猪细小病毒病实验室诊断技术

猪细小病毒可引起猪的繁殖障碍性疾病,其特征为感染母猪,特别是初产母猪,产出死胎、畸形胎、木乃伊胎、流产及病弱仔猪.给养猪业带来的经济损失巨大.主要对猪细小病毒病的实验室诊断技术进行了介绍,以期为有效防控该病提供参考.     

猪细小病毒病诊断技术研究进展

从传统的病毒分离技术、血清学检测技术以及分子生物学诊断技术等方面对猪细小病毒病诊断技术进行综述,对分子生物学诊断技术进行了重点介绍,并对猪细小病毒病诊断技术进行了展望。     

猪细小病毒病诊断技术研究进展

猪细小病毒病是由猪细小病毒(PPV)感染引起的猪的重要传染病之一。该病主要感染母猪特别是初产母猪及血清学阴性经产母猪,导致母猪流产、产死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔猪等,而感染母猪本身无明显症状。该病呈地方性流行,严重地影响着养猪业的发展。由于猪细小病毒常与其他病毒如猪圆环病毒2型和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染,导致断奶仔猪多系统衰竭综合征。临诊上本病与猪伪狂犬病、猪乙型脑炎和猪布鲁氏菌病的症状极为相似,故仅靠临诊确诊较为困难。目前对本病的诊断方法主要有临床诊断、病原学诊断、血清学诊断以及分子生物学诊断等。特别是分子生物学诊断方法以其灵敏度高、特异性强而被人们所重视。主要针对该病近年来诊断方法的研究进展进行阐述,从而为猪细小病毒病的诊断提供参考。     

猪细小病毒病的诊断与防治

猪细小病毒病是猪的繁殖障碍病，该病的特点主要是初产母猪产弱仔、死胎、畸形胎、木乃伊胎。其血清学诊断方法有血凝和血凝抑制试验、中和试验、乳胶凝集试验、酶联免疫吸附试验、荧光抗体技术、橱酸探针技术与PCP．技术等，其中最常应用的是血凝抑制试验。谊病与伪狂犬病、猪乙型脑炎、猪繁殖与呼吸综合征、血凝性脑炎、布氏杆菌病、衣原体病和弓形体病引起的流产易混淆，可通过流行病学、症状、病理变化、血清学压痛原分离与鉴定等方面加以区别。     

猪细小病毒病的诊断与防制

针对猪细小病毒(PPV)的病原、流行病学、症状、病理剖栓、诊断等作了详细的介绍.     

猪细小病毒病诊断与防制的研究进展

猪细小病毒(PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一。PPV最早是从培养细胞中发现并分离得到的一种小DNA病毒。研究表明,PPV不仅是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一,而且能够引起多种猪病。随着对猪细小病毒研究的不断深入,目前已经在猪细小病毒病原学、诊断与防制以及分子生物学等方面取得了进展。     

猪细小病毒感染的实验室诊断

2021年6月,海南一猪场发生疑似猪细小病毒（PPV）感染的疾病。经临床观察,结合病理剖检,同时用病毒PCR方法诊断和分离培养进行病原鉴定。发现PK-15细胞进行PPV分离培养后可见典型的细胞病变;PCR扩增取得PPV VP2基因片段,通过PCR进一步鉴定及基因测序,使用BLAST分析后,最终确诊为PPV。该猪场对症采取了综合防治措施,取得了较好的临床效果。     

人工感染猪胎儿猪细小病毒的强毒复壮及其在猪肾原代细胞上的增殖

猪细小病毒(PPV)强毒，在1～5日龄仔猪肾原代细胞上传代，传至20代左右毒力下降。为保持PPV强毒的毒力，我们用一头妊娠母猪(妊娠48d)做剖腹术。用大剂量的PPV细胞培养物注入猪胎儿的羊膜腔内，人工感染猪胎儿，病毒通过猪胎儿体内的组织进行复制，使毒力增强。术后12d迫杀母猪，取胎儿分离PPV强毒。     

应用斑点免疫金染色法检测猪细小病毒病抗体的研究

本研究初步建立了斑点免疫金染色法 (Dot- IGS)检测 PPV抗体的方法。试验采用经蔗糖密度梯度离心制备的 PPV提纯抗原和 p H7.4、直径 5 0～ 6 3.5 mm的胶体金来检测 PPV抗体 ,取得了较为满意的效果 ;该法对猪细小病毒病抗体最小检测量为1.0 0 8× 10 - 1 0 g/ ml,灵敏性高 ;不同猪布鲁氏菌病、猪伪狂犬病、猪衣原体病、猪口蹄疫、猪瘟、猪弓形体病等的阳性血清出现交叉反应 ,特异性强且重复性好。另该法还具有胶体金制备容易、操作简单快捷等优点 ,是对 PPV抗体检测的重要方法。     

环介导等温扩增技术快速检测猪细小病毒的试验

利用环介导等温核酸扩增技术(LAMP),建立了一种灵敏、特异、快速的猪细小病毒(PPV)检测方法.该方法针对猪细小病毒非结构蛋白(NS-1)基因保守区域设计6条特异引物,在63℃的等温条件下45 min即可完成反应.最低检测限量为10拷贝的PPV目的基因,比常规聚合酶链式反应(PCR)方法敏感100倍,并具有良好的特异性.以钙黄绿素和Mn2+作为荧光指示剂,可快速、直观判定反应结果.通过对149份临床样品进行检测比较,LAMP与PCR检出阳性样本数分别为33份和27份,表明LAMP方法阳性检出率高于PCR.     

猪细小病毒在PK15细胞中增殖规律的研究

猪细小病毒毒株在不同细胞系上的生长情况不尽相同,如不能掌握其规律,将难以生产出优质的疫苗。对PPV（长春株）在PK15和ST细胞上生长情况进行了研究,在PK15细胞系中重点比较了不同的病毒接种方法、病毒接种量和病毒收获时间等因素对病毒产量的影响。研究结果显示：本毒株在PK15和ST两种细胞系上的病变特征不同,但生长规模相似。在PK15细胞上按2％接种量、分步接种、80h时收获病毒,最终得到的病毒滴度（TCID50）最高。提示这是一种比较好的生产方案。然而,进一步的大规模培养试验是有必要的。     

实时荧光定量PCR检测猪细小病毒

根据已报道的猪细小病毒基因组序列,设计并合成了引物和探针,从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中提取DNA,经PCR扩增,产物纯化后与pGEM-T-easy连接,转化大肠杆菌JM109,筛选后得到重组标准品质粒,对重组标准品质粒进行PCR和测序鉴定,表明目的片段已经成功克隆.将104～108拷贝反应的重组标准品质粒进行荧光定量PCR,系统自动分析软件显示Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系.动力学曲线分析表明,在该反应体系和反应条件下,标准曲线的灵敏度为102拷贝.本方法的建立为猪细小病毒感染的早期诊断奠定了基础.     

猪细小病毒YK株NS1基因的克隆与序列分析

提取猪细小病毒（PPV）YK株基因组DNA，利用PCR技术扩增得到了NS1基因全序列，将其克隆到pMD 18-T质粒载体并进行了序列测定和分析。结果表明，NS1基因全长1989bp，编码662个氨基酸。氨基酸序列中含有在PPV复制过程中起重要作用的保守基序GKRN，并有3个潜在的糖基化位点NISN、NFSN和NLTR。PPV YK株的NSl基因与其他PPV毒株NADL-2（4973）株、NADL-2（5075）株、NADL-2（5034）株和Kresse株相比，核苷酸同源性分别为98．3％、99．9％、99．9％和99．7％，氨基酸同源性分别为99．7％、99．7％、99．7％和97．7％。结果说明，NS1基因具有高度保守性。     

聚合酶链式反应检测猪细小病毒方法的研究

本研究依据编码猪细小病毒结构蛋白VP2基因序列,合成了一对寡核苷酸引物,通过减少病毒核酸的提取时间、费用及优化聚合酶链式反应(PCR)的条件,成功地从猪细小病毒(PPV)感染的细胞中扩增出预期的158 bp片段,经EcoRⅠ酶切鉴定,证实了该扩增片段的特异性.经敏感性试验测定,PCR的最低检出量为0.008病毒血凝(HA)单位.这些结果表明本试验建立的PCR对PPV的检测人有快速、简便、经济、灵敏度高和特异性强的特点.     

猪细小病毒感染诊断方法研究进展

猪细小病毒感染是由猪细小病毒引起的一种病毒性传染病。其疾病的传播是由易感母猪通过胎盘传染给胎儿 ,导致母猪流产 ,产出死胎、木乃伊胎或弱子 ,给养猪业造成巨大的经济损失。为了减少该病的发生 ,广大兽医工作者建立了许多用于检测和诊断该病的方法 ,如病毒分离培养、对流免疫电泳试验、血清中和试验、酶联免疫吸附试验、银加强胶体金技术及聚合酶链反应等。文章对其研究进展作了较全面地综述