雄性关中奶山羊胎儿生殖细胞增殖分化的研究

旨在阐明山羊胚性腺的发生规律,这对于山羊的繁殖育种、丰富胚胎学有关研究内容都具有重要意义。该研究对22枚从39日胎龄胎儿至初生奶山羊性腺进行石蜡组织切片,用组织学和免疫组化、免疫荧光方法对山羊胎儿性腺发育的组织学特点,山羊胎儿性腺发育过程中VASA及细胞增殖核抗原(PCNA)     

关中奶山羊胎儿皮肤显微结构的观察

有关山羊皮肤组织结构的研究一直为国内外学者所关注,他们分别从不同的角度研究了各地区不同品种的山羊皮肤及其衍生物的组织结构[1-6],关中奶山羊是关中地区特有的山羊品种,本试验旨在通过常规组织学研究方法,对关中奶山羊皮肤的整体发育进行详细观察,以探索山羊胎儿皮肤生长发育的规律,从而为定向繁殖、培育地方良种及丰富家畜胚胎学的内容提供理论依据.     

提高梅花鹿母鹿雄性胎儿出生率的初步研究

我们连续５年利用调整日粮结构及微量元素含量，添加碳酸氢钠等方法均获得一致效果，提高梅花鹿母鹿雄性胎儿出生率达５５．３％。     

关中奶山羊规模化胚胎移植技术研究

为了探究在不同月份采用不同超数排卵(以下简称超排)和胚胎移植处理对关中奶山羊规模化胚胎移植效果的影响,试验将248只高产供体关中奶山羊母羊分别于8,9,10月份分3批进行超排处理,每批又分为试验1组和试验2组,试验1组采用“前列腺素(PG)+孕酮栓(CIDR)+促卵泡素(FSH)+促黄体素释放激素A3(LHRH-A3)”的方式进行超排处理,试验2组在试验1组基础上添加孕马血清促性腺激素(PMSG)进行超排处理,供试母羊排卵后采用公羊自然配种,收集供体母羊胚胎并筛选有效胚胎进胚胎移植,试验期间测定平均黄体数、平均冲胚数、平均有效胚胎数、超排率;将1 770只受体关中奶山羊母羊分别于8,9,10月份分3批进行胚胎移植,每批又分为试验A组和试验B组,试验A组采用腹腔镜胚胎移植手术进行胎移植,试验B组采用常规胚胎移植手术进行胚胎移植,胚胎移植后进行妊娠诊断,母羊产羔后记录产羔数,试验期间测定手术时间、手术效率、妊娠率、产羔率。结果表明：试验2组的平均黄体数、平均冲胚数和平均有效胚胎数均极显著高于试验1组(P<0.01),超排率高于试验1组,但差异不显著(P>0.05);8,9,10...     

关中奶山羊部分繁殖性能的观测

关中奶山羊是陕西关中地区正在培育的奶山羊品种,现存栏70多万只,1978年以来已向全国28个省市推广30多万只。但关中奶山羊繁殖性能研究报道尚少。我们于1985—1986年,对关中奶山羊的部分繁殖性能进行了观测。现报告如下: 一、项目及方法     

关中奶山羊泌乳期饲养管理

近年来,陕西省推进发展千亿级奶山羊全产业链项目,其主要推广畜种为关中奶山羊。关中奶山羊是20世纪30~40年代萨能奶山羊和关中地区山羊杂交的后代,近几十年,陕西省畜牧技术工作人员又大量用西农萨能奶山羊进行改良,不断选育,形成单产高、产奶量稳定、繁殖率高、耗料量少、适合关中地区生长的优良品种,1991年通过国家品种审定。     

卵泡刺激素诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究

文章探讨了卵泡刺激素(FSH)诱导鸡胚胎干细胞(ESCs)向雄性生殖细胞分化的作用效果。首先对FSH的适宜诱导浓度进行筛选,再将传至2代的ESCs,在RA和支持细胞诱导的基础上添加适宜浓度的FSH进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。筛选出适宜的FSH浓度为25 ng/mL。单独使用FSH诱导,未出现类SSCs样细胞;FSH与支持细胞诱导至第6天出现类胚体,至第12天,出现少量精原样细胞;FSH联合支持细胞和维甲酸(RA)进行诱导,至第2天出现类胚体,第12天出现类SSC样细胞。实时荧光定量PCR结果显示,FSH+支持细胞组、FSH+支持细胞+RA组中,Stra8、integrinβ1、Dazl表达量都持续上调,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下调趋势。添加FSH的诱导组中Stra8的表达量相对于各对照组上调显著。FSH单独诱导不能引起ESCs向雄性生殖细胞分化,但具有促进支持细胞和RA诱导ESCs向雄性生殖细胞分化的作用效果,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。     

崂山奶山羊永生化骨髓间充质干细胞的诱导分化研究

为研究崂山奶山羊永生化骨髓间充质干细胞(BMSCs)的诱导分化潜能,采用P3代BMSCs和P30代TERT-BMSCs进行体外成脂和成神经诱导分化。结果显示,当细胞传至P30代时,TERT-BMSCs生长旺盛;在成脂诱导后,P3代BMSCs和P30代TERT-BMSCs均能观察到细胞中透明脂滴的形成,油红O染料染色后可见脂滴被染成红色;在成神经诱导后,P3代BMSCs和P30代TERT-BMSCs均能形成树突样或三角形的形态,甲苯胺蓝染色后可观察到细胞中尼氏体的存在。综上提示,永生化的崂山奶山羊BMSCs在多次传代后仍具有较强的多向诱导分化能力,这为永生化MSCs的广泛应用提供了理论依据。     

无血清培养关中奶山羊胚胎生殖细胞的研究

山羊胚胎生殖细胞是一种来源于胎儿原始性腺的多能干细胞,建立该细胞体外稳定分离培养体系对研究山羊繁殖育种具有重要价值。本试验通过酶消化法和组织培养法分离培养关中奶山羊胚胎生殖细胞,检测无血清培养基对细胞体外增殖的影响。结果发现,该培养基可以分离得到山羊胚胎生殖细胞,细胞集落形态典型,表达AKP、Oct4、TERT及SSEA-1。经体外分化试验表明,细胞可以分化为类胚体、成纤维样细胞、成脂细胞和卵母细胞样形态。无血清培养基可以用于山羊胚胎生殖细胞的分离与培养,本试验对进一步建立山羊胚胎生殖细胞长期培养体系提供了新的参考。     

黄金伴侣对关中奶山羊生产性能的影响

[目的]探讨黄金伴侣对关中奶山羊生产性能的影响,[方法]在富平县流曲镇双杨村向忠奶山羊场选取月龄、体重相近的健康关中奶山羊产奶羊60只,采用配对试验设计方法,试验组日粮中添加黄金伴侣,对照组不添加,两组饲养管理条件完全相同。[结果]试验组奶山羊日均产奶量提高0.4 kg,提高22.22%(P0.05),饲料转化率提高19.38%(P0.05)。日增重增加0.90 kg(P0.05);平均日增重增加0.15 kg(P0.05)。日纯收入增加2.06元。经济效益提高33.40%(P0.05)。[结论]在关中奶山羊日粮中添加黄金伴侣,奶山羊产奶量、饲料转化率和日增重均增加,经济效益提高。     

Polymorphism Analysis of PIS Region Sequence in Guanzhong Dairy Goat

Polled trait of goat is important economic trait in livestock production,goat polled intersex syndrome (PIS) influenced polled phenotype and intersex phenotype of goats. PIS sequence locats in a approximately 11.7 kb nucleotide sequence in chromosome 1. This experiment was aimed to study the effect of PIS sequence on polled phenotype in Guanzhong dairy goats (3 horned goats, 3 polled goats). The PIS whole sequence in Guanzhong dairy goats were amplified using four pair of primers (PIS1-1, PIS1-2, PIS2 and PIS3), the whole absence of PIS sequence was detected using the fifth primer (PIS whole). The sequencing result was assembled, analyzed and annotated. The result showed that the PIS sequence full length was 12.814 kb, and the BLAST alignment result was correct. PIS whole primer didn't amplify any srtipes, which showed that there was no a total deletion of 11.7 kb in Guanzhong dairy goats. SeqMan software analysis result showed that there was a total of 30 polymorphic sites, wihch were likely to connect with polled/horned phenotype in Guanzhong dairy goats. The annotation result of concatenation sequence showed that there were one tRNA encoding locus, two microsatellites, three microRNA encoding loci, L1-EN conserved domain, RT-nLTR-like conserved domain, also find a CpG island, one pair of inverted repeats, and two tandem repeats. This experiment result had a significant reference value for studying the molecular mechanism of polled phenotype in Guanzhong dairy goats.     

关中奶山羊PIS区域序列多态性分析

山羊无角性状是畜牧业生产中重要的经济性状,报道显示山羊无角间性综合征（polled intersex syndrome,PIS）控制着山羊的无角和间性性状。山羊PIS序列定位于1号染色体约11.7 kb的序列上,试验旨在研究这段序列对关中奶山羊（3只有角山羊、3只无角山羊）无角性状的影响。选用4对引物（PIS1-1、PIS1-2、PIS2、PIS3）扩增关中奶山羊的PIS序列,第5对引物（PIS whole）用于检测PIS序列的完全缺失,对测序结果进行拼接、多态性分析,并对序列进行基因注释。结果发现,试验成功扩增出山羊PIS的全长序列（12.814 kb）,BLAST比对结果正确。PIS whole引物没有扩增出任何条带,说明关中奶山羊中不存在11.7 kb的完全缺失。经SeqMan软件分析拼接序列发现30个多态性位点,这些多态性位点可能与关中奶山羊有角/无角性状相关。对拼接序列进行基因注释,发现存在1个tRNA编码位点、2个微卫星、3个microRNA编码位点及L1-EN、RT-nLTR-like样保守结构域,并发现1个CpG岛、1对反向重复序列和2段串联重复序列。本试验结果对关中奶山羊无角性状的分子机理研究具有重要的参考价值。     

视黄酸诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究

体外胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）向生殖细胞分化可用于治疗不育症,同时也为揭示种系世代的分子机制提供最佳模型。试验旨在探讨视黄酸（retinoic acid,RA）诱导鸡胚胎干细胞（chicken embryonic stem cells,cESCs）向雄性生殖细胞（male germ cells,MGCs）分化的作用效果。利用胰蛋白酶消化法从新鲜种蛋X期鸡胚中分离胚胎干细胞,以鸡胚成纤维（chicken embryo fibroblast,CEF）细胞为滋养层,进行体外培养,利用形态法、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,AKP）染色和胚胎阶段特异性表面抗原（embryo specific surface antigen 1,SSEA-1）检测对获得的胚胎干细胞进行鉴定。结果表明,获得典型的呈巢状或岛状的cESCs克隆,细胞AKP染色呈蓝紫色,表明其具有较高的内源性AKP活性;SSEA-1鉴定结果呈阳性,显示cESCs克隆具有多能性。采用10^-5 mol/L RA诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化,镜下观察细胞形态变化,分别于诱导第0、2、4、6、8、10天提取细胞总RNA,反转录成cDNA,用于实时荧光定量PCR检测生殖细胞标志基因的表达。结果表明,在此诱导过程中,作为胚胎干细胞标志基因Nanog、Sox2表达量持续显著下降,而生殖细胞特异性基因Dazl、Stra8、c-kit、integrin α6表达量呈持续上升趋势;免疫细胞化学检测可观察到特异基因相关蛋白的阳性克隆。本研究成功分离出cESCs,可体外培养并保持未分化状态及多能性。10^-5 mol/L RA能够促进cESCs向雄性生殖细胞方向分化,可以引起生殖细胞相应基因的表达,为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供参考。     

不同因素对山羊原始生殖嵴细胞体外分离培养与克隆的影响

从本地槐山羊胎儿中,将原始生殖细胞与其生殖嵴周围组织细胞共同分离,经传代培养后获得了具有干细胞特征的山羊胚胎生殖(EG)细胞。结果表明:高糖DMEM培养基和低糖DMEM培养基相比较,低糖DMEM更适宜于山羊EG细胞的分离与克隆;EG细胞在山羊胎儿成纤维细胞饲养层上生长效果较好,可传4代或5代,而在小鼠成纤维细胞饲养层上EG细胞仅传3代;联合添加白血病抑制因子(LIF)、干细胞因子(SCF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)能显著提高山羊EG细胞分离与克隆的效率;胎龄为30～45d的胎儿原代培养时可获得大量的细胞集落,克隆培养可传至5代,适合做山羊EG细胞的分离培养。     

奶山羊资源及其弓形虫感染情况的研究进展

奶山羊产业在现代化的畜牧业经济发展中占有重要的地位。弓形虫的感染严重影响奶山羊的生产繁殖性能,给奶山羊业造成了巨大的经济损失。奶山羊也是引起人感染弓形虫的重要来源因素之一,严重威胁人类的健康。文章主要对我国奶山羊资源、奶羊业及国内外奶山羊弓形虫感染情况等方面进行了综述,以期更好地了解奶山羊及其弓形虫感染的情况,为奶山羊产业的健康发展及其相关研究提供参考。     

显微注射生产转人胰岛素原基因奶山羊

将构建的绵羊β－乳球蛋白基因（BLG）调控人胰岛素原基因的重组基因通过显微注射生产转基因奶山羊。同期化超排处理供体奶山羊15只，排卵262枚，回收卵221枚，移植206枚注射卵，移植受体68只，怀孕21只（妊娠率33％，其中成年母羊妊娠率为58．62％，周岁母羊为9．4％），产羔33只，其中母羊羔8只，公羔25只。经PCR检测及酶切分析，证明有5只为阳性，阳性整合率15．15％，但5只全为雄性。     

关中奶山羊乳房炎病理模型的建立

为建立关中奶山羊乳房炎模型,用分离的乳房炎病原菌,按照大肠埃希菌3×103 cfu/mL、金黄色葡萄球菌3×102 cfu/mL剂量,分别对关中奶山羊进行乳头管灌注.在不同时间点,观察测定产奶量、精神状况、食欲、乳汁外观、乳房性状、体温、体细胞数(LMT法)等指标,并进行病理学检查和病原菌分离鉴定.结果显示,攻菌后奶山...