不同保藏处理的蜘蛛标本基因组DNA提取

DNA的提取是分子生物学研究的基础技术,提取的DNA的纯度及结构的完整性是进行基因工程各项研究所必须的条件。采用SDS法,对75%乙醇浸泡标本、无水乙醇浸泡标本、-70°C冷冻标本及活体蜘蛛进行了基因组DNA提取。经比较,活体蜘蛛、-70°C冷冻标本和无水乙醇浸泡标本提取效果较好,75%乙醇浸泡标本提取效果最差。     

两种蜘蛛基因组DNA提取方法的比较

昆虫基因组DNA的提取是对昆虫在分子水平上进行研究的关键,提取的DNA的纯度、浓度及结构的完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件。比较了酚抽提法和盐析法提取的蜘蛛基因组DNA。盐析法简便、快速,对设备和试剂要求都不高,且提取出的蜘蛛基因组DNA完整性和纯度都可满足实验的要求。盐析法不仅适用蜘蛛类,对其他节肢动物基因组DNA提取也有一定的借鉴作用。     

一种适用于甘蔗SSR-PCR的DNA快速提取方法

以不同甘蔗品种幼苗期幼嫩叶片为材料,以改良SDS法和DNA快速提取法对甘蔗基因组DNA进行提取,并以SSR-PCR检测比较两者的扩增效果。结果表明,两种方法提取获得的基因组DNA条带基本一致,条带较为清晰,重复性好且稳定,均可满足SSR-PCR扩增的需要。但DNA快速提取法简化了SDS改良法,具有高通量、操作方便、简单、快速、成本低、DNA存放时间较长等优点,能在较短时间内完成大量样品的DNA提取。     

一种适用于太湖底泥基因组DNA的提取方法

采用6种方法对太湖底泥基因组DNA进行提取,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定和PCR扩增效果等反映DNA纯度和质量的指标,综合分析不同提取方法的优劣.结果显示,在提取过程中使用溶菌酶优于使用蛋白酶,冻融和TENP前处理过程耗时且效果不佳,二次沉淀在提高DNA纯度中起关键作用.结果表明,溶菌酶-SDS-二次沉淀法是一种适用于太湖底泥基因组DNA的提取方法,提取的DNA质量好、纯度高,更胜于包括土壤DNA快速抽提试剂盒在内的其他5种方法,可直接用于对DNA质量要求较高的后续试验中.     

一种广泛适用于植物基因组DNA提取的方法

[目的]研究植物基因组DNA提取方法,为从植物组织中快速提取基因组DNA提供指导。[方法]在已发表的植物基因组DNA提取方法基础上,对SDS提取法的操作步骤、试剂用量及作用时间进行了优化。[结果]初步建立了一种广泛适用于各类植物及植物多种组织器官的基因组DNA提取方法。所提取的基因组DNA质量较好,满足下一步操作的要求。[结论]该研究结果为植物基因组DNA的快速提取提供了指导方法。     

5种方法对蝴蝶干标本DNA的提取效果研究

[目的]研究蝴蝶干标本DNA的提取方法。[方法]采用5种不同的方法（SDS法、SDS-巯基乙醇-酚法、CTAB法、饱和NaCl法、SDS-巯基乙醇-氯仿法）对蝴蝶干标本DNA进行提取。[结果]SDS-巯基乙醇-酚法、饱和NaCl法和SDS-巯基乙醇-氯仿法适合蝴蝶干标本基因组DNA的提取,并且能成功地应用于蝴蝶线粒体基因COI、CytB和核基因EF-1α的PCR扩增。[结论]SDS-巯基乙醇-酚法、饱和NaCl法和SDS-巯基乙醇-氯仿法可以用于研究蝴蝶干标本DNA的抽提,为蝴蝶的分子系统进化研究奠定了基础。     

豆象干标本基因组DNA提取方法的改进

[目的]筛选豆象干标本基因组DNA的有效提取方法。[方法]以口岸截获时间不等的豆象干标本为材料,在传统方法上加以改进,对从干标本中提取豆象基因组DNA的方法进行了研究。将其所提取的基因组DNA的纯度和浓度与CTAB法和SDS法进行了比较,并对DNA进行了完整性及PCR验证。[结果]与CTAB法和SDS法相比,豆象干标本提取方法提取的DNA OD260/OD280值均在1.7~1.9,且浓度合适。DNA完整性及PCR验证结果表明,豆象干标本提取方法比较适合后续PCR试验的开展。[结论]豆象干标本提取方法适合该研究中豆象干标本基因组DNA的提取,可推广到检验检疫工作中截获豆象的检疫鉴定中,以缩短检验检疫工作周期,提高检验检疫工作准确性。     

一种适用于PCR的土壤微生物DNA的提取方法

[目的]对土壤微生物的DNA进行提取,以建立一种适用于PCR技术分析的土壤微生物DNA的快速提取方法。[方法]采用了2种不同的直接裂解法提取土壤微生物DNA,并用细菌通用引物27F和1492R进行PCR扩增16SrDNA片段。[结果]2种方法提取的土壤微生物总DNA电泳结果显示没有差别,但是只有CTAB、溶菌酶、冻融裂解法提取的总DNA不需要纯化,在增加Mg^2＋用量的条件下,只需用第一轮非特异PCR产物作为模板即可扩增出16SrDNA片段。[结论]CTAB、溶菌酶、冻融裂解法提取土壤DNA,方法操作简单、快捷。同时适用于PCR分析。为土壤微生物群落结构的多样性分析奠定了基础。     

一种适用于PCR的环境友好型高质量植物DNA提取方法

改进DNA提取方法，利用含2%CTAB、1%SDS、2% PVP、100 mmol/L Tris-Cl (pH8.0)、20 mmol/L EDTA (pH8.0)和1.4 mol/L NaCl的DNA提取缓冲液，提取了不同种属12种植物的DNA，并对其进行了PCR检测．结果显示，所提取的DNA符合PCR试验要求，用真核生物ITS4/ITS5通用引物均能扩增出清晰的条带．该方法无需酚仿抽提，简单、高效、环保，特别适合大规模植物DNA的提取．     

5种方法对蝴蝶干标本DNA的提取效果研究(英文)

[目的]研究蝴蝶干标本DNA的提取方法。[方法]采用5种不同的方法(SDS法、SDS-巯基乙醇-酚法、CTAB法、饱和NaCl法、SDS-巯基乙醇-氯仿法)对蝴蝶干标本DNA进行提取。[结果]SDS-巯基乙醇-酚法、饱和NaCl法和SDS-巯基乙醇-氯仿法适合蝴蝶干标本基因组DNA的提取,并且能成功地应用于蝴蝶线粒体COI、EF-1α和CytB基因的PCR扩增。[结论]SDS-巯基乙醇-酚法、饱和NaCl法和SDS-巯基乙醇-氯仿法可以用于研究蝴蝶干标本DNA的抽提,为蝴蝶的分子系统进化研究奠定了基础。     

苹果黑星病菌DNA提取方法研究

采用CTAB法、SDS法、Parker法及改进的SDS法提取苹果黑星病菌的DNA,经紫外分光光度计测定,改进SDS法提取的DNA得率较其他3种方法高,约为Parker法的2倍。改进SDS法提取的DNAA260nm/A280nm值为1.700～1.900,DNA纯度较高,而其他3种方法提取的DNAA260nm/A280nm值均高于1.900,DNA中所含RNA的量较高。4种方法提取的DNA在230nm波长处的吸收值分别为0.658,0.257,0.926和0.208,说明DNA不同程度地被酚类物质所污染,但改进的SDS法提取的DNA受污染程度最小。     

核桃乳DNA提取方法优化与DNA条形码鉴定

随着乳饮料行业快速发展,掺杂使假现象层出不穷,对核桃乳真实成分的准确鉴定变的尤为重要。核桃乳属深加工食品,DNA破坏严重,DNA提取是开展核桃乳DNA条形码鉴定的首要环节。为优化核桃乳DNA提取方法,并基于psbA-trnH基因DNA条形码建立核桃乳的掺假造假鉴定方法。以10种不同品牌的核桃乳为样品,采用3种方法(静置抽提、异丙醇沉淀、抽真空冻干)进行预处理,再用2种CTAB裂解沉淀方法和3种试剂盒方法(康为新型植物基因组DNA提取试剂盒、爱思进植物基因组DNA提取试剂盒和天根深加工食品DNA提取试剂盒)提取核桃乳DNA,并在此基础上创新尝试了CTAB与爱思进试剂盒结合方法。以提取的市售核桃乳DNA为模板,利用自行设计的特异性基因psbA-trnH-wal鉴定样品中是否含有核桃成分,确定造假情况;选择常见植物候选基因psbA-trnH鉴定样品中是否含有其他成分,确定掺假情况。结果表明,抽真空冻干预处理方法优于其他2种预处理方式。CTAB与爱思进试剂盒结合方法能提取到纯度好、得率高、扩增能力强的核桃乳DNA,是最佳的核桃乳DNA提取方法。扩增及比对结果显示,1款核桃乳样品中含有花生,属于掺假产品。抽真空冻干预处理、CTAB与爱思进试剂盒结合为优化后的核桃乳DNA提取方法,psbA-trnH-wal基因和psbA-trnH基因结合能够对核桃乳及其掺假造假品进行快速准确的鉴定。     

CTAB法在金黄色葡萄球菌DNA提取中的应用

金黄色葡萄球菌Staphylococcus aures（以下简称金葡菌）是革兰氏阳性球状菌,直径0．8～1．0μm,呈葡萄状排列,有些菌株具有荚膜或黏层,广泛分布于空气、土壤、水、食具以及患有化脓性皮肤病人畜的皮肤上。金葡菌是引起食品污染和细菌性食物中毒的一种主要细菌,食品受其污染后,不仅腐败变质,     

一种快速提取野生稻总DNA的方法

在常规CTAB的基础上建立一种快速提取纯化野生稻总DNA的方法，这种快速提取法能在短时间内处理大批量的材料，具有简便、快速、经济、稳定等优点。用这种方法提取的DNA作为模板进行PCR扩增，和用常规的CTAB法提取的DNA作为模板结果一致。因此，用这种方法提取的DNA质量完全可以满足植物分子标记分析的需要。     

空肠弯曲菌质粒DNA提取条件的优化

在碱解法的基础上,优化了提取空肠弯曲菌质粒DNA的条件。细菌经37℃,5%CO2培养48h后,每个样品以长满一个φ90mm平板(约2.86×106个/mL)的细菌用量为宜;溶菌液的最适SDS浓度和pH值为2%和12.0～12.5;最适温育温度和时间为55℃、60min。在该条件下用该方法提取了219株不同畜禽来源的空肠弯曲菌质粒DNA,质粒阳性率为10.96%,最大质粒DNA108kb,最小质粒DNA1.9kb。     

油橄榄总DNA提取技术研究

采用3种方法(CTAB法、SDS法、试剂盒法)提取油橄榄叶片基因组DNA.分别从叶片质量、提取液的选择、PVP含量、抽提程序改进等方面设计试验,探索出适宜油橄榄DNA提取的优化反应体系,为油橄榄群体分子生物学的研究提供一个经济、简便、有效的DNA提取方法.     

改良SDS法提取多种植物基因组DNA研究

结合传统SDS法提取DNA和Silica吸附柱纯化DNA的优点,建立了能进行多种植物基因组DNA提取的改良SDS法,为提取植物基因组DNA通用方法的建立提供了参考。     

适于AFLP分析的核桃幼叶DNA提取方法

以核桃幼叶为材料,采用改良CTAB法对核桃DNA提取进行了研究。经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,在CTAB提取液中添加3%PVP40、50mmol/Lβ-巯基乙醇和10mmol/LNa2S2O5,能得到高纯度的总DNA,OD260/OD280在1 8～2 0之间,蛋白、多糖、RNA等去除较彻底,适于AFLP分析。     

一种快速高效适于柑桔AFLP分析的DNA提取方法

利用改进的CTAB法提取了柑类、桔类、橙类及部分柑桔杂交实生后代等120多个品种的基因组,结果表明:该方法提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8～1.9,1%琼脂糖凝胶电泳为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象,DNA的纯度和质量能满足AFLP分析要求.