金黄色葡萄球菌诱发小鼠乳腺炎试验

近年来，国内外开始选用小鼠建立乳腺炎疾病模型，成功解决了使用奶牛或奶山羊等动物成本太高或操作不便以及无法进行标准化管理的问题。但其在诱发小鼠乳腺炎的操作中对小鼠乳腺组织造成人为的损伤，不能真实模拟奶牛乳腺炎的自然发病机制。本试验自制了乳腺接种器，并用其将金黄色葡萄球菌接种于小鼠乳腺，建立了一种无创伤诱发小鼠乳腺炎的方法，这对小鼠乳腺炎模型的建立提供了技术支持。     

金黄色葡萄球菌诱导大鼠乳腺炎模型的建立

妊娠Wistar大鼠84只,随机分为试验组和对照组(n=42)。产后第4天,试验组经第4对乳腺的乳导管灌注金黄色葡萄球菌0.1 m L(2×107CFU/m L),对照组注射同量的生理盐水。动态观察和记录大鼠的临床症状、病理组织学变化、胸腺和脾脏指数、乳腺组织内细菌数和血液学变化。结果显示,注菌后,试验组胸腺和脾脏指数显著或极显著升高(P0.05或P0.01);乳腺组织内细菌量在接种后6 h迅速升高,之后开始下降,直至96 h,乳腺组织仍可以检测到金黄色葡萄球菌,高于300 CFU/mg乳腺组织;外周血中的嗜中性粒细胞在接种后6 h,12 h,极显著升高(P0.01),之后差异不显著;病理组织学检查显示,接种细菌后可导致明显的炎症反应。表明本研究建立了经乳腺导管灌注金黄色葡萄球菌诱发大鼠乳腺炎的动物模型。     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌超抗原的检测

用PCR方法对分离到的临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌124株.隐性乳腺炎金黄色葡萄球菌213株,进行超抗原毒素sea,seb,sec,sed,see和tst基因的榆测.结果表明:奶牛临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌肠毒素基因和tst基因的阳性率为27.42%,隐性乳腺炎金黄色匍萄球菌肠毒素基因的阳性率为1.41%,奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌产生毒素的类型以SEA,TSST-1和SEC为主,对于肠毒素基因和tst基因PCR阳件的金黄色葡萄球菌同时用ELISA和RPLA两种方法进行检测,3种检测方法结果基本一致.     

CpG-DNA对金黄色葡萄球菌诱导的大鼠实验性乳腺炎的作用

72只泌乳期SD雌性大鼠随机均分成对照组和试验组(n=36),对照组于产后0h左后腿胫骨前肌内注射0.01mol/L、pH7.2 PBS100μL/只;试验组肌注CpG-DNA 200μg/只。产后72h经乳头管灌注2×1012CFU/mL金黄色葡萄球菌各100μL/侧到第4对乳腺(两侧)内。分别于灌注前0h,灌注后8、16、24、48和72h(n=6)颈静脉放血处死。结果显示,乳腺组织细菌数在灌注后24h上升至最高,CpG-DNA能显著降低8、16和72h的细菌数。IL-2在不同时间点有显著下降,对照和试验组乳腺组织IL-2分别在16和24h下降至最低。TNF-α在24h达最高,CpG-DNA能显著提高0、24和72h乳腺组织TNF-α水平。CpG-DNA能显著提高血清感染后各时间点及乳腺组织0和16h MPO水平。乳腺组织NAGase和白蛋白在24h上升至最高,血清中24h下降至最低。CpG-DNA能显著降低48和72h乳腺组织NAGase活力,并极显著降低8和72h乳腺白蛋白浓度。上述结果显示,CpG-DNA可促进细胞因子的产生,减少乳腺组织细菌数量,减轻炎症介质对细胞和血-乳屏障完整性的损伤,提示CpG-DNA对金黄色葡萄球菌感染诱发的大鼠乳腺炎有一定的保护作用。     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌血清型的分离鉴定

乳腺炎是造成奶牛工业经济损失的最主要原因.在美国,每年的经济损失估计达20亿美元,在世界范围内,每年的牛奶生产损失估计可达380万吨.尽管不能做出精确的估计,但是潜在的损失同样发生在肉牛、山羊、绵羊和猪上.     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌新型疫苗研究进展

病原微生物感染是导致奶牛乳腺炎发生的最主要原因,其中金黄色葡萄球菌的带菌率最高。疫苗被认为是当前预防疫病传播并最终根除传染病的最有发展前景和最经济有效的方法和措施。随着基因工程、分子生物学、遗传学及免疫学等学科知识的迅猛发展,多种新型疫苗因为具有安全可靠、容易进行质量控制等优点正引起更多研究者的广泛关注,金黄色葡萄球菌新型疫苗的研究取得了长足进步,本文针对金黄色葡萄球菌新型疫苗加以综述。     

牛源金黄色葡萄球菌单链抗体治疗小鼠乳腺炎效果评价

引起奶牛乳腺炎的原因复杂多样,金黄色葡萄球菌是其中重要的病原之一。为探寻治疗奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制剂,本研究利用建立的小鼠金黄色葡萄球菌感染乳腺炎模型,将针对金黄色葡萄球菌牛源性单链抗体(scFv)的真核表达质粒pcDNA3.1-scFv33和pcDNA3.1-scFv73经第4对乳腺导管注入到处于泌乳期的乳腺炎模型小鼠的乳腺中,以通过scFv在小鼠乳腺内的表达来抑制细菌对乳腺上皮细胞的黏附从而达到防治乳腺炎的目的。结果显示,两个scFv治疗组乳腺内的细菌数量分别为4.52±0.37、4.38±0.32(lgcfu·mg-1),TNF-α的含量分别为29.55和42.29 pg/mg,IL-6的含量分别为48.38和21.74 pg/mg。与阴性对照组相比,scFvs治疗组乳腺内的细菌数量显著减少(P0.05),乳腺组织较完整,减少了炎性细胞的浸润,且TNF-α和IL-6的含量均显著降低(P0.05)。表明pcDNA3.1-scFvs对小鼠乳腺炎可能具有一定程度的保护作用,为进一步研究防治奶牛乳腺炎的抗生素替代性生物制剂探索了新途径。     

奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌免疫逃避机制研究进展

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus,SA）型奶牛乳腺炎是一种较难控制的慢性、亚临床型传染病,给奶牛养殖业带来巨大的经济损失。多种SA免疫逃避机制在乳腺炎发生、发展过程中起重要作用,且SA的免疫逃避机制多与菌体毒力因子相关。本文对近年研究的奶牛乳腺炎SA的免疫逃避机制进行了综述,以期为SA型奶牛乳腺炎的防治研究提供参考。     

金黄色葡萄球菌感染对母鼠乳腺肥大细胞的影响

应用细菌计数研究不同攻菌时间金黄色葡萄球菌在乳腺内的增殖情况,并通过甲苯胺兰染色法观察乳腺内肥大细胞的数量和分布。结果显示,实验组母鼠乳腺内金黄色葡萄球菌数在攻菌后24 h达到峰值,48 h时有所下降,72 h时又有所增多;实验组脱颗粒肥大细胞数在攻菌后6h极显著多于对照组(P0.01);实验组肥大细胞数在攻菌后12 h显著多于对照组(P0.05)。脱颗粒肥大细胞数和肥大细胞总数随感染时间延长呈增多趋势。证实肥大细胞参与了金黄色葡萄球菌所致乳腺炎乳腺组织损伤的病理过程。     

小鼠模型在奶牛金黄色葡萄球菌乳房炎中的应用

金黄色葡萄球菌是奶牛乳房炎的主要致病菌之一,由其引发的感染应用现有的抗生素很难治愈。因该病发病机制和临床发展过程较为复杂,故与治疗相关的研究工作进展缓慢。目前,国内外研究人员多通过建立动物模型,对金黄色葡萄球菌进行研究。笔者旨在通过建立金黄色葡萄球菌乳房炎小鼠模型对金黄色葡萄球菌表面蛋白、毒力因子及其变异菌株进行研究,为该病的发病机理和新型抗菌药物的研制奠定方向。     

奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌RAPD-PCR基因分型的研究

用随机扩增多态性DNA 技术（RAPD）对来自2个集约化奶牛场不同奶牛乳房炎病例分出的16株金黄色葡萄球菌进行了基因分型。分别用3个寡核苷酸引物扩增，仅OLP11引物可扩增出质量良好、具有RAPD特征的条带图谱。对反应体系的退火温度、模板浓度进行了筛选，模板原倍浓度、33℃的退火温度能使所有检测菌株产生清晰、可分辨、具有较好重复性的带谱。分型结果表明，16株菌可分为2个类群，其中14株位于同一类群，大多数菌株的相关系数差距仅为0.04，这一结果提示这些菌株可能具有相同的来源和相似的遗传背景。     

如何进行奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌疫苗的合理评估

奶牛乳房炎是造成全球奶业经济损失的主要原因,而金黄色葡萄球菌是最主要的病原菌。本文系统、直观地对研究奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌疫苗的科研结论进行量化总结和评估,目的是为奶牛乳房炎疫苗的研发提供新思路,为设计合理的奶牛乳房炎疫苗给动物评估试验方案提供科学依据。本文在Pubmed、Science数据库和CNKI数据库对＂奶牛乳房炎疫苗＂类的文章进行了合理的电子检索,然后对细菌疫苗、细菌类毒素疫苗、DNA-重组蛋白疫苗、单一的重组蛋白疫苗等方面的科研论文从试验设计、方法、疫苗类型和研究结果 4个方面进行了全面的分析。结果表明,采用DNA、重组蛋白新技术的疫苗和传统的细菌疫苗已取得良好效果,疫苗可以成为预防和控制金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的最好或最有前景的一种途径。但是研究方法差异和双盲试验的缺乏阻碍对疫苗效果的合理评估。     

金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎多价疫苗的研制和免疫效果评价

为研制用于预防金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的免疫疫苗,使用4株血清型为外膜多糖336型(336PS)、荚膜多糖5型(CP5)和荚膜多糖8型(CP8)强毒力金黄色葡萄球菌试制出金黄色葡萄球菌多价疫苗,并通过抗体水平监测、攻毒保护试验以及两个牧场的田间试验对免疫效果进行了评价。抗体水平监测显示,首免后30 d即可产生较高的抗体水平,二次免疫后有效抗体水平可持续到产后210 d;人工攻毒保护试验显示,疫苗对金黄色葡萄球菌引起的临床型乳房炎的保护率为89%;田间试验结果表明,该疫苗对奶牛临床型乳房炎的保护率在75.2%～83.3%之间,对隐性乳房炎的保护率在49.9%～52.2%之间,免疫组日产奶量较对照组平均提高1.26 kg以上。上述结果表明,所试制的疫苗可以显著降低泌乳牛金黄色葡萄球菌引起的临床型和隐性乳房炎发病率并提高产奶量。     

我国部分省区牛源金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性调查

为调查我国奶牛乳房炎奶样中金黄色葡萄球菌的药物敏感性情况,以便为该病的临床用药提供参考,本试验采用纸片扩散法对从北京、山西、内蒙古、新疆、浙江5省区奶牛乳房炎奶样中分离的148株金黄色葡萄球菌进行了抗菌药物敏感性检测。北京、山西、内蒙古分离株的临床药敏试验显示,所有菌株对头孢西丁、多西环素、四环素敏感或中介,对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明严重耐药,对氯霉素、环丙沙星和庆大霉素的敏感性有地域性差异,66%～100%的菌株同时对3种以上的抗菌药物耐药;新疆86株分离株和浙江20株分离株的临床药敏试验显示,所有菌株除对红霉素、克林霉素、青霉素、复方新诺明耐药外,对多西环素和四环素完全耐药,86%以上的分离株对5种以上抗菌药物耐药,同时还发现头孢西丁耐药株。调查结果显示,5省区乳房炎奶样中的金黄色葡萄球菌除对头孢类(头孢西丁)敏感外,对其他类型抗菌药物均存在一定程度的耐药,尤其对大环内酯类(红霉素)、林可胺类(克林霉素)、青霉素类(青霉素)、磺胺类(复方新诺明)抗菌药物严重耐药,对3～5种以上不同类型抗菌药物的多重耐药也较为普遍。调查表明,牛源性金黄色葡萄球菌耐药性的广泛存在将对金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的抗菌药物治疗形成严重挑战。     

金黄色葡萄球菌诱发建立乳房炎小鼠病理模型

为了建立小鼠乳房炎模型,将30只昆明小鼠随机分成3组,分别经第4对乳腺注入50μL的生理盐水、1.0×105CFU/mL和2.0×105CFU/mL的金黄色葡萄球菌,观察乳腺组织的外形和组织切片的变化;结果表明,注菌后24 h,小鼠出现明显的临床症状,乳腺出现不同程度的炎性症状,组织病理学显示腺泡腔内有大量嗜中性粒细胞浸润,泡腔间隔增宽。说明金黄色葡萄球菌能够诱发试验性乳房炎。     

戊二醛-癸甲溴铵复合剂对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的杀菌作用研究

为评价戊二醛-癸甲溴铵复合剂在不同条件下对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的杀菌效果,本研究通过悬液定量杀菌试验探究戊二醛-癸甲溴铵复合剂在不同环境温度（4℃、25℃、37℃）、不同作用时间（1 min,5 min,10 min）以及存在有机干扰物（3%、25%的牛血清白蛋白）等条件下对猪源大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的杀菌作用。结果显示,在没有有机物干扰时,浓度为167 mg/L的戊二醛-癸甲溴铵复合剂在4℃、25℃、 37℃下均可在5 min内完全杀灭2种受试菌（107CFU）,说明环境温度对该复合剂的杀菌作用影响不明显。当有机物浓度为3%时,该复合剂在10 min内完全杀灭大肠埃希菌的最低浓度为250 mg/L,金黄色葡萄球菌为125 mg/L;有机物浓度为25%时,作用时间不低于10 min,完全杀灭大肠埃希菌的最低浓度为1000 mg/L,金黄色葡萄球菌为1250 mg/L。有机物含量高杀灭相同数量受试菌所需复合剂的量也需要加大、作用时间延长,说明有机干扰物对复合剂的杀菌作用影响较大。本研究结果提示,为达到较好的杀菌效果,建议养殖场在使用戊二醛-癸甲溴铵复合剂时的有效浓度不低于1250 mg/L、作用时间10 min以上时杀菌效果更好。     

长春部分地区奶牛隐性乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及耐药性研究

采用SMT方法,从长春部分地区规模化奶牛场及散养农户各筛选30份患隐性乳房炎牛奶样品,经分离培养及鉴定,17份样品检出金黄色葡萄球菌,其中规模化牛场6份,散养户11份。通过动物致病性试验和药敏试验,结果表明,所分离的金黄色葡萄球菌均具有致病性,所有菌株对链霉素、氨苄青霉素等均具耐药性;多数菌株对头孢噻肟钠和庆大霉素等药物表现为高度敏感;个别菌株对头孢噻肟钠和庆大霉素等中度敏感。     

盐穗木提取物对金黄色葡萄球菌抑菌效果研究

为了解盐穗木提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果,解决金黄色葡萄球菌耐药性的问题,笔者测定盐穗木乙醇提取物和正丁醇萃取物的抑菌圈直径、最低抑菌浓度(MIC)、最低杀菌浓度(MBC)及生长曲线。结果表明,盐穗木正丁醇萃取物的抑菌活性显著高于乙醇提取物,盐穗木乙醇提取物和盐穗木正丁醇萃取物的MIC分别为150.00 mg/mL和25.00 mg/mL,MBC分别为250.00 mg/mL和50.00 mg/mL。说明盐穗木正丁醇萃取物有良好的抑菌效果,可为新型抗菌药物的研发奠定基础。     

PCR扩增Nuc基因检测奶牛乳腺炎致病性金黄色葡萄球菌

为建立奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌致病菌株的检测方法,依据金黄色葡萄球菌耐热核酸酶Nuc基因序列,设计合成特异性引物,通过聚合酶链式反应扩增Nuc基因,并将扩增基因克隆入T载体,进行序列测定,对所分离的奶牛乳腺炎病原菌进行鉴定。结果显示:金黄色葡萄球菌扩增出特异性条带,大小为694bp;其他菌株未出现条带。敏感性检测的最低浓度为1.25×103cfu/mL。本试验所建立的方法具有特异性强、敏感度高的特点。