青枯假单胞杆菌对木麻黄致病机理的初步研究

通过用病原悬浮液及培养滤液等对木麻黄元根苗和有根苗进行接种处理，发现青枯菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｏｌｏｎａｃｅｚａｒｕｍ Ｅ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ培养滤波对木麻黄具有强烈的致萎作用。小苗枯萎主要是由滤液中毒性物质诱导植物产生填充体堵塞民管所致细菌培养滤液中毒性物质对热稳定，在ｐＨ－４－１０的范围内毒性不受影响、而且能够致萎多种针阔叶树种小枝，个有非特异性。     

青枯菌胞外酶对木麻黄的致病作用研究

对三个致病性不同的木麻黄青枯菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ Ｅ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ产生的胞外酶活性测定显示,聚半乳糖醛酸酶（果胶酶）在活性在各菌之间无明显差别,但纤维素酶活性差别明显,并随菌株的致病性上升而增加,菌株致病性与酶活性具有高度正相关。     

青枯菌胞外酶对木麻黄的致病作用研究

对三个致病性不同的木麻黄青枯菌ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍＥ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ产生的胞外酶活性测定显示,聚半乳糖醛酸酶（果胶酶）活性在各菌株之间无明显差别,但纤维素酶活性差别明显,并随菌株的致病性上升而增加,菌株致病性与酶活性具有高度正相关（ｒ＝０．９６）。     

木麻黄无性系对青枯菌抗性及菌株变异初探

用３个青枯菌菌株，对７个木麻黄无性系作接种测试和菌株兔血清双向琼脂扩散试验，结果表明：木麻黄无性系对青枯菌的抗性以水平抗性为主，也存在垂直抗性；３个菌株致病力顺序与其来源无性系的抗病力顺序相一致，菌株对来源无性系接种死亡率显著高于其它菌株，显示了寄主与病原物相关变异的迹象。从同一地点不同无性系分离的菌株，存在抗原──抗体差异，表明在高抗无性系的选择压力下，青枯菌可能发生变异，而形成能克服特定抗病无性系的菌株。     

木麻黄青枯菌的致病性与其对寄主根表吸附的关系研究

对３个不同致病性的青枯菌菌株接种于７个不同抗性的木麻黄无性系上的研究表明：各菌株间对无性系根表吸附量达显著差异,而无性系间对同一菌株的吸附量差异不显著;根表吸附量与菌株的致病性呈负相关;说明青枯菌对木麻黄根表的吸附,就是两者的识别过程,而识别程度不同,则体现在吸附量的大小上,但是单从吸附量所反映的青枯菌致病性,难以确定出其对苗木最终的感病程度。     

青枯菌对植物的致病机制及其调节

青枯菌引起许多植物及林木青枯病。该菌侵染植物根部,首先在根皮层细胞间隙等处定殖,然后入侵维管束,在木质部导管内扩展危害;细菌在导管及相邻组织内迅猛增殖和广泛散布,由此产生输水管道的阻塞和破坏并最终导致植物枯萎。胞外多糖(EPSI)、细胞壁分解酶(主要是果胶质酶和纤维素酶)、Ⅲ型Hrp分泌系统产物是主要的致病因子,其中EPSI尤为突出,它在保护细菌、促进细菌移动和定殖以及堵塞和破坏寄主导管方面都起着重要作用。而上述致病因子的协调作用则由一复杂的调节系统控制,这一系统由随细菌密度变化而变化的3 -羟基棕榈酸甲基酯水平作为信号,以PhcA调节基因的启动和转录为核心,自动而精密地调节病菌有关致病基因的表达及关闭,并由此控制细菌的生长状态。     

木麻黄根瘤内生菌--弗兰克氏菌对青枯病菌的抑制作用研究

试验结果揭示了木麻黄弗兰克氏菌和木麻黄根瘤浸提液能抑制青枯菌生长,弗兰克氏菌Ｏｒ９３０２和９０２１菌株的抑菌效果比其它供试菌株高;粗枝木麻黄的根瘤浸提液抑菌效果较山地木麻黄和普通木麻黄的抑菌效果好。苗圃试验表明根瘤量高的苗木对青枯病具有较强的抵抗能力。     

大孔吸附树脂纯化木麻黄总黄酮及对青枯菌的抑制

为探索获得较为纯化的木麻黄总黄酮的便捷有效方法,研究了利用大孔吸附树脂分离纯化木麻黄总黄酮的工艺。结果表明：选择D101大孔吸附树脂的最佳工艺条件为吸附液料比20∶1（黄酮粗提液∶大孔吸附树脂,mL.g-1）;吸附液pH为2;解吸液pH为11;最佳静置吸附时间为90 min;乙醇洗脱体积分数为80%;洗脱液料比为20∶1（80%乙醇溶液∶大孔吸附树脂,mL.g-1）。分离到的总黄酮对青枯菌具有明显的抑制作用。同时也证明了气质联用不适于鉴定黄酮类大分子物质。     

木麻黄青枯病菌的分离及强致病菌株的筛选

[目的]筛选出强致病菌株用于木麻黄抗病育种研究工作。[方法]在广东沿海木麻黄青枯病发病区采集病根,开展病原菌两种不同分离方法的比较研究,对分离出的31个病株进行16s rRNA测序鉴定及致病性测定。[结果]采用稀释分离法及根系溢出法在TTC培养基上共分离出了31个病原菌株,根系溢出法操作简便,杂菌含量低,分离率在60%左右,可作为常规稀释分离法的补充。31个菌株进行分子鉴定,只有22个菌株扩增出了特异性条带,经测序比对确定这22个菌株为青枯菌。青枯菌株致病性测定结果显示菌株致病性在无性系间、菌株间及菌株与无性系间的交互作用均具有极显著差异(P0.01),不同接种方法间菌株致病性相关系数值较小,介于0.496 6~0.731 0之间,即室内水培接种与小苗盆栽接种不存在密切的直线相关关系。[结论]综合选择在不同无性系及不同接种方法中均具有较强致病性的GL-2、H、M、TC-1、F、Q菌株作为下一步木麻黄种质资源抗性鉴定及抗病育种研究试验菌株。     

木麻黄青枯菌的根表吸附及根内增殖与其致病性关系

对 3个不同致病的青枯菌菌株和 7个不同抗病性的木麻黄无性系苗的研究得出 ,各菌株对寄主根表吸附量具有显著差异 ,吸附量与致病性呈负相关 :各菌株在寄主根内的增殖量差别明显 ,增殖量与致病性呈正相关。病菌脂多糖 (LPS)对幼苗根的预处理 ,可使其供体菌的吸附量减少5 8.5 %　 97.3% ,但胞外多糖 (EPS)对供体菌的吸附量无明显影响。洗去EPS和LPS的菌体较完整菌体对根表的吸附量减少 6 3.3%　 74 .2 %。而仅洗去EPS的菌体对根表的吸附有所增加 ,最高达19.1%。各菌体SDS PAGE电泳图谱显示出一定差异 ,其中强毒菌株 6 0 1B具有Rf=0 .35的特异谱带。结果表明青枯菌对木麻黄的致病性与其在寄主根表的吸附情况和在根内的快速增殖具有密切关系。LPS在此病理系统中 ,起着细菌识别因子的作用 ,EPS对LPS进行掩盖 ,二者都是病菌致病性的重要因子     

影响木麻黄青枯病抗性测定的几项因素的研究

木麻黄无性系对青枯假单胞杆菌的抗病性测试受到植物材料、接种条件及病级测定三方面因素的影响。研究表明在无根苗与有根苗上病害的发生具有一致性特征,并且与高度相关,但无根苗更为感病。在三种龄期的无根苗中,以木质化的褐梗最为感病,绿梗次之,嫩枝较为抗病。青枯菌在连续培养１４天后接种致病力不减。病害的相对强度在直射光、散射光及灯光等三种光照条件下无明显区别。病害强度随着接种浓度的增加而增高,但当达到一定程度后便趋缓。研究认为在室内以中等浓度的青枯菌液接种木麻黄无根褐梗苗是快速测定其抗性的一个可靠方法,并就采用相对病害强度代替发病株率作为病级指标等问题进行了讨论。     

普通木麻黄抗感青枯病无性系与根瘤固氮活性及生物量关系的研究

对普通木麻黄不同抗病无性系植株的根瘤固氮活性、结瘤量、植株含氮量及生物量进行了测定。结果表明,抗病性强的无性系植株结瘤量、固氮活性比抗病性差的植株高２一４倍;抗病无性系植株生长高大,生物量和含氮量明显比感病无性系植株高。     

木麻黄对青枯菌的水平及垂直抗性研究

６个青枯假单胞杆菌菌株对７个木麻黄无性系的交互接种试验表明，病害的相对强度在无性系与菌株间存在着显著性差异，无性系与菌株之间的交互作用也极显著。结果说明在木麻黄－青枯菌病理系统中，同时存在着水平抗性和垂直抗性或水平致病性与垂直致病性；这一交互作用特征的揭示对于木麻黄的抗病育种及防滑战略具有重要意义。     

尾叶桉作母本的种间控制授粉家系苗期抗青枯病研究

对８１个以尾叶桉为母本的种间控制授粉家和３个母本的自由授粉家系进行苗期青本病菌接种试验表明,接种后母本家系抗病性都较差,种间控制授粉家系间发病指数和死亡率有差异,初步筛选出１个特抗家系和４９个抗性家系。以家系抗病性评价父本树种,细叶桉,赤桉,窿缘桉,雷林一号桉和粗皮桉选育潜力较好,巨桉,巨尾桉和柳桉则较差。对抗生,易感和高感抗病水平各３个种间控制授粉家系进行接种前和接种后过氧化氢酶活性测定表明,家     

桉树对青枯病抗性与过氧化物酶及同工酶关系的研究

对７个具有不同青枯病抗性的桉树品系的叶部和根部的过氧化物酶活性进行了测定,对同工酶进行了电泳分析。酶活性测定结果表明,桉树各品系叶部的过氧化物酶活性显著高于根部。对青枯病具有不同抗性的７个桉树品系,其叶部的过氧化物酶活性存在着显著差异。对青枯病抗性较弱的Ｆ１１和Ｅ１３品系体内的过氧化物酶显著比其它抗性品系体内的酶活性低。同工酶电泳分析表明,桉树对青枯病不同抗病性品系之间的同工酶谱带,在条带数和各条     

AM菌根化的两种桉树苗对青枯病的抗性研究

AM菌对桉树幼苗接种可提高对青枯病的抗性。在有AM菌存在的情况下,桉树幼苗不发病或发病较轻。对两种桉树幼苗进行青枯病菌的人工接种结果表明：菌根苗比无菌根苗的发病率降低10％～40％,而幼树的高生长可增加12％～39％;AM菌对青枯病的防治效果优于外生菌根(即ECM)的效果,其中以AM6008和AM9004菌株的效果最好,而AM3006的效果较差;大田试验结果表明;经AM菌根化的幼苗对青枯病的抗病作用较强,发病率可下降10．0％～17．5％。     

短枝木麻黄根际放线菌及其抗细菌活性

目的分离并鉴定短枝木麻黄根际土壤中的放线菌,测定短枝木麻黄根际放线菌的抗细菌活性,并从中筛选出活性放线菌菌株。方法采用热击稀释法分离短枝木麻黄根际土壤中的放线菌,通过形态学观察和分子生物学相结合的方法对分离得到的放线菌菌株进行鉴定,采用薄层层析（TLC）-生物自显影法测定短枝木麻黄根际放线菌次生代谢产物对不同供试细菌的抑制活性,进一步采用高效液相色谱（HPLC）分析根际放线菌乙酸乙酯层提取物中次生代谢产物的情况。结果从短枝木麻黄根际土壤中共分离鉴定得到12株放线菌,均为链霉菌属（Streptomyces sp.）放线菌,最大相似度均在97%以上。活性测定的结果表明：菌株S. spinosus Ceaf-4和S. chattanoogensis Ceaf-12对木麻黄青枯病菌（Ralstonia solanacearum）表现出较强的抑制活性,抑菌斑的直径均在10 mm以上;菌株S. spinosus Ceaf-4对大肠杆菌（Escherichia coli）和溶血葡萄球菌（Staphylococcus haemolyticus）的抑菌斑直径也大于10 mm。高效液相色谱分析的结果表明,菌株S.spinosus Ceaf-4和S. chattanoogensis Ceaf-12均含有丰富的次生代谢产物,但次生代谢产物的类型和相对含量均存在明显差异。结论短枝木麻黄根际土壤中存在以链霉菌属为优势种群的放线菌,菌株S. spinosus Ceaf-4和S. chattanoogensis Ceaf-12对木麻黄青枯病菌表现出较强的抑制活性且含有丰富的次生代谢产物,可作为候选菌株进一步发掘其抗菌活性成分。