农杆菌介导的INH基因瞬时表达系统的建立及表达分析

利用含有过表达抑制子载体的根癌农杆菌分别在番茄源叶和果实中进行瞬时表达,快速验证转化酶抑制子(inhibitors of invertases,INH)转基因的表达情况及对果实发育过程中转化酶活性的影响。Micro-Tom在源叶注菌处理后,Lin6的表达含量增加,表明转化酶在植株中响应病菌侵染;但转INH在源叶几乎没有明显表达变化。果实注射后,注射空菌(EHA105)菌液和空载体(pBI121-2A11)菌液后,转化酶(invertases,Inv)基因Lin5、Lin6表达量没有明显改变,但Inv的活性明显升高1倍左右,这表明转录数量并不能反映翻译后的蛋白质量;在注射转基因(p1300-2A11-INH)菌液后3d,INH的表达明显增加,是其它处理的数倍,这是由于在果实特异性启动子2A11的作用下,INH在果实中特异地表达。而且注射p1300-2A11-INH菌液3～5d后,Inv的活性显著下降,尤其胶质胎座中最为明显。这一结果表明INH主要在翻译后水平调控Inv的活性。     

甘蓝型油菜异三聚体G蛋白原生质体瞬时表达体系的建立

为建立甘蓝型油菜异三聚体G蛋白各组分原生质体瞬时表达体系,以油菜叶片为试材,从试材选取、平摇时间和聚乙二醇浓度方面优化了油菜原生质体制备条件和转化条件。结果表明,选取30 d苗龄叶片、平摇10 min时原生质体游离状态最佳,产量为10.73×10~6/m L,活力可达96.4%。采用30%PEG转化原生质体时,目的蛋白表达量最高。Western Bolt的检测分析表明,异三聚体G蛋白各组分均参与了甘蓝型油菜对ABA的应答反应,当ABA浓度分别为100,150,100,50 mmol/L时,Bn GA1、Bn GB1、Bn GG2和BnRGS1蛋白的表达量最高。     

植物中SWEET蛋白的研究进展

SWEET蛋白属于一类新型的糖转运蛋白,介导糖类物质的跨膜双向运输.之前的研究证实SWEETs作为糖外排转运蛋白在植物生长发育的一系列生理过程中起着重要的作用.其参与韧皮部的装载和植物激素的转运、花、果实和种子的发育、植物与病原菌之间的互作和植物与微生物之间的共生等.本研究将围绕SWEET蛋白的结构特征、系统进化、转运...     

多年生黑麦草原生质体制备及瞬时表达体系的建立

本研究以10～12 d苗龄的多年生黑麦草品种NUI叶片为材料,通过正交实验确定原生质体分离的最佳条件.结果表明,在甘露醇浓度为0.5 mol/L、纤维素酶R10浓度为1％、离析酶R10浓度为0.3％的酶解液中,28℃黑暗条件下酶解4 h后分离的原生质体最为理想,原生质体浓度达到4.69×106个/mL,活性达到88.5...     

植物表达重组蛋白的N-糖基化研究进展

分子农业中，植物作为生物反应器生产药用重组蛋白是近十几年来基因工程研究的一大热点。植物具有完整的真核表达系统、重组蛋白通常可以正确组装、折叠和修饰，同时，由于植物表达体系的方便、廉价等优点，利用转基因植物生产药用蛋白的研究迅猛发展，已有100余种蛋白中得到表达，有些已进入商业化生产。但是植物与动物对蛋白的转译后修饰并不是完全保守的，植物是否能够真正“忠实”地表达出实用、可靠的目的蛋白产品已成为备受瞩目的话题，由于大多数药用蛋白都是分泌型蛋白，因此植物表达重组蛋白的N-糖基化成为新的研究热点。笔者对植物表达体系对药用蛋白的N-糖基化修饰途径和人源化改造植物表达重组蛋白的研究进展两个方面加以综述，并对生物反应器的未来发展方向进行了探讨和展望。     

高等植物中DELLA蛋白的研究进展

在赤霉素(GA)信号传导过程中,有一类起着负调控作用的蛋白——DELLA蛋白,是GRAS家族的亚家族,因其N端含有DELLA结构域而命名。该蛋白对种子萌发、茎的伸长、下胚轴伸长以及花发育等起着重要的调控作用。本研究主要讲述了DELLA蛋白如何参与多种信号传导,分析了模式植物拟南芥中5种DELLA蛋白对植物生长发育的作用,分别介绍了DELLA蛋白的保守结构域及其作用,总结了目前已知DELLA蛋白的克隆及表达情况,最后对今后DELLA蛋白的研究进行展望,以期更好地揭示DELLA蛋白的调控机制。     

植物病原菌诱导表达载体构建及在烟草中的瞬时表达研究

根据GenBank中植物病原物诱导型启动子碱基序列设计引物,以烟草基因组DNA为模板,扩增PPP3启动子。用PPP3替换pCAMBIA1301中与gus基因相连的35S启动子,构建重组质粒pCOMBIA ＋PPP3＋gus后导入农杆菌GV3101。通过农杆菌介导的瞬时表达技术将受PPPs控制的gus基因导入烟草。分别接种青枯菌和水杨酸24 h后,烟草叶片中检测到gus基因转录效率分别提高了27．94,17．69倍。表明PPP3启动子具有本底表达水平低、诱导表达活性强的特点。     

植物花青素合成酶的研究进展

本文重点介绍了植物体内花青素生物合成途径以及其合成酶（查尔酮合成酶、查尔酮异构酶、黄烷酮3-羟化酶、二羟基黄酮醇还原酶、花色素苷合成酶以及类黄酮3-O-糖基转移酶）的分子生物学研究进展。     

Gene specificity is maintained in transient expression assays with protoplasts derived from different tissues of barley

Summary In some cereal species that are still recalcitrant to stable transformation and regeneration, transient expression in isolated protoplasts is a useful tool for the study of gene expression and regulation. We have successfully applied these techniques to barley protoplasts derived from developing endosperm, aleurone, leaves and roots in order to characterize functionally cis-acting motives in two gene promoters, corresponding to trypsin inhibitor BTI-CMe and to sucrose synthase Ss1. Gene specificity is maintained in transient expression assays with protoplasts isolated from these different barley tissues and the pattern of expression parallels the mRNA levels observed for the corresponding genes in the same tissues.Abbreviations CaMV35S 35S-cauliflower mosaic virus promoter - GUS -glucuronidase - MU 4-methyl umbelliferone - NOS nopaline synthase gene - PEG polyethyleneglycol     

茶树己糖激酶基因CsHXK2的启动子克隆及表达特性分析

植物己糖激酶是双功能蛋白,具有磷酸化己糖和介导糖信号的关键性作用。前期研究中,我们从茶树中克隆获得4个己糖激酶基因,其中CsHXK2基因编码492个氨基酸残基,与拟南芥AtHXK3、番茄LeHXK4归为Type A类HXKs。利用RT-PCR技术,克隆获得长度为2029bp的CsHXK2基因启动子。CsHXK2基因可能受到光照、低温、病原菌、糖和多种激素等信号的调控,且可能特异性表达于叶、花、种子、根系、腋芽等组织。CsHXK2蛋白定位于叶绿体内。酵母突变体功能互补试验表明,去除叶绿体转运信号肽的CsHXK2成熟蛋白具有葡萄糖和果糖磷酸化活性。茶树组织特异性表达分析显示,CsHXK2基因在根和茎中表达量最高,而在老叶中表达量最低。CsHXK2基因的表达受低温胁迫而显著下调,经炭疽菌侵染的茶树叶片内CsHXK2基因的表达也受到显著抑制,而外源赤霉素(GA₃)处理的茶树叶片内CsHXK2基因表达显著上调。本研究结果表明,CsHXK2基因在茶树的生长发育过程和逆境胁迫响应中发挥重要的调控作用。     

试论种业信息化建设的重要性

从一般意义上讲,种子生产销售信息是市场行情的综合反映,它不仅具有信息的一般特点,如时效性、准确性、真实性等,还有种子行业产品流通信息本身独有的特征,如季节性、区域性、渗透性和分散性.我们必须准确把握种子流通信息现状及存在的问题,采取切实可行、有效的措施,才能建立高效的种子流通体系.     

重金属影响植物细胞超微结构和功能的研究进展

重金属是对我国环境污染最严重的污染物之一,不仅对生态环境产生着严重的危害,还会通过食物链富集到人体,给人带来巨大的危害。本文围绕着重金属对植物细胞的危害,从植物对重金属的吸收,植物体内重金属的分布以及重金属对植物细胞内各个重要的细胞器超微结构的影响等方面综述了重金属对植物细胞超微结构危害的研究进展,并对重金属损伤植物细胞的特点进行了归纳总结。     

陆地棉REM基因家族全基因组鉴定及表达分析

[目的]REM(Reproductive meristem)基因家族编码一类转录因子在植物生长发育过程中发挥重要作用,但在棉花中未见报道.[方法]基于陆地棉基因组数据和公共数据库中的转录组数据,运用生物信息学方法对陆地棉REM基因家族成员进行系统鉴定,并对该基因家族的理化性质、基因结构、组织表达特异性以及胁迫条件下的表...     

水稻、拟南芥组织特异性启动子的序列特征分析

本文以UniGene 数据库中有关拟南芥和水稻的相关信息,分别获得根、叶片、花、种子4种组织中特异表达基因和特异不表达基因。在TAIR和RAP-DB下载获得此类基因启动子序列,利用生物信息学软件MEME对组织特异表达基因启动子序列进行分析,预测得到组织特异表达基因的顺式作用元件。又利用模式搜索软件FIMO,考察每一条顺式作用元件在这种组织特异表达基因和组织特异不表达基因启动子序列中的分布特征,其中“CCACACA”极有可能为控制基因在拟南芥叶片中表达的顺式作用元件。本研究技术和策略为理解基因表达调控的机制提供参考依据。     

植物人工种子的研究概况

种子是种子植物所特有的有性繁殖器官.种子的结构一般由胚、胚乳和种皮三部分组成.从来源上讲,自然界中正常的植物种子分为两类:一类是植物经过受精作用后由胚珠发育形成的;另一类是植物不经过受精作用由不定胚直接发育形成的.人工种子是Murashige于1978年在国际园艺植物学术讨论会上首先提出的,它是指将植物离体培养中产生的体细胞胚或能发育成完整植株的分生组织(芽、愈伤组织、胚状体等)包埋在含有营养物质和具有保护功能的外壳内形成的在适宜条件下能够发芽出苗的颗粒体.完整的人工种子包括体细胞胚、人工胚乳和人工种皮.     

农业植物新品种保护实施进展

自<中华人民共和国植物新品种保护条例>实施以来,我国植物新品种保护制度和管理体系逐步完善,在激励育种创新、优化资源配置和促进成果转化等方面的作用日益显现.随着我国加入WTO和国内外经济的发展,现行的新品种保护条例已不能适应植物新品种保护事业发展的需要.本文重点论述了我国植物新品种保护面临的形势、实施进展情况和存在的问题,并提出完善我国植物新品种保护制度的对策和建议.     

棉花中GhTFL1a和GhTFL1c基因的表达及启动子分析

从陆地棉中克隆了磷脂酰乙醇胺结合蛋白GhTFL1a和GhTFL1c基因,并对该基因进行表达分析、启动子预测和启动子活性研究。利用启动子分析软件PlantCARE预测得出,GhTFL1a启动子区域有脱落酸响应元件、干旱诱导的MYB结合位点和顶芽特异表达响应元件等;GhTFL1c启动子区域有乙烯响应元件、干旱诱导的MYB结合位点和水杨酸响应元件。因此,将pGhTFL1a和pGhTFL1c分别构建到启动子检测载体pBI121-GUS上形成融合表达载体,通过烟草瞬时转化检测得出这2个基因的启动子都具有活性。实时荧光定量PCR分析表明, GhTFL1a和GhTFL1c在光周期处理和不同材料的陆地棉(栽培种和半野生种)中表达模式呈相反趋势。GhTFL1a基因受脱落酸(abscisic acid, ABA)、水杨酸(salicylic acid, SA)和盐胁迫诱导,而GhTFL1c可以响应赤霉素(gibberellin, GA)、SA和ABA胁迫。研究结果初步表明,GhTFL1a和GhTFL1c可能参与了植物逆境胁迫脱落酸和水杨酸响应的调控,为在棉花中进一步阐明其功能奠定了基础。