甜杨离体再生中玻璃化苗的发生与防治

由于甜杨不定芽的诱导过程中发生了玻璃化现象,为了恢复和逆转甜杨玻璃化苗,本试验采用正交试验设计L_9(3~4)对影响玻璃化现象发生的光照强度、琼脂浓度和蔗糖浓度等因子进行研究。结果表明,琼脂浓度对甜杨玻璃化苗恢复率的影响最大,达到极显著水平,蔗糖浓度和光照强度对甜杨玻璃化苗的恢复率影响不显著。当琼脂浓度为9 g/L,培养光照强度为3000 lx,培养基中蔗糖浓度为20 g/L时,甜杨玻璃化苗的恢复率最高,达到100%。由此可知,培养基中较高的琼脂浓度对甜杨玻璃化苗的防治与逆转有显著作用。     

植物生长调节剂对白杜试管苗生长的影响

通过组织培养的方法研究植物生长调节剂对白杜试管苗生长的影响。结果表明:在进行不同浓度植物生长调节剂试验时,以MS为基本培养基,附加BA0.5 mg/L、NAA0.05 mg/L、蔗糖30 g/L、琼脂7 g/L,此时试管苗的增殖效果最佳,培养27 d,有效嫩茎数为3.433;白杜试管苗生根培养基以1/2 MS+NAA1.5 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂7 g/L为好,培养25 d生根率为86%。     

广藿香玻璃化组培苗恢复逆转的培养条件优化

为探究不同浓度外源激素GA3与不同培养基凝固剂对广藿香玻璃化组培苗的影响机制。以广藿香玻璃化组培苗为实验材料,在原增殖培养基(MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+5%(体积分数)椰子水)基础上,添加不同浓度外源激素GA3及凝固剂(5.7 g/L琼脂粉, 2.3 g/L植物凝胶),对广藿香玻璃化组培苗恢复处理,并对3种不同形态广藿香[过氧化物歧化酶(SOD),过氧化物酶(POD),过氧化氢酶(CAT)]的酶活性生理指标测定并做比较。结果表明,MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L GA3+5.7 g/L琼脂粉+30 g/L蔗糖+5%(体积分数)椰子水为最佳配方,能有效地恢复逆转广藿香玻璃化组培苗,其恢复率高达93.12%;且恢复苗SOD、CAT的酶活性升高,POD酶活性降低,与正常苗酶活性接近,近似恢复正常苗。研究结果为解决广藿香组织培养过程中出现玻璃苗化现象困扰提供一定参考依据。     

培养基渗透压对延缓生长的苹果组培苗生理代谢指标影响

以富士、乔纳金苹果试管苗为试材,研究了不同渗透压处理下苹果组培苗延缓生长以及恢复生长后SOD、POD活性和MDA含量的变化,以期为筛选苹果组培苗延缓生长种质保存的适宜方法提供依据。结果表明：在延缓生长保存期间,随培养基中蔗糖、琼脂浓度提高,添加甘露醇,试管苗SOD、POD活性逐渐升高,而MDA含量呈下降趋势,依品种不同分别在蔗糖浓度达到50～60g/L、琼脂浓度达到10～14g/L、甘露醇浓度达到30～40g/L时达显著差异水平。恢复生长当代试管苗的SOD活性、POD活性以及MDA含量处理间表现相同。研究认为添加50～60g/L的蔗糖适宜苹果试管苗延缓生长法种质保存。     

不同培养条件对罗汉果组培苗玻璃化的影响

以广西壮族自治区药用植物因培育的罗汉果新品种永青1号组培苗为研究对象,探讨组织培养过程中蔗糖浓度、琼脂浓度、6-BA 浓度、培养温度以及光照时间对罗汉果组培苗玻璃化的影响.结果表明,适于罗汉果组培苗最大增殖及玻璃化最低的培养条件为:接种于4.5g/L琼脂、25g/L蔗糖、0.5mg/L 6-BA 的 MS 基本培养基,并于26℃,12h/d(日光灯,2000Lx)的条件中培养.     

防风(Saposhnikovia divaricata)组织培养中的玻璃化现象研究

以防风茎段为外植体,建立了组织培养再生体系,对防风试管苗玻璃化现象进行了研究。结果表明,与正常苗相比,玻璃化苗形态异常,组织含水量升高,叶绿素含量显著降低,酸性过氧化物同工酶活性减弱。6-BA浓度超过2.0mg/L、光照低于2000lx、培养瓶内湿度大都极易导致防风试管苗的玻璃化,减少愈伤继代次数,增加培养基内琼脂和蔗糖浓度,可以降低玻璃化率。轻中度的玻璃化苗通过改变培养环境可以恢复正常。优化的防风再生体系为:以嫩茎段为外植体,继代3次左右的愈伤组织诱导出芽,芽继代增殖时,6-BA浓度采用1.0mg/L和0.5mg/L交替使用,培养光照3000~4000lx。     

组培条件对不同品种芦荟试管苗玻璃化的影响

研究了外植体表面消毒时间、培养基中不同浓度的糖分、琼脂、BA、活性炭及培养时间等因素对芦荟组织培养中试管苗玻璃化的影响。结果表明不同品种芦荟组培苗均出现玻璃化现象且程度不同，以木剑芦荟最为严重，库拉索芦荟次之，华芦荟最轻；玻璃化苗的数量随着外植体消毒和培养时间的延长、糖分及琼脂浓度的降低、细胞分裂素（BA）浓度的增加而加重。通过在培养基中适当调整糖分、琼脂、细胞分裂素的浓度，可有效地降低并控制芦荟玻璃化苗数量。添加一定浓度的活性炭（3g/L)对芦荟试管苗玻璃化有较好的抑制作用，且对芦荟苗增殖、组培苗的生长、根长、出根率都有较好的促进效果。     

影响甜樱桃离体小叶片再生的关键因子研究

适当提高蔗糖浓度能明显改善甜樱桃试管苗的状态，在F14培养基蔗糖浓度由原来2%增加到6%，增殖倍数由1~2增加到25~30，叶片由黄绿无光变为浓绿油亮，保持天数由原来的15d增加到70d。经过4步骤程序培养可以获得小叶片再生，即：①将普通继代试管苗接入F14（附加6-BA0.5mg/L+IBA0.05mg/L+GA30.2mg/L+蔗糖6%+琼脂7.0g/L，pH5.8）继代培养30d，获得小叶型高分化试管苗。②剪取并且横切2~3刀后将小叶片，先在0.1%VC无菌水中浸泡1到30min，然后接入MS或F14或WPM（附加6-BA2mg/L+2，4-D2mg/L+蔗糖4%+琼脂7.0g/L，pH5.8）进行光照培养3~4d，获得剪切口组织脱分化的小叶片。③转接1/2大量元素的WPM培养基（附加6-BA2mg/L+IAA2mg/L+蔗糖4%+琼脂7.0g/L，pH5.8）及在环境控制（15h/24h日光周期变化,光照2000lux，温度20℃；黑暗，温度15℃）下培养20~30d，得到诱导出红色愈伤组织（含有花色苷）的小叶片。④转接F14培养基（附加6-BA0.5mg/L+IBA0.05mg/L+GA32mg/L+蔗糖6%+琼脂7.0g/L，pH5.8）培养20d后得到由红色愈伤组织中萌发出不定芽，同时颜色变淡。小叶片再生不定芽率可达91%。     

DNA浓度及注射时间对苹果花粉管通道法基因转化率的影响

通过花粉管通道法，将携带CBF3和GUS基因的pWBVec10a质粒DNA导入苹果。坐果后70d左右采收种子，将收获的种子进行离体培养，培养基为MS+BA0.2mg/L+GA2.0mg/L，附加蔗糖50g /L，琼脂6 g/L，培养40d后对转化子叶进行GUS染色检测。结果表明，最佳注射时间为授粉后11~24h之间。随着注入外源DNA浓度的增加，坐果率逐渐降低，DNA浓度为500μg/ml时，坐果率可达3.1%；DNA浓度为1000μg/ml时GUS基因阳性表达率可达12.5%。     

高抗寒毛白杨杂种离体培养及玻璃化苗研究

[目的]为了能够将毛白杨优良资源应用到北纬41°以北地区,为我国北方生态防护林建设提供优良苗木,特进行高抗寒性毛白杨杂种—‘蒙树1号杨’组织培养技术研究。[方法]利用‘蒙树1号杨’切枝水培嫩芽为外植体,开展了最佳消毒剂和消毒时间筛选,以及无菌苗茎段增殖、叶片分化、生根培养和玻璃化苗恢复培养研究。[结果]嫩芽在0.10%升汞中灭菌5 min效果最佳,外植体污染率为15.60%、萌芽率达77.70%；最佳茎段增殖培养基为MS + 0.20 mg/L 6-BA + 0.05 mg/L NAA,平均分化出芽4.21个；不定根最佳诱导培养基为1/2 MS + 0.50 mg/L IBA + 0.20 mg/L NAA,生根率达93.90%；玻璃化苗在MS + 0.2 mg/L 6-BA + 0.05 mg/L NAA + 30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂培养基中恢复效果最好,恢复率达82.38%。[结论]‘蒙树1号杨’离体快繁体系的建立,为毛白杨体细胞多倍体育种及我国西北地区园林绿化和生态建设夯实了基础。     

培养条件对黄连木花粉萌发的影响

以黄连木花粉为试材,采用正交试验法研究蔗糖浓度、硼酸浓度、培养温度和培养时间4个因素对黄连木花粉萌发率的影响,从而筛选出最佳的培养条件。结果表明：蔗糖浓度对黄连木花粉萌发的影响最大,其次是培养时间、硼酸浓度,培养温度的影响最小。最适宜黄连木花粉萌发的培养条件是1%琼脂+15%蔗糖+0.06%硼酸,25℃培养6 h,花粉萌发率达90%以上。     

茶树腋芽离体培养中的褐化控制研究

为降低茶树离体培养过程中外植体褐化程度,以‘凫早2号’当年生未木质化的春季健壮新梢为材料,带茎段和叶柄的单个腋芽为外植体,接种前用2.0 g/L PVP溶液浸泡1 h,采用正交试验研究不同培养基、起始培养温度和时间对外植体的褐化控制效果。结果表明,腋芽在1/4MS+BA 2.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7.5 g/L培养基中,10℃下避光培养48 h褐变率最低,仅为5.6%;培养时间和培养基类型2个因素对降低腋芽褐化没有显著影响,温度对降低腋芽褐化有显著影响;温度因素外植体对褐化影响最大,培养基次之,培养时间最小,说明低起始培养温度是降低外植体褐化的主要因素。     

西葫芦大孢子离体培养再生植株技术优化研究

西葫芦大孢子离体培养过程中,培养体玻璃化是再生植株形成的主要障碍之一。为保障西葫芦大孢子培养过程中胚状体的正常产生,减少培养体玻璃化对再生植株形成的影响,提高试管苗成活率。本试验通过4种培养基诱导胚状体形成筛选优良诱导培养基,通过对组织培养过程中环境温度、湿度、GA浓度等因子调整来降低培养体玻璃化的发生。结果表明：4种培养基均能不同程度诱导胚状体形成,其中D号B5 40g/LSuc 8g/LAgar 0.5mg/LNAA 0.05mg/LTDZ 30mg/LAgNO3培养基最佳(诱导出胚达96％),且直接生成76％不定芽;在培养温度为25℃,湿度85％,生根培养基GA浓度0.5mg/L条件下西葫芦大孢子培养体玻璃化发生率最低。这项技术在前人基础上完善、优化、建立了最佳的西葫芦未受精子房再生植株技术体系,为后续西葫芦的研究奠定基础。     

无籽西瓜茎段组织培养与嫁接育苗技术研究

以无籽西瓜(Citrullus lantus)墨童无菌苗的茎段为外植体,对组织培养与嫁接育苗技术研究进行了研究。结果表明：不同消毒剂对种胚萌发有一定影响,其中消毒剂二氧化氯250mg/L 处理有利于种胚萌芽,萌发率达82.5%;子叶芽诱导的最佳培养基配方为1/2MS +IAA0.2 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L;不同激素浓度对芽丛增殖和单芽生根也有一定影响,其中MS +6-BA0.4 mg/L +IAA0.2 mg/L +蔗糖30g/L+琼脂7g/L继代培养增殖率最高;MS+NAA0.5mg/L生根率最高(96.2%)。     

掌叶木种子的离体培养与玻璃化逆转研究

为探索国家Ⅰ级重点保护野生植物掌叶木的快速繁殖技术,采用离体培养法,以掌叶木种子为外植体,在含有不同生长调节剂的培养基上诱导萌芽及丛芽。结果表明：在适量的生长调节剂作用下,掌叶木种子现采现培养发芽率可达96.7％,随着贮藏时间的延长,发芽率逐渐降低,半年后全部失去发芽力。BA有利于苗的增粗生长,NAA有利于苗的高生长。采用MS+BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L培养基可诱导产生生长状态良好,增殖倍数为3.43的丛芽,但随着继代次数的增加,易产生玻璃化现象。将MS培养基换为B5培养基,BA-NAA组合换为KT-IBA组合,可以有效逆转玻璃化苗。正交试验结果表明：KT的含量对丛芽增殖倍数和玻璃化逆转起决定作用,其次是培养基,采用0.75B5+KT1.0 mg/L+IBA0.05 mg/L+蔗糖40000 mg/L培养基配方可以获得玻璃化逆转率和增殖率较高的丛芽。     

树莓品种‘Kivigold’快繁技术体系建立

以树莓（Rubus idaeus）品种‘Kivigold’带腋芽茎段为外植体,研究消毒剂HgCl2（0.1%）不同的消毒时间对外植体培养的影响,对不定芽增殖培养基和生根培养基中适宜的激素种类及浓度、生根苗移栽驯化中适宜的基质进行了筛选。结果显示,树莓品种‘Kivigold’外植体的最佳消毒时间为10 min,初代培养时只需添加6-BA即可满足外植体萌发和生长的需要;在不定芽增殖过程中,细胞分裂素主要影响不定芽的增殖,而生长素主要影响不定芽的生长,以质量浓度低于1.5 mg/L的6-BA以及质量浓度低于0.5 mg/L的NAA较为适宜,3种碳源中蔗糖更有利于不定芽的增殖和生长;经过进一步的筛选,确定适宜于‘Kivigold’不定芽增殖和生长的培养基为MS+1.00 mg/L 6-BA +0.10 mg/L NAA（含20 g/L蔗糖和5.9 g/L琼脂,pH 5.8）,适宜于‘Kivigold’不定芽生根的培养基为1/2 MS+0.10 mg/L NAA（含20 g/L蔗糖和5.9 g/L琼脂,pH 5.8）;在移栽驯化中最适宜的栽培基质为泥炭土:珍珠岩=1:1,移栽成活率可达到93.33%。     

黄瓜离体器官再生体系的优化

优化通过器官直接再生方式的黄瓜离体再生体系,为遗传转化奠定基础。以‘长春密刺’黄瓜的子叶节为外植体,探讨在黄瓜再生过程中,适宜的无菌苗获得培养基、适宜的外植体类型、无菌苗的适宜苗态、不定芽诱导培养基和芽伸长培养基中适宜的激素组合与比例。结果表明,最适的无菌苗获得培养基为1/2MS+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂(pH=5.8);不同外植体的再生率为子叶节>下胚轴>子叶;子叶完全出壳但未展平的无菌苗比其他苗态的再生率高,子叶展平后,再生率迅速下降;当6-BA（6-苄基氨基嘌呤）和ABA（脱落酸）浓度一定时,最适的AgNO₃为2 mg/L;当AgNO₃浓度一定时,6-BA和ABA浓度的最佳组合为1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ABA;不定芽诱导的最适培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ABA+2 mg/L AgNO₃,出芽率为90%,每外植体出芽数为3.5;芽伸长培养基中加入0.10 mg/L 6-BA,能够促进再生芽的伸长。本研究成功优化了黄瓜的再生体系,得到了健壮的黄瓜成株。