葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量的影响因素

以葡萄的叶片、叶柄及茎段诱导的愈伤组织为试验材料,考察紫外线照射、硝酸银处理和杂菌污染对其愈伤组织中白藜芦醇含量的影响。结果表明:经硝酸银处理的愈伤组织中白藜芦醇含量随处理浓度的提高呈现先增加后减少的变化趋势,在浓度为10 mg/L时,白藜芦醇含量达到最大;经紫外线照射的愈伤组织中白藜芦醇含量随照射时间的延长先增加后减少,茎段与叶片经紫外线照射3 min后白藜芦醇的含量最高,而叶柄经紫外处理5 min后白藜芦醇的含量最高。染菌的愈伤组织中白藜芦醇含量也明显高于对照。因此,在所试验的范围内提高葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量,硝酸银的适宜浓度为10 mg/L,紫外线照射时间为3~5 min,另外杂菌感染也有助于葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量的提高。     

NaCl胁迫对葡萄愈伤组织中白藜芦醇含量及细胞膜保护酶活性的影响

以‘黑比诺’葡萄试管苗叶片诱导并继代1a的愈伤组织作为试验材料,接种后分别添加0、0.1、0.2、0.3、0.4mol·L-1的NaCl溶液,研究不同浓度NaCl对愈伤组织中白藜芦醇含量及细胞膜保护酶活性的影响.结果表明:随着NaCl浓度的升高,葡萄愈伤组织中白藜芦醇的含量逐渐升高,当NaCl浓度为0.3mol·L-1时白藜芦醇含量最高,达到80.76μg·g-1,此时SOD活性也达到最高,为53.7320U·g-1·min-1;较低浓度的NaCl有助于PPO与CAT活性的升高.偏相关分析结果表明,不同浓度NaCl处理下葡萄愈伤组织中白藜芦醇的含量均与CAT活性呈显著正相关,与SOD、PPO活性呈显著负相关;不同程度NaCl胁迫下,细胞膜保护酶间的相关性也出现相应变化.     

LED不同光质对葡萄愈伤组织及白藜芦醇合成的影响

以"黑比诺"葡萄叶片诱导的愈伤组织为材料,研究不同LED光质处理对葡萄愈伤组织生长及白藜芦醇合成的动态影响.结果表明:绿光最有利于葡萄愈伤组织的生长,但抑制白藜芦醇的合成;蓝光对愈伤组织生长无明显影响,但能明显促进白藜芦醇含量和产量的提高;红光不利于白藜芦醇的积累.在30d的培养周期内,第24d是较理想的继代及收获时间.蓝光LED不同光周期处理中,8h·d-1处理对白藜芦醇合成具有显著的抑制作用,其余光同期处理间没有明显差异.     

葡萄细胞培养生产白藜芦醇的研究

以巨峰和红地球葡萄的不同组织为试材,利用不同培养基对其愈伤组织进行诱导,测定愈伤组织中的白藜芦醇含量.结果表明:在B5基本培养基附加6 mg/L NAA和0.6 mg/L 6-BA的培养条件下,巨峰葡萄果皮愈伤组织的诱导率最高,达87%.愈伤组织中白藜芦醇的含量均高于其对应外植体中的含量,其中巨峰葡萄果皮愈伤组织中的白藜芦醇含量最高,达11.184 μg/g.经6次继代培养可诱导出生长势强、白藜芦醇含量为14.296 μg/g的巨峰葡萄优良愈伤组织.     

光照和氮源对朱砂根愈伤组织生长及岩白菜素含量的影响

通过调节光照条件及培养基中铵态氮与硝态氮的比例来研究光照和氮源对朱砂根愈伤组织生长及岩白菜素含量的影响.结果表明,遮光和强白光都有利于朱砂根愈伤组织的生长,不同光照度和光质对愈伤组织的生长形态和褐化程度有一定的影响.愈伤组织中的岩白菜素含量随着光照度的不断增强而减少,当光照度为100 lx(遮光状态)时,岩白菜素含量达到最高,为0.0169%.光质对岩白菜素含量影响程度的大小为:绿光>蓝光>白光>红光,绿光下的岩白菜素含量最高,为0.0235%.培养基中的KNO3有利于愈伤组织生长,NH4NO3有利于岩白菜素的合成.当KNO3含量加倍但无NH4NO3时,愈伤组织的增殖系数会增大;当KNO3含量为3800 mg.L-1时,愈伤组织的增殖系数达到最大值,为19.9614;当培养基中仅有NH4NO3时,随着含量的增加愈伤组织的生长量和岩白菜素的含量都随之减少;当NH4NO3含量为1650 mg.L-1时,岩白菜素含量达到最高,为0.0125%.     

杂交榛愈伤组织诱导和原生质体分离

利用组织培养技术和原生质体分离技术研究极早熟杂交种榛子,为进一步创造新种质资源并应用于育种实践提供基础性研究材料。结果表明,对1年生茎段、叶片和当年生子叶3种外植体而言,当年生子叶愈伤组织诱导率最高,最适合的植物生长调节剂组合为2,4-D0.5mg·mL-1+6-BA1.0mg·mL-1+KT2.0mg·mL-1;以花药为外植体时,最佳植物生长调节剂组合为2,4-D1.0mg·mL-1+6-BA1.0mg·mL-1;体细胞愈伤组织和花药愈伤组织原生质体分离的最佳酶组合分别是0.01g.mL-1纤维素酶+0.03g.mL-1果胶酶、0.01g.mL-1纤维素酶+0.02g.mL-1果胶酶,最适酶解时间分别为6～7h、5h;与体细胞愈伤组织相比,花药愈伤组织很难分离出大量原生质体,不适合做原生质体的分离材料。     

硝酸银对葡萄愈伤组织生长及其白藜芦醇含量的影响

以‘黑比诺’葡萄叶柄诱导并继代10个月的愈伤组织为试验材料,通过在培养基中(B5+1.0 mg/L KT)分别添加0、1、5、10、20、30 mg/L不同浓度的AgNO3,研究了AgNO3对愈伤组织生长和白藜芦醇累积的效应,结果表明,除5 mg/L AgNO3外,其他几种浓度处理均对愈伤组织的生长产生抑制作用;添加10 mg/L的AgNO3对愈伤组织中白藜芦醇的累积效果最佳,含量达17.884μg/g,高出对照3.6倍;但AgNO3浓度过高(30 mg/L)时,白藜芦醇含量明显下降;当浓度为5 mg/L时,白藜芦醇的产量最大,为18.878μg/瓶,是对照的4.7倍.     

光质对龙眼胚性愈伤组织柯里拉京含量的影响

通过超声波提取‘红核子'龙眼胚性愈伤组织中的柯里拉京[β-1-O-galloyl-3,6-(R)-hexahydroxydiphenoyl-D-glucose],并优化色谱分离条件,采用超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)测定其含量,探讨培养天数及光质对龙眼胚性愈伤组织柯里拉京含量的影响。结果表明,龙眼胚性愈伤组织黑暗培养25 d柯里拉京含量最高;不同光质处理下柯里拉京含量依次为:黑暗(18.81 mg·g-1)红光(16.99 mg·g-1)绿光(16.89 mg·g-1)白光(15.10 mg·g-1)蓝光(12.52 mg·g-1),黑暗条件最有利于其合成,而蓝光则抑制其合成。     

葡萄松散型愈伤组织的培养及其白藜芦醇含量的测定

【目的】获得葡萄(Vitisvini fera L.)松散型愈伤组织,并了解其白藜芦醇含量的变化。【方法】以葡萄的叶、叶柄和茎分别作为外植体,在不同激素组合(6-卞氨基嘌呤(6-BA)、激动素(KT)、吲哚丁酸(IBA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D))的培养基(以B5培养基为基本培养基,含30g/L蔗糖和6g/L琼脂)上,进行愈伤组织的诱导和继代培养,并利用高效液相色谱法(HPLC)对不同来源愈伤组织中的白藜芦醇含量进行测定。【结果】以葡萄叶为外植体时,诱导的愈伤组织出愈率很低;以叶柄和茎为外植体时,愈伤组织的出愈率均较高。利用叶柄和茎获得松散愈伤组织时,其诱导培养基组成分别是:B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L和B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L,其继代培养基均为B5培养基+6-BA1.0mg/L+2,4-D0.1mg/L。在诱导培养基产生的愈伤组织中,白藜芦醇含量由高到低的顺序为叶柄>叶>茎。以叶、叶柄和茎为外植体诱导愈伤组织时,其白藜芦醇含量最高的培养基分别为B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L、B5培养基+6-BA1.0mg/L+IBA0.2mg/L和B5培养基+6-BA0.5mg/L+IBA0.2mg/L。【结论】葡萄叶柄和茎易被诱导产生松散的愈伤组织,且经多次继代可以用于建立悬浮培养体系;葡萄愈伤组织中的白藜芦醇含量随外植体及培养基组成的不同而有所差异。     

金花茶体胚和叶片愈伤组织培养

分别以金花茶子叶胚切块和成年植株叶片为材料,进行愈伤组织培养的研究。结果表明:金花茶子叶胚去外表皮后切块,接种于MS+1.5mg·mL-12,4-D+0.5mg·mL-1KT中,能诱导出愈伤组织,并能较好地继代,蔗糖浓度为6%时,愈伤组织生长良好;金花茶成年叶片在流水中冲洗30min,75%酒精浸泡30s后,转入0.2%HgCl2消毒剂中浸泡8min,接种于MS+1.5mg·mL-16-BA+0.5mg·mL-1IAA+4mg·mL-1NAA中,愈伤诱导率为98.335%,遮光有助于叶片愈伤组织的生长。     

培养基添加物对马铃薯花药褐化及愈伤诱导的影响

试验以Vangal、波C、讷16、春薯4号和内薯7号5个马铃薯品种(系)为材料,研究不同培养基添加物硝酸银、活性炭、马铃薯提取液对马铃薯花药培养的褐化率和愈伤诱导率的影响。结果表明,培养基中加入20mg·L-1硝酸银、0.5g·L-1活性炭和50g·L-1马铃薯提取液能够提高马铃薯花药愈伤诱导率,同时褐化率明显降低。     

玉米骨干自交系幼胚再生体系的建立

以玉米骨干自交系‘87-1’、‘综3’、‘137’和‘K12’的幼胚为外植体,研究了影响玉米幼胚再生体系建立的相关因素.结果表明:87-1幼胚在附加500 mg.L-1L-Pro5、00 mg.L-1L-Asn和2.5 mg.L-12,4-D的N6B5基本培养基上愈伤组织诱导率最高,平均可高达98.1%;初级愈伤组织在附加500 mg.L-1L-Pro5、00 mg.L-1L-Asn和1.25 mg.L-12,4-D的N6B5继代培养基上胚性愈伤组织诱导率最高,平均可高达65.6%.在相同诱导、继代培养基和相同培养条件下,4个不同基因型玉米骨干自交系的愈伤组织诱导率无显著性差异,而其胚性愈伤组织诱导率具有显著性差异.继代培养次数对绿苗分化率也产生重要影响,具有显著性差异,其中,1次继代分化率最高;1/2MS培养基附加0.2 mg.L-1KT更有利于分化苗生根.     

不同类型水稻材料成熟胚组织培养力的比较

【目的】研制适应性广的不同类型水稻成熟胚再生技术。【方法】采用生产上应用价值高的不同类型水稻品种成熟胚为外植体材料,比较研究9个粳稻、9个籼稻和11个新近培育的超级杂交稻(两系或三系)或优势组合在不同培养基中的出愈、分化和再生等组织培养力表现。【结果】以M8为基本培养基,在添加30g·L-1蔗糖、8g·L-1琼脂和2mg·L-12,4-D(2,4-苯氧乙酸)相同成分的基础上,供试粳稻材料单独添加较低浓度的细胞分裂素,即0.3mg·L-16-BA(6-苄基嘌呤)可获得较高的出愈率,出愈率在89.2%-61.7%之间;而供试籼稻材料则需在添加2mg·L-16-BA和0.5mg·L-1KT(激动素)两种细胞分裂素的基础上,再添加1mg·L-1NAA(萘乙酸)生长素类激素,可明显提高出愈率,出愈率在100%-9.1%之间;而11个偏籼型超级杂交稻则表现在添加1mg·L-16-BA和1mg·L-1KT(激动素)两种细胞分裂素,即可获得较高的出愈率,出愈率在86.3%-40%之间。在此基础上,在添加了0.5mg·L-12,4-D和1mg·L-16-BA的MS分化培养基(粳稻)以及0.2mg·L-12,4-D和0.5mg·L-16-BA(籼稻和超级杂交稻)的分化培养基上,可分别获得59.5%-9.2%(粳稻)、87.5%-3.6%(籼稻)和43.2%-17.2%(杂交稻)的植株再生率。【结论】初步建立了适合相同水稻类型成熟胚高频再生技术。     

牡丹花药诱导愈伤组织

以牡丹品种‘凤丹’的带花丝的花药为外植体,诱导其产生愈伤组织,利用不同发育时期的花药诱导愈伤组织,确定了最佳的花药发育时期为单核中期,利用单核中期的花药,在确定合适激素配比的基础上,从不同的蔗糖质量浓度、4℃条件下不同处理时间等方面对花药愈伤组织诱导的影响进行了系统研究。结果表明:花药诱导愈伤组织合适的激素组合为MS+2,4-D2.0 mg.L-1+6-BA1.5 mg.L-1+NAA1.0 mg.L-1;花药在蔗糖质量浓度为6%、4℃条件下处理8 d时,愈伤组织的诱导率最高可达50.8%,优化了牡丹花药愈伤组织培养组合。     

骨碎补愈伤组织的诱导及无性系建立的研究

以骨碎补根茎、叶片、叶柄为外植体,进行了愈伤组织诱导与分化、试管苗的生根、移栽、移植的研究,建立起骨碎补的无性系。结果表明:1/2 MS+NH4H2PO4150 mg.L-1+BA 0.3 mg.L-1+NAA 0.6 mg.L-1+2,4-D0.6 mg.L-1是诱导根茎形成愈伤组织和愈伤组织继代培养的理想培养基;1/2 MS+BA 0.1 mg.L-1+IAA 0.05~0.1 mg.L-1是诱导骨碎补根茎愈伤组织分化培养的理想培养基;1/2 MS+NAA 0.1 mg.L-1是骨碎补生根培养的理想培养基;生根试管苗能形成根茎,容易移栽成活。移栽的试管苗保持了骨碎补的所有植物学性状。     

B_9对脱毒马铃薯试管苗生长及移栽结薯数的影响

采用不同浓度的植物生长调节剂B9对试管苗进行壮苗研究,并观察壮苗后生产微型薯的产量。结果表明:20~40 mg.L-1B9对脱毒马铃薯试管苗兼有促进增殖和复壮的双重效果,而且其试管苗移栽成活率和生根率均为100%,其中尤以40 mg.L-1B9效果最佳,生长旺盛,结微型薯数量和重量达到最大值。     

不同光质对西兰花愈伤组织及萝卜硫素含量的影响

以西兰花无菌苗根诱导并继代半年的愈伤组织为材料,研究了红、黄、蓝、绿、白5种不同光质对西兰花愈伤组织及其萝卜硫素含量的影响,结果表明,不同光质下愈伤组织的增殖顺序依次为白光红光、蓝光绿光黄光;不同光质下愈伤组织的可溶性蛋白含量与含水量有明显差异,红光和蓝光下含量较高,与愈伤组织增殖有一定的相关关系;红光和蓝光对愈伤组织中萝卜硫素的累积效果最佳,含量达747.33μg.g-1,为白光的1.38倍;红光和蓝光下萝卜硫素的产量最大,达260.47μg.瓶-1,为白光的1.03倍.     

西伯利亚白刺愈伤组织耐盐生理及外源Ca2+的缓解效应

为探究外源Ca~(2+)对盐生植物耐盐调控机理,以西伯利亚白刺(Nitraria sibirica Pall.)愈伤组织为试验材料,研究不同浓度外源Ca~(2+)对盐胁迫下白刺愈伤组织生长、膜质过氧化程度、抗氧化酶系统及渗透调节物质含量的影响。结果表明,盐浓度≤150 mmol·L~(-1)时,施加一定浓度Ca~(2+)(≤10 mmol·L~(-1))可增加白刺愈伤组织相对生长率,降低电解质外渗率,减少丙二醛(MDA)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性,同时提高可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸含量。当Ca~(2+)浓度过高(10 mmol·L~(-1))时,对白刺愈伤组织生理指标表现不同程度抑制,影响其正常代谢活动。说明一定浓度Ca~(2+)(≤10 mmol·L~(-1))可缓解盐胁迫(NaCl≤150 mmol·L~(-1))对白刺愈伤组织造成的伤害,盐胁迫浓度较高时,外施Ca~(2+)缓解作用较弱,有时表现抑制作用。     

毛泡桐悬浮细胞培养及其植株再生

先将毛泡桐叶片在MS,WPM,KM_8P和B_5等液体基本培养基中进行悬浮培养,然后建立毛泡桐叶片悬浮细胞培养及其体外植株再生体系.结果表明,毛泡桐叶片愈伤组织悬浮诱导最适培养基为改良MS+0.2 mg·L~(-1) NAA+8 mg·L~(-1)BA;细胞悬浮培养的最佳起始密度为6.67×10~6个·mL~(-1);悬浮愈伤组织芽诱导和根诱导的最适培养基分别为MS+0.3 mg·L~(-1)NAA+17 mg·L~(-1)BA和1/2MS+0.1 mg·L~(-1)NAA.     

东北百合鳞片离体培养研究

以东北百合(Lilium distichum Nakai)的鳞片为外植体进行离体培养,探讨不同外源激素水平对其小鳞苇诱导、增殖与不定根形成的影响,建立了东北百合鳞片再生体系.结果表明:MS+BA1.0mg·L~(-1)+NAA0.5～1.0mg·L~(-1)培养基的不定芽诱导和增殖效果最好,诱导率为80.0%以上,增殖系数为4.1～4.6;1/2MS+NAA0.5～1.0mg·L~(-1)或1/2MS+IBA0.1mg·L~(-1)培养基的生根效果最好,生根率为96.0%;试管苗在草炭+珍珠岩(1:1)基质中扦插成活率为96.0%.