及其与湖羊、东湖杂交羊生长性状的关联分析

为了探讨黑素皮质素受体4(melanoeortin receptor-4,MC4R)基因在绵羊中的多态性以及多态位点对绵羊生长性状的影响,对湖羊MC4R基因进行扩增,测序后发现9个碱基置换,选择MC4R基因548位点处C/T的单碱基突变,建立CRSPCR-RFLP分析方法,并对6个绵羊群体(湖羊、东弗里生羊×湖羊(东湖杂交羊)、中国美利奴、Romney、中国美利奴×Romney和阿勒泰)共518个个体进行检测分析。结果表明:在阿勒泰、Romney、中国美利奴×Romney群体中仅检测到CC 1种基因型,在东湖杂交羊和中国美利奴的群体中检测到CC和CT 2种基因型,而在湖羊群体中检测到CC(0.865)、CT(0.126)和TT(0.009)3种基因型。湖羊群体CT基因型2月龄体质量显著高于TT基因型(P0.05),4月龄体长显著高于CC型(P0.05)和TT型(P0.01);东湖杂交羊群体中CT基因型的4月龄体高显著高于CC基因型(P0.05)。本研究初步表明6个绵羊群体中MC4R基因的CT基因型具有生长优势。     

6个绵羊群体MC4R基因CRS-PCR多态性及其与湖羊、东湖杂交羊生长性状的关联分析

为了探讨黑素皮质素受体4(melanoeortin receptor-4,MC4R)基因在绵羊中的多态性以及多态位点对绵羊生长性状的影响,对湖羊MC4R基因进行扩增,测序后发现9个碱基置换,选择MC4R基因548位点处C/T的单碱基突变,建立CRSPCR-RFLP分析方法,并对6个绵羊群体(湖羊、东弗里生羊×湖羊(东湖杂交羊)、中国美利奴、Romney、中国美利奴×Romney和阿勒泰)共518个个体进行检测分析。结果表明:在阿勒泰、Romney、中国美利奴×Romney群体中仅检测到CC 1种基因型,在东湖杂交羊和中国美利奴的群体中检测到CC和CT 2种基因型,而在湖羊群体中检测到CC(0.865)、CT(0.126)和TT(0.009)3种基因型。湖羊群体CT基因型2月龄体质量显著高于TT基因型(P0.05),4月龄体长显著高于CC型(P0.05)和TT型(P0.01);东湖杂交羊群体中CT基因型的4月龄体高显著高于CC基因型(P0.05)。本研究初步表明6个绵羊群体中MC4R基因的CT基因型具有生长优势。     

利用PCR-SacⅡ-RFLP技术检测绵羊IGFBP-3基因多态性的研究

[目的]将IGFBP-3基因作为候选基因,寻找与绵羊羊毛品质等经济性状相关的SNP位点.[方法]利用PCR-SSCP和DNA测序快速筛查SNP位点;在此基础上建立PCR-RFLP检测方法,分析该位点在不同品种绵羊中的基因型和等位基因分布情况;通过多重比较分析不同基因型与中国美利奴羊部分羊毛性状的关联性.[结果]以绵羊基因组DNA为模板扩增得到了249 bp的特异条带,PCR-SSCP及测序分析显示在该序列的140碱基处发生了G/T突变,导致SacⅡ酶切位点消失.经PCR-SacⅡ-RFLP检测,哈萨克羊和中国美利奴羊细毛羊得到三种基因型:TT(249 bp)、GG(139 bp/110 bp)和TG(249 bp/139 bp/110 bp);杜泊羊中出现GG和TG两种基因型;湖羊、小尾寒羊以及萨福克羊中只有GG一种基因型.关联性分析表明不同基因型与部分羊毛性状没有明显的相关性.[结论]在绵羊IGFBP-3基因嫩含子4区发现一个新的SNP位点,玻建立PCR-SacⅡ-RFLP检测方法;该位点不同等位基因和基因型在不同绵羊品种中的分布具有一定规律性;不同基因型与中国美利奴细毛羊部分羊毛性状中间没有明显的相关性.     

MTNR1A基因多态性与绵羊季节性繁殖的相关性分析

为研究MTNR1A基因多态性与绵羊季节性繁殖的关系,以季节性发情的阿勒泰羊和常年发情的湖羊为研究对象,分别随机选择2品种羊的基因组各50份混合构建DNA池,并以此为模板扩增绵羊MTNR1A基因5′侧翼序列、ExonⅠ及ExonⅡ,通过测序检测MTNR1A基因在阿勒泰羊和湖羊群体的突变。在对突变进行分析的基础上,于5′侧翼序列选择2处转录因子结合的突变位点,利用PCR-SSCP技术检测其在200只阿勒泰羊和210只湖羊中的多态性分布,并分析其与绵羊季节性繁殖性状的关联性。结果表明,MTNR1A基因5′侧翼序列、ExonⅠ及ExonⅡ在阿勒泰羊和湖羊群体中分别检测到18、1和9处突变,TF Search和Signal Scan分析显示,5′侧翼序列的18处突变中有4处分别处于转录因子TBP、GR、SP1和c-Myb的结合位点处,预测评分分别为98.5、95.2、97.6和94.9。ExonⅠ及ExonⅡ中检测到的10处突变中,有4处突变为错义突变,6处突变为同义突变,但均不在MTNR1A的跨膜区。PCR-SSCP检测结果显示,g.15143697位点的T/C突变在湖羊群体中以CC基因型为主,其基因型频率达到0.919,而在阿勒泰羊中以TT基因型为主,基因型频率为0.950,阿勒泰羊群体中T等位基因的比例为湖羊群体的550倍,推测该位点可能与绵羊的季节性发情有关。     

中国美利奴羊IGFBP-5基因外显子区的PCR-SSCP多态性分析

[目的]以IGFBP-5作为候选基因,寻找与绵羊生产性能有关的SNP位点.[方法]利用PCR-SSCP和DNA测序快速筛查SNP位点;分析该位点在中国美利奴羊中的基因型和等位基因分布情况;并通过多重比较分析不同基因型与中国美利奴羊部分生产性能的关联性.[结果与结论]在绵羊IGFBP-5基因外显子1区发现一个新的SNP位点(C136G),并建立了PCR-SSCP的基因分型方法.对212只中国美利奴羊的检测结果显示有CC、CG和GG 3种基因型,基因型频率分别为0.50、0.41和0.09,C等位基因频率为0.70,G等位基因频率为0.30.不同基因型与中国美利奴羊早期生长和羊毛生产性能具有一定的影响:GG基因型个体的初生重、剪毛后体重以及剪毛量显著高于CC基因型(P<0.05);CC基因型个体的毛丛长度明显长于CG基因型个体 (P<0.05).     

巴什拜羊群体双肌基因基因型检测

[目的]通过对巴什拜羊SNPCLPG的分子检测,期望发现CLPG基因型种羊,为今后选育肉用性状更优异的新品系奠定基础.[方法]绵羊的双肌臀(Callipyge,CLPG)基因表型为后臀肌肉增大近30;,是由位于绵羊18号染色体GTL2基因上游32.8 kb处1个A→G的单核苷酸多态性(SNP)标记(命名SNPCLPG)突变所产生的.为此,选择设计合成了1对引物,采用聚合酶链式反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)方法,以巴什拜羊作为研究样本,进行了SNPCLPG位点的PCR检测.[结果]获得了预期的扩增片段,并检测到了基因多态性,但未检测到CLPG基因型特征的SNPCLPG突变(A→G).[结论]被检测的巴什拜羊群体中该区域没有发现A→G的单核苷酸多态性标记突变.     

湖羊、小尾寒羊与肉用杜泊羊杂交试验

以引进优质杜泊绵羊为父本与湖羊和小尾寒羊进行杂交,湖羊和小尾寒羊母羊群采用激素诱导同期发情后,以杜泊绵羊鲜精进行人工授精。分析不同羊群受胎率、产羔率以及F1代杂交羔羊生长速度与体尺变化。结果表明 湖羊和小尾寒羊群体受胎率和产羔率没有显著差异（P﹥0.05） 杜湖杂交羊与湖羊初生重、1月龄、2月龄体重差异不显著,3月龄、6月龄、日增重差异极显著（P﹤0.01） 杜寒杂交羊与小尾寒羊初生重差异不显著,1月龄、2月龄、3月龄、6月龄、日增重差异极显著（P﹤0.01） 杜湖杂交羊与杜寒杂交羊初生重差异极显著（P﹤0.01）、1月龄、6月龄体重和日增重差异显著（P﹤0.05）,2月龄和3月龄体重差异不显著 湖羊与小尾寒羊初生重差异不显著,1月龄、6月龄体重和日增重差异显著（P﹤0.05）,2月龄、3月龄体重差异极显著（P﹤0.01）。初步杂交试验认为杜泊羊与湖羊或小尾寒羊杂交均可分别作为理想的父、母本组合,用于进一步培育优质肉用杂交绵羊新品系（种）研究。     

邦德羊改良甘肃高山细毛羊的效果

以邦德羊为父本、甘肃高山细毛羊为母本进行杂交改良试验,并对杂交F1代羔羊(简称邦甘细)的生长性能和屠宰性能进行分析。生长观测表明,邦甘细初生体质量、4月龄体质量、6月龄体质量和12月龄体质量分别比甘肃高山细毛羊纯繁组(简称甘高细)高14.14%、17.90%、28.17%和33.97%(P0.01)。4月龄前平均日增量、4~6月龄平均日增量、12月龄前平均日增量极显著高于甘高细(P0.01)。屠宰结果表明,邦甘细4月龄、6月龄和12月龄的胴体质量和屠宰率均高于甘高细,且各年龄段胴体质量差异极显著(P0.01)。说明,以邦德羊为父本对甘高细进行杂交改良的F1代羔羊的生产性能和屠宰性能显著提高,改良效果明显。     

退牧还草舍饲养羊管理与生物育肥实用技术

根据北方畜牧业的现状,结合近2年生物工程试验的实际情况,为了大力发展养羊业和提高其生产水平,必须合理利用与改良草地资源,建设规划围栏的人工草场,提高草地载畜量,改良羊种,提高蒙古羊品种的生产力。积极开展推广退牧还草和生物育肥实用技术的科学研究成果。加快推动内蒙古、黑龙江省畜牧业更大规模的发展进程。     

杜泊绵羊与小尾寒羊杂种优势利用研究

选杜寒F1、杜寒F2、杜寒F3、杜泊羊以及小尾寒羊（公母羔）并随机分组,研究探讨相同饲养条件对不同杂交种群生长发育和繁殖力的影响。结果表明：杜寒F1初生重公母羔平均为3．91kg,略低于父本杜泊羊（P〉0．05）;初生至断奶平均日增重318g,高于母本小尾寒羊（P〈0．01）。育肥期杜寒F1、杜寒F2和杜寒F3平均日增重分别比小尾寒羊提高40．99％、26．13％和22．52％（P〈0．01）;3个杂交代次间增重接近,依次是杜寒F1〉杜寒F2〉杜寒F3。杜寒F1母羊产羔率比杜泊羊提高40个百分点（P〈0．01）;多胎基因（FecB）检测结果和实际产羔情况基本一致（杜寒F1〉杜寒F2〉杜寒F3）。杜寒1～3代经产母羊体重、体高、体长、胸围指标均高于杜泊羊（P〉0．05）。杜寒F3体型外貌优于杜寒F2和杜寒F1,建议杜寒F1用于生产肥羔;可进一步探讨用带多胎基因的杜寒F3作父本,与杜寒F2实施横交,培育杜寒肉羊新品系。     

基于cytb基因探讨家绵羊和多角绵羊的系统发育

 【目的】研究中国家绵羊起源进化以及多角绵羊和普通家绵羊的亲缘关系。【方法】测定8个省区42个绵羊个体的细胞色素b基因全序列。【结果】本试验的绵羊个体可定义为40个单倍型,单倍型多样度为0.997±0.006,核苷酸多样度为0.793%。中国绵羊群体可分为4个支系(A、B、C 和D),其中支系D首次在中国绵羊群体中被检测到;支系B与支系C的差异最大,分化时间大约为595±150万年。多角绵羊与家绵羊聚在一起,而与野绵羊亲缘关系较远,分属于支系A、B和D。【结论】系统发育分析表明,中国绵羊有多个母系起源或经过多次驯化,未发现盘羊、东方盘羊和亚洲摩佛伦羊与绵羊母系祖先形成相关的分子证据。     

PMSG诱导新疆军垦细毛羊、哈萨克羊、湖羊同期发情的研究

为了取得良好的同期发情效果和排卵率以提高母羊受孕率,在准噶尔盆地南部山地用PMSG诱导了新疆军垦细毛羊、哈萨克羊、湖羊的同期发情,观察了3个品种羊的排卵情况,并统计了卵巢黄体的平均数目。试验结果表明,哈萨克羊同期发情率最高(90.6%),显著高于新疆军垦细毛羊(84.7%)和湖羊(83.12%)(P<0.05);哈萨克羊、新疆军垦细毛羊和湖羊的排卵率分别为94.28%、95.08%和98.46%,其中,哈萨克羊和新疆军垦细毛羊间差异不显著,而湖羊的排卵率显著高于哈萨克羊和新疆军垦细毛羊(P<0.05);哈萨克羊、新疆军垦细毛羊和湖羊卵巢上黄体生成的平均个数分别为1.192、1.233和3.172个。相比而言,地理环境和气候条件对不同品种母羊发情的影响较大,对排卵率的影响并不明显。     

育肥中后期杜泊羊湖羊杂交F1代公羊能量需要量参数

【目的】为杜湖杂交F1代公羊确定育肥中后期的能量需要量参数,为该品种绵羊能量这一营养指标提供理论依据。【方法】本试验采用比较屠宰法,将能量需要量解析为维持能量需要量和生长能量需要量,采用代谢能和净能两个指标体系进行测定。试验选用体重为35 kg左右的杜湖杂交F1代公羊42只,其中的30只试验羊用于比较屠宰试验,将试验羊随机分为自由采食组、低限饲组和高限饲组3个采食量水平,使其日增重分别达到350、150和0 g,分别在试验第1天（6只）、自由采食组羊体重分别达到43 kg（6只）和50 kg（18只）时分3批进行屠宰,以便得到试验羊的体能量沉积量。另外,12只羊用于消化代谢试验,同样按上述采食量水平随机分为3组,利用推荐公式对试验羊的甲烷产量和产热量进行预测,并以此计算得到代谢能摄入量分别10.69、11.99和12.33 MJ（每采食1 kg日粮的代谢能摄入量）。【结果】维持净能（net energy for maintenance,NEm）需要量为271.6 kJ•kg-0.75, 代谢能维持效率为0.66;维持代谢能（metabolizable energy for maintenance,MEm）需要量为413.7 kJ•kg-0.75;35-50 kg日增重100-350 g的生长净能需要量为0.81-3.12 MJ•d-1;35-50 kg日增重100-400 g的生长代谢能需要量为1.47-5.38 MJ•d-1,代谢能生长效率为0.55。【结论】较为系统地得到了35-50 kg杜湖杂交F1代公羊能量需要量指标,其中包括维持净能、维持代谢能、生长净能和生长代谢能,与国内外肉羊营养需要量的研究结果相近。     

羊育肥模式

长期以来,羊肉生产仍靠屠宰淘汰的老母羊和羯羊这一传统的方式提供,这种生产经营方式落后,生长周期长,生产水平低,商品率低,远远不能满足市场需求.随着养羊专业化和集约化程度的提高,羊肉生产特别是羔羊肉生产已引起人们的重视.近几年,通过实施“山区农场养羊管理模式研究”的项目,引进优良肉用品种陶赛特、萨福克公羊与低代细毛杂种羊及当地土种粗毛羊杂交,生产肥羔,推广和应用现代科技综合配套技术,如塑料暖棚养羊育肥技术,青贮微贮技术,不同育肥阶段羊只饲料科学配方及饲喂技术,同期发情,人工授精,羔羊早期断奶技术,疫病防治技术,羊群结构优化技术,高产优质饲草料栽培技术,对羊肉生产者,经营者科技培训等,缩短生产周期,消除季节性生产限制,突出羔羊肉生产,提高羊肉数量和品质,把养羊业生产提高到了一个新水平,并探索制定了羊的育肥模式.     

肉羊养殖现状及肉羊专家系统的开发与应用

介绍了国外及我国肉羊生产的现状、我国肉羊生产存在的不足和发展优势,提出研究和推广先进实用的肉羊综合配套技术等发展我国肉羊业的建议。结合我国肉羊业发展的实际,研究和开发了肉羊养殖专家决策咨询系统,介绍了系统的功能和使用方法。