抗牛IgGFc受体单克隆抗体的生产与鉴定

利用阳性表达细胞和荧光激发流式细胞分类器建立了一个单克隆抗体的制备与快速鉴定系统。用克隆于表达性质粒载体ｐＣＤＭ８的牛ＩｇＧ＿１Ｆｃ受体（ｂｏＦｃγＲⅡ）ｃＤＮＡ转染ＣＯＳ７细胞并用被转染细胞作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫鼠脾细胞与ＮＳＯ浆细胞瘤细胞株融合，筛选克隆出３株分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤，即ＣＣ－Ｇ３６、ＣＣ－Ｇ３７和ＣＣ－Ｇ３９。经使用荧光激发流式细胞分类器检测，３个单克隆抗体均识别经ｂｏＦｃγＲⅡ转染的ＣＯＳ７细胞而不识别未经转染的ＣＯＳ７细胞和经牛ＩｇＧ＿２Ｆｃ受体（ｂｏＦｃγ２Ｒ）转染的ＣＯＳ７细胞。３个单克隆抗体分别为ＩｇＧ＿１（ＣＣ－Ｇ３６）、ＩｇＧ＿２ａ（ＣＣ－Ｇ３７）和ＩｇＧ＿３（ＣＣ－Ｇ３９）。本研究还用同样方法验证了单克隆抗体ＣＣ－Ｇ２４抗ｂｏＦｃγ２Ｒ的特异性。     

间接夹心ELISA检测新城疫病毒抗原

以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒ＩｇＧ为包被抗体，兔抗ＮＤＶ ｖｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体，酶标记羊抗兔ＩｇＧ为指示抗体，建立了检测ＮＤＶ的间接夹心ＥＬＩＳＡ，并分别以兔抗ＮＤＶ鸡胚毒纯化ＨＮ糖蛋白，Ｆ糖蛋白ＩｇＧ为第二抗体进行了比较试验，并对攻毒鸡外分泌物样品进行了病原检测。     

感染鸡传染性贫血病毒的雏鸡新城疫疫苗免疫后局部体液免疫球蛋白…

本试验对感染鸡传染性贫血病毒雏鸡新城疫疫苗免疫及其强毒攻击后，其泪液，气管液，肠液和胆汁的免疫球蛋白ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ含量的动态变化进行了检测。结果发现，感染雏鸡泪液的ＩｇＧ，ＩｇＡ和气管液的ＩｇＧ及胆汁的ＩｇＧ，ＩｇＭ，ＩｇＡ含量无于接种ＮＤ疫苗后７－２８天明显低于未感染ＣＩＡＶ的免疫对照雏鸡，泪液的ＩｇＭ和气管液的ＩｇＡ含量在ＮＤ免疫后１４－２８天明显降低；肠液的ＩｇＡ和ＩｇＭ，ＩｇＧ仰望     

鸡毒支原体株间结构蛋白及其抗原性变异的比较研究

本研究以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ技术,应用鸡毒支原体国外强毒株Ｓ６、标准株ＰＧ３１,疫苗株Ｆ,北京分离 ＢＧ４４Ｔ、ＮＢ７２特异性多克隆抗血清对以上五株及疫苗株Ｖ、北京分离株Ｃ的结构及其抗原性进行了比较结果表明ＭＧ结构蛋白及其抗原性存在着株间的多样性和一定相似性,其中以Ｆ与Ｓ６、ＢＧ４４Ｔ与ＰＧ３１、ＮＢ７２与Ｃ更为接近,可能具有同源性。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示出了ＭＧ株间结构蛋白微     

有丝分裂原对离体boPBMC增殖和分泌Ig的作用

应用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法，ＥＬＩＳＡ和ＦＡＣＳ研究了离体奶牛外周血单核细胞（ｂｐＰＢＭＣ）对有丝分裂原的免疫应答。ＰＷＭ和ＣｏｎＡ能不同程度地诱导ｂｏＰＢＭＣ增殖和分泌Ｉｇ；而ＳＥＢ只能使ｂｏＰＢＭＣ高度增殖而不分泌Ｉｇ（Ｐ〉０．０５）。ＰＷＭ诱导的ｂｏＰＢＭＣ经１２ｄ培养，其中ＣＤ４＋／ＣＤ８＋细胞的比率为２．９：１；而ＳＥＢ诱导的细胞为０．３：１。离体ｂｏＰＢＭＣ主要分泌ＩｇＭ和ＩｇＧ１，只有     

牛病毒性腹泻病毒现地分离株与疫苗株的抗原差异

用单克隆抗体（ＭＡｂ）作酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）、免疫荧光试验（ＩＦＡ）、病毒中和（ＶＮ）试验及兔疫沉淀试验证明了牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）致细胞病变株８７－２５５２（现地分离）与ＮＡＤＬ和Ｓｉｎｇｅｒ（原型株）之间的抗原差异。两个抗ＢＶＤＶ８７－２５５２株的ＭＡｂ（Ｄ１１和Ｂ７）能强烈中和现地分离株，并对该病毒的４８－ＫＤａ糖蛋白呈特异性。这两个ＭＡｂ有不同的亚型，Ｄ１１为免疫球蛋白Ｇ１     

牛轮状病毒重组株的血清学和基因型特性

从母牛接种过Ａ组ＢＲＶ株ＮＣＤＶ－Ｌｉｎｃｏｌｎ（Ｐ１：Ｇ６）苗的两个吡邻牛场分离到两株牛轮状病毒（ＢＲＶ），编号为ＮＳ－１和ＮＳ－２，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ试验表明，ＮＳ－１和ＮＳ－２有相的的Ａ组ＲＮＡ电泳模式，而且全部基因片段同源，体外中和试验表明，ＮＳ－１株病毒能被Ｇ６特异性单克隆抗体（ＭｃＡｓ）和抗ＢＲＶＢ６４１株（Ｐ５：Ｇ６）豚鼠高免血清（ＧＰＡＳ）中和，但不被Ｇ１０特异性Ｍ     

新城疫病毒接种鸡血清中IgM、IgG的动态变化

将１６只ＳＰＦ鸡分成４组，每组４只，分别接种新城疫油乳剂苗，新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊病三联油乳剂苗，ＬａＳｏｔａ弱毒苗和Ｍｕｋｔｅｓｗｅｒ苗。接种后每隔２ｄ采血１次，用ＥＬＩＳＡ测定新城疫特异性ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体。结果：油乳剂灭活苗接种组均无特异性ＩｇＭ抗体出现，特异性ＩｇＧ抗体高峰期出现在接种后２２ｄ，ＬａＳｏｔａ弱毒苗和Ｍｕｋｔｅｓｗｅｒ苗接种组均有特异性ＩｇＭ抗体出现，高峰期为接种后第９ｄ。各接种组经强毒攻击后，均出现ＩｇＭ反应，ＩｂＧ呈典型的回忆反应。进一步试验用ＬａＳｏｔａ灭活苗经肌肉、静脉接种和加氢氧化铝胶佐剂后肌肉接种，经测定，接种鸡均无或仅有很低水平的特异性ＩｇＭ抗体产生。     

人血清中伊氏锥虫溶虫活性因子的鉴定

将伊氏锥虫在体外与人血清一起培养，虫体出现渐进性水肿，由蝌蚪形变成环形，最后崩解。将人血清注入感染鼠体内，可以清除体内虫体，使感染鼠得到保护。人血清对接种１０３个锥虫感染鼠的最小保护剂量为０．２ｍＬ，感染后５ｄ注入人血清，血中虫体数量逐日下降，至第１０天全部消失。对体外伊氏锥虫不同变异株，人血清均有同样的溶虫效果。经ＤＥＡＥ层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００过滤后，人血清中只有富ＩｇＭ的Ｆ－１有溶虫活性，而富ＩｇＧ的Ｆ－２和富ＨＤＬ的Ｆ－３均无溶虫活性，表明人血清对伊氏锥虫的溶虫活性与ＩｇＭ类天然抗体有关。另外，去补体的人血清体外溶虫活性明显减弱，而体内保护仍然有效。     

结膜相关淋巴组织和哈氏腺免疫协同关系的研究Ⅰ．结膜相关淋巴组织缺失对哈氏腺点眼免疫应答的影响

采用ＥＬＩＳＡ、免疫组织化学方法、手术切除结膜相关淋巴组织（Ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｌｙｍｐｈｏｉｄ Ｔｉｓｓｕｅ，ＣＡＬＴ）法对结膜相关淋巴组织和哈氏腺（Ｈａｒｄｅｒｉａｎ Ｇｌａｎｄ，ＨＧ）在点眼免疫应答过程中的相互协同关系进行了研究。研究发现，采用外科手术于１日龄切除结 膜相关淋巴组织后切除组点眼免疫后泪液中ＮＤＶ－特异性ＩｇＡ、ＩｇＭ型抗体滴度及哈氏腺中ＩｇＡ、ＩｇＭ     

传染性法氏囊病病毒对法氏囊淋巴细胞形态及其功能的影响

本试验利用透射电镜连续观察了传染性法氏囊病病毒变异 Ｅ 株人工感染雏鸡后不同时期法氏囊细胞的超微结构变化,并对法氏囊内 Ｓ Ｉｇ Ｍ , Ｓ Ｉｇ Ｇ, Ｓ Ｉｇ Ａ 三种抗体生成阳性细胞数量和血液中 Ｉｇ Ｍ , Ｉｇ Ａ, Ｉｇ Ｇ 抗体水平进行了检测。观察结果表明, Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 感染后法氏囊淋巴细胞出现了严重变性、坏死,表现为核染色质浓缩、碎裂、溶解,线粒体溶解呈空泡样结构,其 他细胞器坏死溶解,在法氏囊淋巴细胞、巨噬细胞、网状上皮细胞等细胞的胞浆中可见不同类型和排列方式的病毒粒子。 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 感染后法氏囊内抗体阳性细胞数量和血清中抗体水平均呈现不同程度的下降,揭示雏鸡机体体液免疫功能严重抑制。     

新城疫病毒接种鸡血中IgM,IgC的动态变化

将１６只ＳＰＦ鸡分成４组，每组４只，分别接种新城疫油乳剂苗，新城疫，传染性支气管炎，传染性法氏囊病三联油乳剂苗，ＬａＳｏｔａ弱毒苗和Ｍｕｋｔｅｓｗｅｒ苗。接种后每隔２ｄ采血１次，用ＥＬＩＳＡ测定新城疫特异性ＩｇＭ和ＩｇＧ抗体，结果：油乳剂灭活苗接种组均无特异性ＩｇＭ抗体出现，特异性ＩｇＧ抗体高峰期出现在接种后２２ｄ，ＬａＳｏｔａ弱毒苗和Ｍｕｋｔｅｓｗｅｒ苗接种组均有特异性ＩｇＭ抗体出现，高峰期为接     

分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立与鉴定

采用腹腔的接种１次脾内注射禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）蛋白免疫小鼠，经３次融合后，共筛选８株分泌抗禽呼肠孤病毒（单克隆抗体杂交瘤细胞株，这８株ＭｃＡｂ均可与ＡＲＶＳ１１３３株，ＦＤＯ株发生反应，而与ＩＢＤＶ，ＭＤＶ，ＥＤＳ－７６病毒不发生反应，经亚类鉴定，ＡＥ７，ＡＦ８，ＢＤ１，ＤＨ１０，ＥＥ５为ＩｇＧ１；ＡＤ６，ＣＧ４为ＩｇＣ２ａ，ＡＧ７为ＩｇＧ２ｂ。腹水效价在１０＾３～１０＾５之间。     

狂犬病荧光抗体技术研究

用狂犬病巴黎株固定毒免疫家兔制造抗血清。应用ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ５０层析法分离提纯抗血清ＩｇＧ，用异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记，成功的制造了狂犬病荧光抗体（ＲＶＦＡ）。此标记物对细胞培养中和脑组织中的狂犬病病毒（ＲＶ）具有高度的特异性。于接毒感染的细胞浆内，及实验感染动物小白鼠、家兔脑组织中的神经元细胞浆内及其轴突内，可见到数量不一的斑点状的特异性荧光小体－ＲＶ的聚集体。     

鸡贫血因子病全身免疫功能变化的研究

用鸡贫血病毒（ＣＡＶ）感染１日龄ＡＡ雏鸡,以未感染同龄ＡＡ雏鸡为对照,感染后不同时间检测其外周血液Ｔ、Ｂ细胞数量和ＩｇＧ,ＩｇＭ,ＩｇＡ含量,胸腺,法氏囊,脾脏ＩｇＧ,ＩｇＭ,ＩｇＡ抗体生成细胞和Ｔ细胞数量以及Ｔ、Ｂ细胞增殖功能;胸腺和脾脏白细胞介素２（ＩＬ－２）和干扰素（ＩＦＮ）诱生活性等的动态变化。     

感染鸡传染性贫血病毒的雏鸡新城疫疫苗免疫后局部体液免疫球蛋白含量变化

本试验对感染鸡传染性贫血病毒（ＣＩＡＶ）雏鸡新城疫（ＮＤ）疫苗免疫及其强毒攻击后，其泪液、气管液、肠液和胆汁的免疫球蛋白ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量的动态变化进行了检测。结果发现，感染雏鸡泪液的ＩｇＧ、ＩｇＡ和气管液的ＩｇＧ及胆汁的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量均于接种ＮＤ疫苗后７～２８天明显低于未感染ＣＩＡＶ的免疫对照雏鸡；泪液的ＩｇＭ和气管液的ＩｇＡ含量在ＮＤ免疫后１４～２８天明显降低；肠液的ＩｇＡ和ＩｇＭ、ＩｇＧ含量分别于免疫后７～１４和７、１４天也显著减少。表明ＣＩＡＶ感染雏鸡对ＮＤ疫苗免疫的局部体液免疫应答能力降低。ＮＤ强毒攻击后，ＣＩＡＶ感染ＮＤ免疫雏鸡泪液、气管液、肠液和胆汁的ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ含量及免疫保护率，均明显低于未感染ＣＩＡＶ的免疫对照雏鸡。     

网状内皮组织增殖病病毒感染SPF雏鸡后局部体液免疫球蛋白含量变化

试验对ＳＰＦ雏鸡接种网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）后,应用间接酶联免疫吸附分析法检测了泪液、气管液、肠液和胆汁的免疫球蛋白ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量的动态变化。结果发现,感染ＳＰＦ雏鸡泪液、气管液、肠液和胆汁的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量于感染后７～４２ｄ明显降低,表明ＲＥＶ感染鸡的局部体液免疫能力降低     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因免疫对鸡的保护作用

将鸡传染性支气管炎病毒肾型 Ｔ 株 Ｓ１ 基因ｃ Ｄ Ｎ Ａ 连接于ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３ 的 Ｈｉｎｄ Ｉ Ｉ Ｉ与 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ位点之间构建含有 Ｃ Ｍ Ｖ 启动子及 Ｂ Ｇ Ｈｐｏｌｙ Ａ 信号序列的鸡传染性支气管炎病毒 Ｓ１ 蛋白真核表达质粒。实验证明, Ｓ Ｐ Ｆ 鸡肌注免疫后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体逐渐升高,至第３５ 日龄左右达到高峰,攻毒后血清 Ｉｇ Ｇ 抗体先下降而后升高,血清 Ｉｇ Ｇ 抗体升高幅度不及 Ｉ Ｂ 油苗免疫组。质粒 Ｄ Ｎ Ａ 免疫鸡攻毒后有４０ ％ 的鸡可耐过强毒的攻击,说明 Ｓ１ 基因在体内获得了表达并使鸡产生了一定的免疫力。     

甜菜碱代替部分蛋氨酸对肉仔鸡生产性能和胴体品质影响的研究

甜菜碱代替部分蛋氨酸对肉仔鸡生产性能和胴体品质影响的研究ＥＦＦＥＣＴＯＦＳＵＢＳＴＩＴＵＴＩＯＮＯＦＢＥＴＡＩＮＧＦＯＲＳＯＭＥＰＡＲＴＯＦＭＥＴＨＩＯＮＩＮＧＯＮＰＥＲＦＯＲＭＡＮＣＥＡＮＤＣＡＲＣＡＳＳＱＵＡＬＩＴＹＯＦＢＲＯＩＬＥＲＳＤｅｎｇＹ...     

我国部分地区ＮＤＶ的分子流行病学研究

本研究根据新城疫病毒（ＮＤＶ）Ｆ基因编码区１－３７４位核苷酸序列计算其遗传距离并给出了ＮＤＶ的系统发育进化树，将６８株ＮＤＶ分为９个基因型（３０株为国内分离株），其中Ⅰ－Ⅵ是早已存在的老基因型，Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ为新发现的基因型，特别是Ⅸ为我国特有的基因型（Ｆ４８ＥＯ、Ｍ３、ＨＬＪ－３、ＨeB-1P和ＮＭ－５）。１９９７－１９９９年我国云南、广西、甘肃、陕西、新疆等地分离的ＹＮ－１Ｐ、ＧＸ－３、Ｈ１、Ｈ２、Ｐ１、ＧＸ－１、ＧＸ－２、ＧＳ－３、ＳＨＸ－２、ＳＨＸ－３、ＳＨＸ－６、ＳＨＸ－７、ＸＪ－２和１９９１年分离的ＨuB-1均属于Ⅶ基因型，该基因型的病毒是９０年以来引起新城疫发生的主要病原。根据遗传距离和分离年代可将此基因型进一步划分为５个基因亚型，分别是Ⅶa、Ⅶb、Ⅶc、Ⅶd和Ⅶe。此外ＨuN-1/98、HLJ-4/95和ＨeH-1P属一个老的基因Ⅵ，１９７９－１９８５年分离自青海的ＱＨ－１、ＱＨ－２、ＱＨ－４属于一个新的基因型－Ⅷ型。可见在我国新城疫的流行是极其复杂的，既有老基因型的危害（Ⅰ－Ⅵ），又有新基因型（Ⅶ）的流行，更有我国独特Ⅷ和Ⅸ基因潜伏。