酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

建立的检测猪生殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为１．７ｍｇ／Ｌ，血清的最适稀释度为１：１００，酶标兔抗猪ＩｇＧ的家访工为１：２０００。比较试验表明，ＥＬＩＳＡ的敏感性优于间接免疫荧光试验（ＩＦＡ）。用ＥＬＩＳＡ检测１９９１年从美国进口猪的血清７６份，阳性率为零；１９９５年从加拿大进口猪的血清１６３份，阳性率为５．５２％；北京地区甲猪场的血清１２１份，阳     

ELISA 检测猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法的建立及血清流行病学调查

反复差速离心法提纯病毒，经ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理后作抗原，建立了检测血清中ＰＲＲＳＶ抗体的ＥＬＩＳＡ方法，该法不与猪瘟，伪狂犬病，乙脑，细小病毒及布我杆菌等病阳性血清反应，与美国ＩＤＥＸＸＰＲＲＳＶ抗体检测试盒同时对１００份样品进行检测比较，二者符合率达９８％，说明具有很好的特异性和敏感性。     

应用酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征血清抗体的研究

建立的检测猛增生殖与呼吸综合征（PRRS）酶联免疫吸附试验（ELISA），其抗原包被浓度为24μ／mL，血清稀释度为1∶100，酶标二抗的工作浓度为1∶500。应用该方法对陕西省9个地区采集的有疑似PRRS征候的250份猪血清进行检测，检出阳性血清32份，阳性率为12．8％，从而证实陕西省存在PRRS，也为该病的大面积血清学普查提供了一种简易、快速、准确的检测方法。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

猪感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)14 d后就可以产生针对非结构蛋白(Non-Structural Protein 7,Nsp7)的抗体,而且抗体水平很高,与N蛋白抗体水平相似,但比N蛋白抗体持续时间更长。另外,检测Nsp7抗体可用于区分PRRSVⅠ型和Ⅱ型的感染。本试验旨在建立一种快速、特异且敏感的检测血清中PRRSV抗体的方法。试验根据NCBI数据库录入的Nsp7蛋白序列(GenBank:EF536003)设计引物,利用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增Nsp7基因,构建原核表达载体pET28a-Nsp7,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,并诱导重组蛋白表达。利用亲和层析纯化重组蛋白,Western Blot鉴定表达产物。将纯化后的重组蛋白按不同浓度包被酶标板,通过方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度,并对其条件进行优化,最终建立检测PRRSV Nsp7抗体的间接酶联免疫吸附测定(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法。结果表明,试验表达了重组Nsp7蛋白,重组的Nsp7蛋白能与PRRSV阳性血清发生特异性反应,建立了一种基于重组Nsp7蛋白的间接ELISA检测方法。建立的间接ELISA检测方法分别与商品化PRRSV抗体检测试剂盒检测结果相比,两者符合率为87.74%。试验表明,建立的间接ELISA方法可以用于PRRSV抗体的检测。     

猪繁殖与呼吸综合征的检测与免疫试验

随机采集猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病猪的血清，通过酶联免疫吸附试验（ELISA），检测该病在桐乡市发病猪中的阳性率为76．2％；通过疫苗免疫对PRRS病的免疫猪和非免疫猪发病率和死亡率进行横向与纵向对比试验。结果表明，经疫苗免疫后生长猪的发病率为7．0％，死亡率为0．5％；未经免疫猪的发病率为35．4％，死亡率为20．3％。     

猪繁殖与呼吸综合征

综述了猪繁殖与呼吸综合征。包括病原PRRSV病毒的病原特点、流行病学、临床症状及诊断方法和防治措施等六方面。介绍了该病的临床诊断、病理学诊断和血清诊断方法及病毒分离技术，同时提出了该病的防治措施。     

ELISA 检测猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法的建立及血清流行病学调查

反复差速离心法提纯病毒，经ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理后作抗原，建立了检测血清中ＰＲＲＳＶ抗体的ＥＬＩＳＡ方法。该法不与猪瘟、伪狂犬病、乙脑、细小病毒及布氏杆菌等病阳性血清反应，与美国ＩＤＥＸＸＰＲＲＳＶ抗体检测试剂盒同时对１００份样品进行检测比较，二者符合率达９８％，说明具有很好的特异性和敏感性。     

用酶联免疫吸附试验检测禽脑脊髓炎病毒抗体

用酶联免疫吸附试验检测禽脑脊髓炎病毒抗体曹永长毕英佐何洁（华南农业大学动物科学系，广州５１０６４２）禽脑脊髓炎（ＡｖｉａｎＥｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ，简称ＡＥ）是由禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）引起的一种危害严重的传染病，主要侵害幼年鸡群，其特征是...     

斑点酶联A蛋白免疫吸附试验(Dot-PPA-ELISA)检测猪衣原体抗体方法的建立

本研究建立了斑点酶联A蛋白免疫吸附试验（Dot-PPA-ELISA）,对猪衣原体IgG的最小检测量为1.21 ng。以间接血凝试验方法为对照,两种方法同时检测120头份猪血清样品,Dot-PPA-ELISA检出43头份（35.83%）,效价≥256;间接血凝试验检出26头份（21.67%）,效价≥64。诊断膜片与猪瘟、猪布氏杆菌病、猪口蹄疫和猪弓形体病标准阳性血清均不出现有意义的交叉反应。诊断膜片置室温、4℃和-20℃下至少保存3个月其抗原效价不变。试验表明本方法重复符合率为94.44%,且反应效果不受反应板质量和新旧的影响;试剂用量节省,各步骤均可做到严格定量,操作简便,3 h内可出结果,肉眼即可判断,不需要特殊检测仪器。由于辣根过氧化物酶标记的葡萄球菌A蛋白（PPA）是一种广谱诊断试剂,因此Dot-PPA-ELISA还可以用于其它哺乳动物衣原体抗体的检测。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异性研究进展

猪繁殖与呼吸综合征 (ＰＲＲＳ)可导致母猪严重的繁殖障碍以及仔猪呼吸道疾病 ,最先发生于美国。荷兰的Ｗｅｎｓｖｏｏｒｔ博士首先分离到ＰＲＲＳ病毒(ＰＲＲＳＶ)。迄今 ,ＰＲＲＳ已经成为一种世界性疾病 ,每年给世界养猪业造成巨大损失 ,严重阻碍了世界养猪业的发展。虽然世界各地分离到的ＰＲＲＳＶ可引起类似的症状 ,但最近越来越多的资料显示 ,ＰＲＲＳＶ在毒力性、抗原性和遣传性方面均发生了很大变异。目前 ,ＰＲＲＳ在临床上可分为母猪流产与死胎综合征、非典型ＰＲＲＳ和急性ＰＲＲＳ三种形式。近来 ,美国和丹麦的部分养猪场暴发…     

诊断猪囊尾蚴病的酶联免疫吸附试验

猪囊尾蚴病又称为猪囊虫病 ,对病猪生前诊断的方法虽然很多 ,但是检出率高、特异性强、稳定性好的方法当推酶联免疫吸附试验 ,简称 ELISA。该法由我校于 80年代建立 ,后来在推广应用中又不断改进 ,形成了现在的操作方法 ,曾获农业部科技进步奖 ,农业部动物检疫规程委员会也通过     

猪繁殖与呼吸综合征

猪繁殖与呼吸综合征邸怀忠（山西省原平农校）１引言近年来在国际养猪生产中出现了一种新的接触性传染病，这种病导致猪出现流行性流产和发育不良症（Ｍｅｒｅｄｉｔｈ，１９９２）。１９８７年在美国首先报道后，世界各地均有发现，由此已引起全球重视。此病名称不一，诸...     

猪繁殖与呼吸综合征的诊断

猪繁殖与呼吸综合征的诊断梁杏娴①卢洪芬①董振光②李力施②陈始和③梁华炳１流行情况广东某猪场建于１９９５年４月,是个中型的集约化养猪场,属工厂化饲养管理方式,怀孕母猪采用限位舍饲养,高床产仔,仔猪一般３０天断奶;母猪和大部分公猪来自湖南长沙,猪的品种有...     

用竞争酶联免疫吸附试验检测蓝舌病病毒抗体的研究

对加拿大动物疾病研究所（ＡＤＲＩ）现行的检测ＢＴＶ群特异性抗体的竞争酶联免疫吸附试验（下称标准程序）进行改良，建立新适合国内实验条件易于推广的试验方法（下称改良程序）对１５份实验感染ＢＴＶ的参照牛血清和３６０份样品牛血清进行比较检测，结果表明改良程序与标准程序特异性和敏感性基本一致。用琼凝胶免疫扩散试验（ＡＧＩＤ）对上述参照血清和样品血清进行检测，表明改良程序与标准程序均较ＡＧＩＤ试验敏感，本研究     

猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究进展

猪繁殖与呼吸综合征 (Porcine reproductiveand respiratory syndrome,PRRS)是 1 987年发现的一种新的猪病 ,它主要是引起母猪的繁殖障碍 ,如流产、早产、死胎、木乃伊胎和呼吸道症状的一种由猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)引起的接触性传染病。此病最初在美国首先被发现 ,随后相继在世界各国报道 ,我国台湾省也有疫情的报道。 1 995年我国首次从进口猪中检出 PRRS阳性猪 ,并从中分离到 PRRSV。 1 996年郭宝清等首次从国内 PRRS血清阳性猪群中分离到 PRRSV,从而证实了我国也有此病的流行[1] 。由于 PRRS主要是引起母猪的繁殖…     

猪繁殖与呼吸综合征

自１９９１年Ｗｅｎｓｖｏｏｔ等分离并鉴定了猪繁殖与呼吸综合征（ＰＲＲＳ）病毒以来,世界各国先后开展了对ＰＲＲＳ的病原学、流行病学、免疫学和分子生物学等多方面的研究。经过近十年的研究和探索,逐步建立了一些较为有效的诊断,预防和治疗该病的方法和措施,为控制ＰＲＲＳ提供了经验。ＰＲＲＳ是一种由ＰＲＲＳ病毒引起的以导致猪繁殖障碍和呼吸道疾病为主要特征的急性传染病。它可以感染各种年龄的猪,典型的临床症状是母猪的早产、流产、死胎或木乃伊;仔猪成活率下降;育成猪呼吸疾病加剧等。８０年代初期ＰＲＲＳ就已经存在,…     

酶联免疫吸附方法检测禽流感病毒的研究进展

禽流感是由禽流感病毒(AIV)引起的人畜共患病,可以引起巨大的经济损失,严重威胁人类健康。酶联免疫吸附试验(ELISA)具有灵敏度高、可标准化操作、结果易于分析等特点,因此在禽流感病毒检测过程中占据非常重要的地位。本文重点介绍几种主要的禽流感病毒酶联免疫吸附试验方法,并就该方法的发展提出建议。     

猪繁殖—呼吸综合征病毒的形态学

利用电子显微技术，对从上海某发病猪场分离到3株猪繁殖－呼吸综合征病毒（PRRSV）和标准美洲株（ATCC－VR2332）进行了形态特征的比较。结果表明，这4株病毒形态特征无显著差异。负染显示该病毒以球形为主，具有囊膜，囊膜上有纤突，大小为60－85nm。超薄切片可见病毒粒子大量存在于细胞浆内，有囊膜的直径为60－80nm，没有囊膜的直径为40－50nm，在细胞的线粒体，高尔基体和双基核膜内可见病毒粒子。在病毒增殖的同时，Marc-145细胞的显微结构逐渐发生破损，显示病毒的释放是通过破坏细胞膜结构的完整性来实现的。