利用DNA池技术提高基于InDel标记的种子纯度鉴定效率

为提高基于InDel-Pyrosequencing的黄瓜杂交种纯度检测通量,降低检测成本,本研究模拟10种DNA Pooling进行PCR、Pyrosequencing及等位基因频率分析。通过TTest分析不同Pooling间等位基因频率的差异性,确定3 Pooling为种子纯度检测最适Pooling数;建立3 Pooling-InDel-Pyrosequencing标准曲线,其R2达0.999 1;根据该标准曲线,检测黄瓜杂交品种"园中王"30粒杂交种种子纯度,结果为96.67%。本研究丰富了基于InDel-Pyrosequencing的黄瓜杂交种纯度检测技术体系。     

利用InDel标记鉴定花椰菜‘津品70’种子真实性与纯度

利用分子标记可以快速有效地对花椰菜品种真实性与种子纯度进行鉴定。目前,花椰菜中有关分子标记开发的研究相对较少,缺乏高效实用的分子标记。本研究基于花椰菜品种‘津品70’的两个亲本自交系的重测序数据,在全基因组范围内鉴定亲本间的插入缺失(insertion/deletion, InDel)变异。基于InDel变异信息,共开发了1 167个差异位点InDel标记,随机挑选了均匀分布在9条染色体上的67对InDel引物进行验证,共得到12对具有双亲多态性的共显性标记。利用筛选的12对引物,对包括‘津品70’在内的16个花椰菜品种进行扩增,成功构建了16个花椰菜杂交品种的数字指纹图谱,表明这些标记可以用于‘津品70’的品种真实性鉴定。同时,利用12对标记对82株‘津品70’的种子纯度进行了鉴定,其种子纯度达到了100%,该结果与大田表型鉴定结果 97.56%保持高度一致。本研究中花椰菜InDel分子标记的开发不仅在花椰菜种子真实性鉴定与纯度鉴定中具有广泛的应用前景,还可以为后续的花椰菜种质资源鉴定与分子标记辅助育种提供重要的研究工具。     

苦瓜杂交一代种子纯度InDel分子标记鉴定技术研究

以6份苦瓜自交系及其配组的3个苦瓜杂交一代组合为试验材料,对6份苦瓜自交系进行高深度重测序,鉴定获得覆盖苦瓜全基因组的InDel变异位点信息,并针对InDel变异位点设计引物进行PCR扩增验证,成功开发3个苦瓜杂交一代组合的各自特异多态性InDel分子标记,将多态InDel分子标记应用于苦瓜杂交一代种子纯度鉴定。结果表明,InDel分子标记纯度鉴定结果与田间种植鉴定结果一致,初步建立了苦瓜杂交一代种子纯度InDel分子标记鉴定技术体系。     

黄瓜‘浙秀1号’种子纯度的SSR鉴定

种子纯度在种子生产中的重要性日益提升,分子标记技术因其具有高效、稳定、可靠等优点越来越多地被应用到种子纯度鉴定中。本研究利用SSR分子标记技术对黄瓜杂交品系‘浙秀1号’及其两亲本之间的多态性进行了引物筛选和种子纯度鉴定研究。结果表明,在699对供选SSR引物中,有3对引物分别在‘浙秀1号’杂交种和其双亲之间表现为稳定的共显性,杂交种带型为双亲的互补带型,适合于杂交种纯度鉴定。经田间试验验证,引物稳定性良好,且与田间鉴定结果非常接近,可用于‘浙秀1号’杂交种种子纯度的鉴定,显示出SSR标记技术在黄瓜杂交种子纯度的室内快速检测中有广泛应用前景。     

SSR标记对宁单11种子纯度的鉴定

采用SSR分子标记方法,选用24对引物,以杂交玉米宁单11杂交种子及其父母本为实验材料,对宁单11种子纯度进行鉴定。通过带型分析,筛选出在杂交种中呈现清晰且双亲互补带型的特异性引物,并依据特异性引物的筛选标记结果对抽样批次的宁单11种子样本进行纯度鉴定。结果表明:phi034、phi080、umc1638、bnlg439、bnlg1792五对SSR引物可用于玉米杂交种宁单11种子纯度鉴定。     

甘蓝型油菜白花基因InDel连锁标记开发

碱基插入/缺失(InDel)是基因组上广泛分布的遗传变异形式。但甘蓝型油菜白花基因InDel连锁标记还未见有关研究报道。本研究以甘蓝型油菜双单倍体(doubledhaploid,DH)纯系黄花Y05和甘蓝型油菜纯系白花W01杂交构建F2群体。在F2群体中选取30株极端纯白花和30株极端纯黄花构建叶片DNA子代池,对亲本和DNA子代池进行30×重测序。以法国甘蓝型油菜Darmor-bzh为参考序列, QTL-seq流程和PoPoolation2流程相互结合鉴定白花基因候选区间, 2种方法均将白花基因定位于法国甘蓝型油菜Darmor-bzh C03染色体52～54 Mb区间。利用IGV软件可视化白花基因候选区间插入缺失(InDel)变异位点,依据候选区间序列信息设计InDel引物,聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选到8个与白花基因连锁共分离的InDel标记。上述研究为甘蓝型油菜白花基因精细定位和分子标记辅助选育以及白花基因功能标记开发奠定了研究基础和工作思路。     

利用微卫星标记鉴定两系杂交稻两优培胜的种子纯度

从100对水稻SSR引物中筛选到5对表现共显性标记的SSR引物。通过进一步筛选以培矮64S为母本的杂交稻组合，获得一个对两优培胜特异性的引物RM127（SSR标记），该引物只在两优培胜中扩增出“杂合”带型，在其他37个两系杂交稻组合、不育系和常规品种中均只扩增出1条带（纯合带型）。利用该微卫星标记对两优培胜的商品种子进行了纯度鉴定，其检测结果与田间种植鉴定结果完全一致。研究结果初步表明微卫星标记技术应用于两系杂交稻种子纯度鉴定具有十分显著的商业潜力。     

利用InDel标记划分玉米自交系的杂种优势群

利用北京市农林科学院玉米研究中心构建的多重扩增靶向捕获测序基因分型InDel标记组合,对102份玉米自交系进行InDel标记的基因分型。利用UPGMA方法将102份玉米自交系划分为6个杂种优势群包括瑞德群、塘四平头、兰卡斯特群、旅大红骨群、P群及热带和亚热带混血群。类群分析结果与现有的杂种群和已知谱系高度一致。     

棉花常规种种子纯度的SSR分子标记鉴定

棉花是新疆重要的经济作物,寻找一种有效的棉花品种(系)纯度检测方法是解决目前市场上棉花品种多、乱、杂问题的有效途径.本研究选取新疆棉花品种(系)中的41个常规种为试验材料,利用简单重复序列(simple sequence repeats,SSR)分子标记技术筛选出15对条带清晰、多态性高的核心引物,对41份试验材料进行...     

SSR技术对杂交稻种冈优188的纯度鉴定

运用SSR分子标记,以冈46 A和乐恢188为材料,从463对引物中,筛选出4对在双亲间有特异多态性条带的引物:RM6、RM252、RM263和RM 526。利用该4对特异性引物,对2家市售的冈优188杂交种进行纯度鉴定,其纯度分别为98.01%和98.65%,其田间纯度鉴定结果分别为97.89%和98.38%,二者结果无显著差异。因此,可利用该4对特异性SSR多态性引物对冈优188进行纯度鉴定。     

黄瓜种子长度的遗传分析及分子标记

为了今后正确制定籽用黄瓜育种方案和有效地进行品种选育,有必要对黄瓜种子大小进行详细研究。选用种子长短不同的5个黄瓜自交系作为杂交亲本,按照Griffing双列杂交试验方法Ⅱ配制杂交组合。以长种子自交系D06157和短种子自交系D0603为亲本,构建F2分离群体,采用SSR分子标记构建遗传连锁图谱,利用复合区间定位方法进行QTL定位。结果表明：黄瓜种子长度属于数量性状,以显性效应为主,同时存在加性效应,广义遗传力及狭义遗传力较低,分别为28.6777%、10.8384%。构建的4个连锁群含有16个SSR位点,连锁群总长度为287.1 cM,标记间平均距离为17.94 cM。检测出6个与黄瓜种子长度相关的QTL,其中QTL5和QTL6有着较高的对种子长度性状变异的解释率(>5%),距离最近标记的图距分别为2.1 cM、4.3 cM,LOD值分别为7.84、9.69,可解释遗传变异分别为6.07%、6.08%,加性效应值分别为39.12%、37.21%。     

甜瓜种子蛋白多态性与品种纯度快速鉴定方法研究

以杂交伽师瓜1号、雪里红、9808的杂交种及其父母本为实验材料,探讨了用种子蛋白多态性快速鉴定甜瓜杂交种品种真实性与纯度的方法及可行性.电泳结果表明,甜瓜种子中虽然含有一定量的蛋白,但含量较低,而且多态性较差,不同组分的种子蛋白没有特异性谱带,因此,种子蛋白电泳鉴定法不能用于甜瓜杂交种的鉴定.AUG-PAGE(醋酸尿素甘氨酸-聚丙烯酰胺凝胶电泳系统)是一种新的种子蛋白多态性研究方法,其分离胶溶液为10%丙烯酰胺、0.2%甲又双丙烯酰胺、2%冰醋酸、10%尿素、0.4%醋酸钠、0.02%硫酸亚铁的条件下,以1.5%冰醋酸为电极液,具有简单、快速、分离效果好等特点.     

杂交甜瓜种子纯度田间鉴定方法

1 种子批量小区种植鉴定 1．1 取样 每个品种按生产种子的农户为单位，每户取1个样，为确保取样的代表性，一户的生产量在100kg以上者，按200kg为1份鉴定样品取样。 1．2 小区的设计和管理 为了保证鉴定结果的可靠性，被鉴定的植株必须……     

应用分子标记进行蔬菜品种和种子纯度鉴定的研究进展

蔬菜生产在农业中的地位日盖增加,传统的形态鉴定、化学鉴定等方法难以满足蔬菜品种鉴定在精确度方面的要求。因此,以DNA为基础的分子标记作为一种新的鉴定手段开始被广泛应用。本文介绍了目前几种常用的分子标记的原理及特点,综述了国内外主要蔬菜品种和种子纯度鉴定上应用分子标记的研究进展。     

利用等电聚焦技术鉴定杂交水稻种子纯度

等电聚焦电泳是分离蛋白质（同工酶）最有效的方法之一，本文以杂交水稻特优524（F1）及其父本、母本的种子为材料，对它们胚芽时期的酯酶等同工酶进行等电聚焦电泳分析。结果表明：特优524（F1）的酯酶同工酶有4条酶带，其父本有2条酶带，其母本有3条酶带，混杂种子有5条酶带。测出此杂交水稻种子的纯度为94．6％，与田间鉴定相符合。     

利用籽粒形态鉴定玉米杂交种纯度的方法

以玉米杂交种的粒色和顶色两个性状作为标志性状，并利用种子的花粉直感现象，可能直接鉴定玉米杂交种子纯度。     

等电聚焦同工酶电泳技术鉴定甘兰一代杂种纯度

等电聚焦丙烯酰胺凝胶电泳方法分析了京丰一号、中甘十一甘兰一代杂种及双亲幼苗的过氧化物同工酶,共分离出12条谱带,两个杂交组合F_1杂种与亲本间同工酶图谱表现出明显不同,均为互补型差异。在此基础上,我们开展了应用等电聚焦电泳技术对甘兰杂交种纯度的检测,并同时在田间进行验证性测定,酶谱纯度和田间纯度二者回归方程式为y=7.93 0.93x,相关系数r=0.96.对r进行t测验t=4.47>2.79(t_(0.01)=2.79,n=26),表明同工酶测定和田间测定结果之间存在着极显著的正相关关系。