枯草芽孢杆菌BSD-2一种抗菌肽的分离纯化与鉴定

为了分离纯化及鉴定枯草芽孢杆菌BSD-2代谢产物中抗菌肽,采用盐酸沉淀、Sephadex G-50层析以及反相HPLC对其进行分离纯化,并利用Tricine-SDS-PAGE、MAIDL-TOF-MS、红外光谱和核磁共振技术对其分子量、氨基酸序列以及结构进行初步解析.结果显示该抗菌肽是由29个氨基酸组成,分子量为3 5...     

侧孢短芽孢杆菌BL-21抗菌蛋白的稳定性分析和分离纯化

为明确侧孢短芽孢杆菌BL-21(Brevibacillus laterosporus)产生的抗菌物质的类型,对其发酵液抗菌活性的稳定性进行分析,并在此基础上对有效成分进行分离纯化。采用杯碟法检测了B.laterosporus BL-21代谢产物的热稳定性、酸碱稳定性和蛋白酶稳定性;通过硫酸铵盐析、CM-Sepharose Fast Flow离子交换层析、凝胶过滤层析和SDS-PAGE进行了分离纯化。研究结果表明:B.laterosporus BL-21产生的抗菌物质在50℃以下稳定,在pH 7~8时抑菌效果最好,对蛋白酶敏感;发酵液中含有多组分抗菌物质,其中一个组分的分子量为20.1 k Da。B.laterosporus BL-21的发酵液能抑制烟草赤星病菌(Alternaria solani)和蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的生长,具有一定的生防潜力和研究价值。     

地衣芽孢杆菌对马铃薯晚疫病菌的抑制作用

为了明确地衣芽孢杆菌对马铃薯晚疫病菌的抑制作用,研究了地衣芽孢杆菌对马铃薯晚疫病菌菌丝生长、游动孢子释放、游动孢子萌发、孢子囊萌发产生芽管的抑制作用.结果表明:地衣芽孢杆菌对马铃薯晚疫病菌的菌丝生长、游动孢子释放和游动孢子萌发有明显的抑制作用,对菌丝生长的抑制作用,抑菌带平均宽度达到5.58 mm,在稀释度为101时地衣芽孢杆菌对游动孢子释放的抑制率高达86.11%,对游动孢子萌发的抑制率也达到了78.1%.但地衣芽孢杆菌对马铃薯晚疫病菌的孢子囊萌发产生芽管抑制作用较弱.     

地衣芽孢杆菌在蔬菜生产上的应用

正地衣芽孢杆菌是一种在土壤中常见的革兰氏阳性嗜热细菌。在鸟类,特别是在居住在地面的鸟类(如雀科)和水生的鸟类(如鸭)的羽毛中也能找到这种细菌,特别是在其胸部和背部的羽毛中,酶分泌的最适温度为37℃。它可能以孢子形式存在,从而抵抗恶劣的环境;在良好环境下,则可以生长态存在。该细菌可调整菌群失调达到治疗目的,可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌。能产生抗活性物质,并具有独特的生物夺氧作用机制,能抑制致病菌的生长繁殖。地衣芽孢杆菌的作用机制是     

地衣芽孢杆菌α-淀粉酶信号肽的序列分析及其在大肠杆菌中的分泌特性

为使地衣芽孢杆菌信号肽序列实现异源基因在大肠杆菌中的分泌表达,将地衣芽孢杆菌中编码耐高温α-淀粉酶的基因克隆在大肠杆菌表达载体pET-22b的T7启动子下游,转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌株经乳糖诱导后,在上清液中能够检测到淀粉酶活性。表明该芽孢杆菌淀粉酶基因5′端信号肽序列能够将大肠杆菌中的重组α-淀粉酶引导到胞外,完成分泌表达。同时,用该信号肽序列还实现了甜蛋白monellin基因在大肠杆菌中的分泌表达。     

枯草芽孢杆菌B—903抗菌物质产生条件及部分特性的研究

枯草芽孢杆菌Ｂ－９０３菌株是从郑州果园中筛选出的，它代谢产生的抗菌物质对多种植物病原菌具有强抑制作用。通过对其抗菌物质产生条件的研究认为，在ＮＹＤＡ培养液中，培养液初始ＰＨ值为７时，最有利于抗菌物质的产生；振培养１１２ｈ，培养滤液的抑菌活性可达最大值；同初始接菌量对抗菌物质的产生时间影响不大；在２５０ｍｌ三角前瓶中，随装液量减少，培养液抑菌活性有增大趋势；大米粉和豆饼粉是最适合产生抗菌物质的碳、氮     

枯草芽孢杆菌NCD-2菌株抗菌蛋白初步分析

枯草芽孢杆菌NCD-2菌株对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌具有较强的抗生作用。通过对NCD-2菌株培养条件的研究,结果表明在30℃、培养液初始pH为7.0和培养时间为2 d条件下,利用NB培养基培养该菌株所得培养液抑菌活性优于其他培养基,其培养液经硫酸铵沉淀所得的蛋白粗提液经RNA酶处理后的抑菌活性与对照相比差异不显著,经蛋白酶K和胰蛋白酶处理后的抑菌活性与对照相比差异显著;蛋白粗提液经60℃处理后的抑菌活性与对照相比差异不显著,经80,100,120℃处理后抑菌活性与对照相比差异显著,但经120℃处理30 min后仍有一部分抑菌活性,研究结果说明该菌株产生的抗菌物质存在性质上的差异。     

短小芽孢杆菌HB-3的分离鉴定及其淀粉酶的纯化特性研究

从湖北省襄阳市三九酿酒厂下水道污泥分离筛选得到产淀粉酶菌株HB-3,根据菌株生长形态和生理生化特征分析,初步鉴定为短小芽孢杆菌。短小芽孢杆菌HB-3在淀粉培养基上培养72 h后,淀粉酶活力达到120.0 U/mL。然后使用DEAE-52和CM-52阴阳离子交换层析柱对短小芽孢杆菌HB-3产生的淀粉酶进行了部分纯化。结果表明,短小芽孢杆菌HB-3中淀粉酶经过部分纯化后,纯化倍数为5.9,酶活力回收率为90.9%。纯化后的淀粉酶使用SDS-PAGE凝胶电泳研究,以标准蛋白为对照,计算出短小芽孢杆菌HB-3中淀粉酶分子量为56.5 kDa。同时对短小芽孢杆菌HB-3的淀粉酶进行了纯化特性研究,结果表明,该酶的酶促反应最适温度为50℃,40～60℃热稳定性良好;该酶的酶促反应最适pH为5.0,pH 4.0～6.0酸碱稳定性良好,该酶对底物淀粉的反应动力学米氏常数K_m为0.062 mmol/L,最大反应速率V_max为3.019 mmol/(L·min)。     

产广谱抗菌物质芽孢杆菌的筛选与鉴定

旨在筛选出对果蔬病原菌具有广谱拮抗作用的芽孢杆菌。以9株病原真菌和3株病原细菌为指示菌,采用琼脂平板扩散法,通过初筛和复筛,筛选得到一株具有广谱抑菌作用的拮抗芽孢杆菌NCPSJ7。结合形态学、生理生化和16S rDNA序列同源性分析等手段,该菌株被鉴定为解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus Amyloliquefaciens)。抑菌谱实验表明,解淀粉芽孢杆菌NCPSJ7对果蔬病原真菌和病原细菌都具有较强的抑菌能力。该菌株产抗菌物质的适宜发酵培养基、发酵条件优化,抗菌物质的分离纯化、组成、性质和抗菌稳定性等还有待于进一步研究。     

地衣芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶分批发酵动力学模型的建立

为研究其菌体生长、产物合成以及底物消耗情况,本文以分离自亚麻温水沤麻液的β-甘露聚糖酶高产菌株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)HDYM-04为供试菌株。以初始魔芋粉加入量2 %、接种量6.7 %、初始pH值 8.0、培养温度37 ℃、搅拌速率300 r/min、通气量3 L/min、发酵周期30 h为基础发酵条件进行5L发酵罐发酵。并基于Logistic方程和Luedeking-Piret等方程建立了该菌株的菌体生长、产物生成、底物消耗三个分批发酵动力学模型,其相关系数分别为0.99021、0.98908、0.98812,均达到0.988以上,这些模型能真实描述菌体发酵过程中菌体生长、酶的合成以及底物消耗的情况。该试验为菌株HDYM-04的工业化应用奠定了理论基础并提供了实践指导,为小试数据的放大提供了重要参考。     

一株生防细菌的分离鉴定及其抑菌活性物质的分析

随着人们对农产品品质和安全性要求的提高,高效生物防治资源的筛选显得尤其重要。本研究通过平板对峙实验、分子鉴定、刚果红染色、葡聚糖酶基因克隆与序列分析等方法获得一株抑制多种植物病原真菌的芽孢杆菌,编号为YW26。16S rDNA基因序列分析表明该菌株为解淀粉芽孢杆菌;刚果红染色显示该菌株具有很强的产纤维素酶能力;根据GenBank数据库中芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因(CP000560)序列设计引物,克隆得到1527 bp的片段,经测序、BLAST分析显示该片段与Bacillus amyloliquefaciens FZB42内切β-1,4-葡聚糖酶基因序列同源性为99%。该解淀粉芽孢杆菌抑菌效果显著,具有较强产纤维素酶能力。因此,该菌株可作为一种生防资源,开发新的生防制剂。     

荷斯坦牛红细胞抗菌肽的纯化及活性鉴定

以荷斯坦奶牛血液为原料,制备红细胞粗提物,通过离子交换层析和反相高效液相色谱法纯化抗菌肽,用琼脂糖弥散法测定其抗菌活性。结果表明：通过离子交换层析获得的阳离子峰具有抗菌活性,通过反相高效液相色谱对阳离子峰活性分布区域进行分离,获得了8个峰,8个峰对大肠杆菌均具有活性,F1、F3、F4、F5、F6和F8对金黄色葡萄球菌具有活性,F2、F4、F5、F6和F8对白色念珠菌具有活性。因此,试验成功地从牛红细胞中分离纯化到了抗菌肽,其中,F6的抗菌谱较广和抗菌活性较好。     

苏云金杆菌Cry8Ea2蛋白的分离纯化及生物活性测定

Cry8Ea2蛋白是一种新型苏云金杆菌杀虫晶体蛋白。通过穿梭载体pSXY422b将cry8Ea2导入Bt无晶体突变菌株中,获得工程菌HD8Ea2。Cry8Ea2蛋白在工程菌中获得表达。通过分子筛层析,成功获得纯化的130 kDa活性毒素蛋白。用改进的生物活性测定方法进行Cry8Ea2蛋白对华北大黑鳃金龟和暗黑鳃金龟一龄幼虫的杀虫活性测定,LC50分别为0.267 9μg/mL和0.071 9μg/mL。研究首次发现Cry8Ea2蛋白对华北大黑鳃金龟具有较高毒力,拓展了该蛋白的杀虫谱,为转基因工程提供了新资源。     

海洋解淀粉芽孢杆菌GM-1培养基及摇瓶发酵条件优化

GM-1菌株为分离自海洋对油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)有强烈抑制作用的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。以菌体密度和无菌滤液对油菜菌核病菌的抑制作用为检测指标,采用单因素试验筛选GM-1菌株生长及产抗菌物质培养的最佳碳源、氮源和无机盐,通过正交试验设计对该菌株生长和产抗菌物质的发酵培养基配方和摇瓶发酵条件进行优化。研究结果表明,GM-1菌株生长及产抗菌物质最佳培养基配方为:蔗糖10g/L,牛肉膏16g/L,酵母膏3g/L,FeSO40.4g/L。最佳发酵条件为:28℃,pH7.0,200r/min摇床培养60h,种子液浓度108cfu/mL接种量为10%,装液量为70mL/250mL。     

玉米苞叶黄酮的提取 纯化及其抗氧化性能研究

为了拓宽玉米苞叶高附加值利用途径,通过单因素试验和正交试验确定了玉米苞叶黄酮的最佳提取条件,并以维E和二丁基羟基甲苯(BHT)为对照,分析了纯化过的玉米苞叶黄酮的抗氧化性能。结果表明,超声波辅助提取法提取玉米苞叶的最佳提取条件为超声功率500 W,提取时间40 min,提取温度70℃,提取剂乙醇体积分数60%。在此条件下玉米苞叶黄酮得率为1.083%。经过D101型大孔树脂纯化后,玉米苞叶黄酮的纯度提高了1.779倍,玉米苞叶黄酮的DPPH自由基清除作用和还原能力优于维E,与BHT相似。因此,玉米苞叶黄酮具有较好的抗氧化能力,可作为天然抗氧化剂推广应用。     

Influences of Y on the microstructures and mechanical properties of Mg-12Gd-1Zn-0.6Zr magnesium alloys

To develop Mg-Gd-Y based high-strength alloys and widen the application of magnesium alloys, the effects of Y addition on the microstructure and mechanical properties of Mg-12Gd-1Zn-0.6Zr alloy are investigated by using both optical and electron microscopy,X-ray diffraction (XRD),differential scanning calorimetric (DSC) analysis,and tensile test．The results indicate that adding 2%Y to the Mg-12Gd-1Zn-0.6Zr alloy does not cause an obvious change in the as-cast microstructure of the alloy. However,after adding 3%and 4%Y,the as-cast microstructure of the alloy is coarsened,and simultaneously the morphology of the secondary phases in the alloy is changed from the initial discontinuous fine network to thick skeleton-like frame. Furthermore,adding 2%-4%Y to the Mg-12Gd-1Zn-0.6Zr alloy can also refine the grains of the as-extruded alloy,and adding 2%and 3%Y can obtain higher refining efficiency than adding 4%Y. In addition,adding 2%-4%Y to the Mg-12Gd-1Zn-0.6Zr alloy can also effectively improve the ultimate tensile strength and yield strength of the as-extruded alloy,and the ultimate tensile strength,yield strength and elongation of the as-extruded alloy with the addition of 2%Y can reach 348.8 MPa,256.8 MPa and 14.7%,respectively.     

棉花黄萎病生防细菌NCD-2抑菌物质提取初步研究

利用拮抗细菌和拮抗真菌防治植物病害是降低土传病害损失最有潜力的措施已被世人公认。拮抗细菌NCD 2分离自棉花根围 ,抑菌作用测定证明对 1 6种植物病原真菌有抑制作用 ,并且对棉花黄萎病具有较高的田间防效 ,经鉴定为枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)。室内测定证明NCD 2是通     

The Biocontrol Effects of the Bacillus licheniformis W10 Strain and Its Antifungal Protein Against Brown Rot in Peach

The biocontrol effects of Bacillus licheniformis W10 bacterial suspension and its antifungal protein on peach brown rot caused by Monilinia fructicola in storage peach fruits and the effects on fruit quality were investigated. The results showed that the fruit disease suppression of B. licheniformis W10 bacterial suspension and antifungal protein were significantly higher than that of the control. Inoculation of bacterial suspension and antifungal protein prior to M. fructicola gave a better biocontrol effect, and the higher concentrations of bacterial(1 × 1010 cfu · m L-1) and antifungal protein(3.0 mg · m L-1) performed better control effects. The environmental conditions, such as temperature and humidity, affected biocontrol effects of W10 bacterial suspension and antifungal protein. The influence of environment conditions on the activity of antifungal protein was less than that on bacterial suspension. Moreover, lower temperature(4 ℃) and relative humidity(RH 70%–75%) were favorable to prevent peach brown rot by W10 bacterial suspension and its antifungal protein. The W10 bacterial suspension and antifungal protein amended with calcium [0.1% Ca(NO3)2] could enhance the biocontrol effects, and obviously put off the occurrence of peach brown rot. In addition, the bacterial suspension and antifungal protein significantly reduced the natural decay rates of peach fruits during storage, and the effects were equal to carbendazim. Moreover, both W10 bacterial suspension and antifungal protein treatments did not have effects on external and internal fruit appearance, such as chromatic aberration parameter L* of flesh, flesh firmness, soluble solids content and weight loss. Therefore, the B. licheniformis W10 is a potential biocontrol factor for peach brown rot.