猪圆环病毒2型对体外培养的仔猪淋巴细胞抗氧化能力的影响

为进一步了解猪圆环病毒2型(PCV-2)引起淋巴细胞凋亡的机理,测定了PCV-2对体外培养的仔猪淋巴细胞抗氧化能力的影响。取培养后0,2,6,24,48 h的上清液和细胞,用试剂盒测定上清液中总抗氧化能力、一氧化氮(NO)含量、超氧阴离子自由基活性和超氧化物岐化酶活力的变化,同时测定淋巴细胞内一氧化氮合酶(NOS)活力。结果表明,试验组与对照组总抗氧化能力无显著性差异(P>0.05);试验组抗超氧阴离子自由基活性与对照组相比,除了0 h,其他时间点试验组均显著高于对照组(P<0.05);总超氧化物岐化酶活力试验组和对照组均维持在19 U/mL左右,无显著差异(P>0.05);NO含量除24 h时试验组高于对照组外(P<0.05),其余时间两组间差异不显著;细胞内NOS活力除0 h外,其余时间均是对照组高于试验组,且2、24 h显著增高(P<0.05);对照组诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活力6 h时显著高于试验组(P<0.05),其余时间(0 h除外)也较试验组高。     

PCV2感染对仔猪NO-NOS系统的动态影响

将19头PCV2和PRRSV血清抗体阴性的普通断奶仔猪分为对照组(4头)和攻毒组(15头),攻毒组每头仔猪滴鼻接种PCV2病毒悬液4mL(5×105 TCID50/mL)并用KLH刺激,分别在攻毒后14、21、35d各扑杀5头仔猪采集血清和脾脏、淋巴结、胸腺(对照组4头在攻毒当天扑杀)。检测各种组织中NO、TNOS和iNOS的含量。结果显示,攻毒猪各组织中NO含量均在攻毒后14d显著升高(P<0.05),然后缓慢下降;血清和3种免疫器官中NOS(包括TNOS和iNOS)活性的变化趋势比较一致,均表现出先升高然后再逐渐降低的特点。此外,iNOS活性变化与其相应的组织中NO含量呈显著正相关(P<0.01)。结果表明,PCV2在感染早期(1～14d)可激活仔猪多种组织中NO-NOS系统,中后期逐渐恢复,这种变化与PCV2所致的组织损伤密切相关,因此,NO-NOS系统可能是PCV2相关疾病发生发展的重要信号。     

PCV2对体外培养仔猪脾细胞分泌细胞因子的动态影响

为进一步了解猪圆环病毒2型(PCV2)引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的机理,选取5头35日龄PCV2血清抗体阴性的断奶仔猪,无菌取脾脏制成单个细胞悬液,体外培养,分PCV2感染组与对照组。分别在培养后0 h、6 h、12 h、24 h收获细胞培养上清,用猪特异性ELISA试剂盒测定上清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)的含量。结果显示:病毒组IL-1β和IL-6在不同时间点的含量变化均不显著(P>0.05),IL-1β在6 h、24 h略高于对照组,12 h则低于对照组;IL-6除在6 h高于对照组外,其余时间点均低于对照组;病毒组TNF-α和IL-10的含量在6 h、12 h、24 h均高于对照组,且TNF-α在6 h和24 h极显著升高(P<0.01),而IL-10在12 h显著高于对照组(P<0.05)。上述结果表明:PCV2能影响体外培养的仔猪脾细胞某些细胞因子的分泌,而且可能通过TNF-α的高表达促使机体产生全身炎症反应综合征甚至多系统衰竭,而通过IL-10的高表达促使机体产生免疫抑制。     

猪圆环病毒2型感染对仔猪免疫功能的影响

为研究猪圆环病毒2型(PCV2)对宿主免疫应答的动态影响,选取19头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,随机分为对照组(4头)和试验组(15头),试验组每头仔猪接种PCV2病毒悬液,分离攻毒后0、3、7、14、21、28和35 d仔猪外周血淋巴细胞和血清,用MTT法检测外周血淋巴细胞的转化率,并用ELISA法检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6和IL-10的表达变化。结果显示,脂多糖(LPS)刺激下仔猪外周血淋巴细胞的转化率在攻毒后各时间点均极显著降低(P0.01);植物血凝素(PHA)刺激下仔猪外周血淋巴细胞的转化率在攻毒后3、21和28 d极显著降低(P0.01),在攻毒后14 d显著降低(P0.05);与对照猪相比,攻毒猪血清中IL-6的含量在攻毒后各时间点均无显著变化(P0.05);IL-1β的含量在攻毒后7 d显著升高(P0.05),IL-10的含量在攻毒后35 d极显著升高(P0.01);IL-2的含量在攻毒后7 d显著降低(P0.05),在攻毒后21 d显著升高(P0.05),在攻毒后28和35 d均极显著升高(P0.01)。结果表明,PCV2能显著抑制仔猪外周血T、B淋巴细胞的转化能力,并能激活机体的固有免疫应答,但同时能导致适应性免疫应答的活化出现迟滞并在攻毒后期引起免疫调节紊乱。     

海藻多糖可溶性粉对感染PCV2仔猪细胞因子含量的调节作用

为探索海藻多糖可溶性粉对自然感染PCV2仔猪血清中细胞因子的调节作用,随机选取80头35-50日龄自然感染PCV2的仔猪,设海藻多糖可溶性粉高(400 mg/kg)、中(200 mg/kg)、低(100 mg/kg)剂量组及黄芪多糖对照组,连续用药7 d;另设阳性对照组和无PCV2感染阴性对照组,每组20头。从给药开始连续14 d观察仔猪临床症状,分别于用药前、用药后第7、14天,每组随机选取10头前腔静脉采血,检测血清中IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ及IgG水平。结果显示,相比于用药前,在用药后第7、14天,各用药组临床症状改善明显;血清中IL-2、IL-6、IFN-γ、TNF-α、IgG含量有不同程度升高。结果表明,给予不同剂量的海藻多糖可溶性粉7 d,可提高自然感染PCV2的仔猪免疫能力,且临床推荐给药剂量为200 mg/kg饲料,连用7 d。     

PCV2疫苗对仔猪体重和死亡率的影响

许多养猪生产者发现,在开始对仔猪接种猪圆环病毒2型(PCV2)疫苗后,猪场生产效益要好于PCV2感染之前。这是怎么回事呢?     

猪场母猪与仔猪猪圆环病毒2型感染情况调查

为了解目前母猪和仔猪猪圆环病毒2型(PCV2)感染情况,本试验对来自于15个猪场的85份母猪血清和29个猪场的55份仔猪可疑病料(脾脏、淋巴结、肾脏等),分别采用间接ELISA和PCR法进行PCV2抗体和病毒核酸检测。结果显示,在15个猪场中,1个猪场母猪抗体呈阴性,其他14个猪场母猪抗体均呈阳性,猪场PCV2阳性检出场为93.3%(14/15),85份母猪血清抗体总阳性率为75.3%(64/85)。29个猪场的仔猪,PCV2核酸检测阳性猪场为19个,猪场阳性率为65.5%(19/29),55份仔猪可疑病料病毒核酸检测总阳性率61.8%(34/55)。可见,母猪和仔猪感染PCV2相当普遍。对母猪群PCV2抗体阳性率及其仔猪群病毒核酸阳性率进行比较发现,母猪群PCV2抗体阳性率越高其仔猪群病毒核酸阳性率却越低。     

日粮添加谷氨酰胺对早期断奶仔猪抗氧化能力的影响

本试验选用大长北母猪产仔猪45头,21日龄断奶并宰杀5头公仔猪作为哺乳对照,其余40头随机分为试验组和对照组,每组20头公母各半。试验组日粮添加1.2％的谷氨酰胺,以研究添加GLN对早期断奶仔猪血浆GLN浓度以及血浆、肝脏、肠粘膜、肠系膜淋巴结和脾脏中GSH和SOD水平的影响。结果表明:试验组仔猪28日龄和35日龄血浆GLN水平极显著高于对照组（P<0.01）;试验组仔猪,血浆还原型谷胱甘肽水平35日龄和49日龄时高于对照组（P<0.01）;肝脏和肠系膜淋巴结中还原型谷胱甘肽35日龄时高于对照组（P<0.01,P<0.05）,49日龄时有增加但差异不显著;肠道和脾脏中还原型谷胱甘肽含量与对照组相比有增加,但差异不显著。添加谷氨酰胺后,仔猪35日龄时肝脏和49日龄脾脏中SOD均极显著低于未添加组（P<0.01）。由此可见,日粮中添加GLN可以缓解由于早期断奶引起的血浆GLN水平降低,并对维持体内还原型谷胱甘肽起重要作用。     

PCV3自然感染仔猪病例的病理学观察及体内分布

为探究猪圆环病毒3型(PCV3)在感染猪组织器官中的分布规律及其对猪组织产生的病理损伤变化,对广西某地区PCV3感染猪进行临床症状和病理学观察,发现单独感染PCV3病猪呈现典型的断奶仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)症状,镜检发现病例呈现坏死性心肌炎、间质性肺炎、轻度的淋巴细胞性肝炎及免疫器官淋巴细胞消耗型炎症。免疫组化法检测结果发现淋巴组织中信号最强,PCV3阳性信号主要位于单核和巨噬细胞胞质中;PCV3可单独引发仔猪断奶衰竭综合征且23个组织中均有病毒分布。     

TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测PCV2、PCV3和PCV4方法的建立和应用

为建立一种可同时鉴别致病性猪圆环病毒(PCV)不同基因型的检测方法,本试验针对PCV2、PCV3和PCV4的ORF2基因保守区域设计引物和探针,将人工合成目的基因与质粒连接,构建阳性质粒PCV2-ORF2、PCV3-ORF2和PCV4-ORF2。通过优化引物浓度、探针浓度、退火温度等参数,建立PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-MGB多重荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异性、敏感性和重复性。应用建立的方法对38份临床样品进行应用检测,对24个养猪场(户)进行流行病学调查。结果显示,建立的方法能特异性区分PCV2、PCV3和PCV4,且与其他常见猪病病原不发生交叉反应;对PCV2、PCV3和PCV4的最低检出浓度分别为1.56×10、1.28×10和1.76×10拷贝/μL;批内和批间变异系数均小于2%,重复性好;38份临床样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性样品分别为17、3和1份,从24个养猪场(户)采集的689份样品中PCV2、PCV3和PCV4阳性率分别为33.33%、12.50%和8.33%。结果表明,本试验建立的PCV2、PCV3和PCV4 TaqMan-M...     

PCV2仔猪疫苗全球应用经验

来自世界各地的最新研究报告证实,对仔猪接种猪圆环病毒2型(PCV2)疫苗可给不同的气候条件、饲喂方式和管理措施下的养猪场带来众多的好处。本文将对有关PCV2疫苗一次免疫方案的全球应用情况进行全面的综述。     

母源抗体对感染PCV2仔猪体内病毒变化和免疫反应的影响

将16头断奶仔猪随机分成两大组即直接感染组和间接感染组,再将每大组用ELISA测抗体水平并排序分成两小组,即高抗体水平的4头为高起始抗体组,低抗体4头为低起始抗体组。直接感染组注射PCV2攻毒后再注射钥匙孔血蓝蛋白(KLH)刺激,间接感染组不注射与直接感染组混养。Q-PCR检测血清中病毒拷贝数,血常规检测全血中淋巴细胞数,定时称量体质量,屠宰后采样制作HE染色病理切片。结果,HE染色病理切片和临床分析显示感染猪只表现断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)症状;直接感染组和间接感染组攻毒后抗体水平持续降低,且分别在攻毒后20、30d降到相对最低值。直接感染组在攻毒后4d检测到抗原,攻毒后7d低起始抗体组病毒拷贝数显著高于高起始抗体组,间接感染组分别在攻毒后4、7d检测出抗原,攻毒后24、29d低起始抗体组抗原显著高于高起始抗体组;两组中外周血淋巴细胞数量在攻毒后减少,攻毒期间两大组中低起始抗体组和高起始抗体组体质量无差异。结果表明,PCV2+KLH能够复制出PMWS症状;PCV2母源抗体的半衰期为15d左右;低起始抗体组更容易感染病毒;攻毒后起始母源抗体的高低对断奶仔猪增重差异不明显。     

PCV2灭活疫苗对小鼠的免疫效果研究

本研究首先用猪圆环病毒2型种毒攻击Balb/c小鼠,通过病毒分离,找出可使全部小鼠感染的最低病毒含量,然后用该种毒攻击免疫后的Balb/c小鼠,评价免疫保护情况。结果显示,可使小鼠全部感染的种毒最低病毒含量为106.5 TCID50/0.1 mL,当疫苗病毒含量为105.5 TCID50/0.1 mL时即可使7/10免疫小鼠得到保护,达到了疫苗的免疫效果。该研究为现有疫苗的生产工艺改进提供了重要的参考数据。     

NADC30-like PRRSV和PCV2d共感染与继发感染PCV2抗体阳性断奶仔猪的致病性

为了确定近年来国内主要流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NADC30-like谱系与猪2型圆环病毒(PCV2d亚型)共感染与继发感染后对猪的致病作用,使用本实验室分离的NADC30-like谱系PRRSV与PCV2d毒株感染PCV2抗体阳性断奶仔猪。选取30只5周龄PCV2抗体阳性断奶仔猪,随机均分为6组,分别为PBS、PCV2、PRRSV、PCV2-PRRSV、PRRSV-PCV2和Co-PRRSV-PCV2感染组。记录各组临床指征(体温、体质量、临床症状和存活率);检测特异性抗体及TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10共4种细胞因子的变化;并对主要组织脏器的病理变化进行分析。结果显示,各感染组在感染PRRSV后均出现体温升高、体质量减轻、咳喘、腹泻、精神沉郁等临床症状;Co-PRRSV-PCV2、PRRSV-PCV2和PRRSV组表现出更为严重的肉样变和淋巴细胞浸润;先感染PCV2可以延迟PRRSV特异性抗体的产生;PRRSV组表现出高水平的TNF-α和IL-10;NADC30-like PRRSV与PCV2d共感染与继发感染PCV2抗体阳性仔猪会出现严重的临床症状和...     

PCV2感染对猪MCP-1和IL-8mRNA表达的影响

将猪圆环病毒2型（PCV2）BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪，于接种后不同时间宰杀，收集肺泡巨噬细胞（PAM），同时设立对照。用竞争PCR技术测定趋化性细胞因子IL-8和MCP-1 mRNA水平，分析PCV2感染对其mRNA表达的影响。结果显示，与对照组相比，在PCV2感染后第7d，IL-8mRNA水平下降至最低，随后迅速上升，至第14d时达到高峰，而后快速下降，但仍维持较高水平；MCP-1 mRNA水平在攻毒后第3d下降至最低，之后逐渐上升，至第14d时达到高峰，而后下降，第21d以后恢复正常。结果表明，PCV2感染初期可导致PAM趋化性细胞因子IL-8和MCP-1基因的转录明显下调。     

广东地区新生仔猪先天性震颤猪群中PCV3感染情况的调查

对广东省不同地区新生仔猪先天性震颤猪群中PCV3的流行病学情况进行调查。采集的病料样品,通过常规PCR进行PCV3检测与全基因扩增,分析其全基因的遗传进化关系。将获得的16株PCV3毒株核酸序列与其他环状病毒参考毒株对全基因组和Cap基因进行遗传变异分析,结果显示,新生仔猪的先天性震颤猪群中PCV3样本总阳性率高达58.2%。16株PCV3毒株之间全基因核苷酸序列同源性为99.5%~100%,与美洲代表毒株PCV3-US/MO2015全基因核苷酸序列同源性在98.8%~99.1%之间;16株PCV3毒株之间Cap基因的核苷酸序列同源性为99.7%~100%,与国内外参考毒株的核苷酸同源性为99.1%~100%。遗传进化分析显示,16株PCV3毒株都属于PCV3a分支。PCV3在我国广东省新生仔猪先天性震颤猪群中广泛存在。     

关于母猪免疫CIRCOVAC~后PCV2特异性细胞向仔猪传递的研究

<正>猪的上皮绒毛膜胎盘可阻止免疫球蛋白通过胎盘向胎儿的转移,因此仔猪在出生时只能从初乳中获得所有的转移性免疫力。摄入的初乳是仔猪获得母源抗体的     

PCV2a与PCV2b鉴别诊断PCR方法的优化及应用

猪圆环病毒2型（Porcinecircovirustype2,PCV2）是严重危害养猪业的重要病原之一,根据基因组大小可分为2个基因型：PCV2a和PCV2b。为更好地掌握PCV2a和PCV2b在我国猪场的流行情况,本研究对先前的鉴别PCR诊断方法（涉及到引物、PCR体系及程序）进行优化,并应用优化的鉴3qPCR方法对1184份PCV2阳性样品进行检测,结果显示PCV2a占30．5％（36／118）,PCV2b占37．3％（44／118）,共感染占32．2％（38／118）,与常规PCR检测结果符合率为100％,此外,对30份,瞄床送检组织和血清样品也有很高的检出率。部分鉴别PCR扩增的目的产物进行测序及序列进化树分析,表明扩增序列为PCV2a与PCV2b的特征序列。经本研究优化后的鉴别PCR方法易操作、特异性强、敏感性好,可广泛用于临床样品中PCV2a和PCV2b的快速检测。     

PCV2病毒血症对猪的健康极为重要

在猪圆环病毒2型（PCV2）仔猪疫苗进入市场之前,利用定量PCR（qPCR）方法对样本中的PCV2进行检测一直受到质疑。因为PCV2在明显健康和感染动物中都可检测到。这些PCV2检测样本的检测结果实际能说明了什么呢？