鸭病毒性肝炎实验室诊断方法的研究

将鸭病毒性肝炎病毒（duck hepatitis virus DHV)(ATCC株）用鸡胚传一代后，测出此病毒的鸡胚半数致死量（ELD50）为10^-5.5。通过多次重复试验,闻利用鸡胚中和试验和雏鸭中和试验检测鸭病毒性肝炎（DVH）的诊断方法，7株DHV毒株在鸡胚中和试验中的结果是：胚传一代尿囊液死亡率为2／8－5／8，1：10血清中和保护率为8／8，1：1000肝病料死亡率为3／8－8／8，1：10血清中和保护率为8／8，正常对照全部存活，雏鸭中和试验的结果是：24小时内1：10肝病料死亡率为3／8－8／8，1：5血清中和保护率为8／8，正常对照全部存活。     

鸭病毒性肝炎实验室诊断方法-鸡胚中和试验的观察

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒（DHV）引起的一种雏鸭高度致死性传染病;该病主要侵害4周龄以内的雏鸭,特别是不足一周龄的无母源抗体的雏鸭最易感,病鸭突然发病,病程短促,数小时即死亡,死亡率高达90%。DHV有三种血清型,无交叉保护作用。目前,I型呈世界性分布,II型和III型鸭病毒性肝炎分别局限于英国和美国,在国内,I型鸭病毒性肝炎有多次流行,鸭病毒性肝炎病毒（DHV）在鸡胚上增值,引起鸡胚规律死亡,所以鸡胚中和试验是常规方法,在该病的检测上仍有切实的应用价值,选择合适的鸡胚适应毒株对鸡胚中和试验是非常关键和重要的。通过一系列实验,筛选确定（DHV）的适用毒株,毒力适中,鸡胚死亡规律整齐,方便实验判断,几年来检测进境水禽6群,皆无鸭病毒性肝炎鸡胚中和母源抗体,检测免疫群鸡胚中和抗体滴度40～80倍,阳性对照血清中和保护滴度1 280倍,毒株稳定实验效果满意。     

琼脂免疫扩散试验检测鸭肝炎病毒抗体的研究

自Levine和Fabricant（1950）首次在鸭胚中分离到鸭肝炎病毒（DHV）以来[1]，各国学者对鸭病毒性肝炎的血清学诊断和免疫学监测等方面进行了大量研究。本病的琼扩试验虽有报道，但被认为特异性、敏感性存在欠缺。然而建立一快速简易、比较可靠且易被基层推广应用的检测手段是非常必要的。鉴于此，我们进行了琼扩（AGID）试验的研究，并取得较好结果。1材料与方法1．1材料1．1．1种毒：DHVC81弱毒株、ATCC（C9／D2）标准毒株、E52弱毒疫苗由南京农业大学动物医学院提供。1．1．2鸡胚：购自上海市农科院畜牧所。1．1．3试验鸭：来源于…     

鸭病毒性肝炎（DHV）诊断方法的研究

鸭病毒性肝炎（duck hepatitis virus DHV)病毒（ATCC株）用鸡胚胚传一代后，测出其鸡胚半数致死量（EID50）为10^-5.5。7株DHV毒株用鸡胚中和试验的结果是：胚传一代尿囊液死亡率为2/8-5/8，1：10血清中和保护率为对8/8；1：1000肝病料死亡率为3/8-8/8，1：10血清中和保护率8/8，正常对照全部存活，雏鸭中和实验的结果是：24小时内1：10肝病料死亡率计较3/8-8/8，1：5血清中和保护率为8/8，正常对照全部存活。     

雏鸭病毒性肝炎的分离与初步鉴定

取北京郊区某鸭场的病鸭肝脏制备病料,通过9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔接种,结果显示所分离的毒株能使鸡胚发育迟缓、胚爪发育畸形、肝脏变绿。分离病毒回2日龄健康雏鸭进行动物试验,能使雏鸭在2~3 d内100％发生死亡,其发病症状及剖检病理变化与自然发病的小鸭一致。分离毒株对氯仿不敏感。病毒接种于鸭胚成纤维细胞后没观察到明显的CPE。血清中和试验表明分离病毒能被I型DHV标准血清所中和,证明分离的野毒株血清型为I型DHV,且毒力很强。     

Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒的分离与鉴定

从福州某鸭场大批发病和死亡的15～20日龄雏鸭肝脾中分离到1株病毒，该病毒无血凝性，可使4日龄健康鸭90．6％发病、62．5％死亡，利用Ⅰ型鸭肝炎病毒（DH）标准血清进行鸡胚中和试验和血清被动免疫保护试验，证明该分离的病毒株为I型DHV。     

鸭肝炎病毒的分离鉴定

取北京郊区某鸭场的病鸭肝脏制备病料,接种9~11日龄SPF鸡胚尿囊腔,结果显示所分离的毒株能使鸡胚发育迟缓,胚爪发育畸形,肝脏变绿。分离病毒接种2日龄健康雏鸭进行动物试验,能使雏鸭在2~3 d内100%发生死亡,其发病症状及剖检病理变化与自然发病的小鸭一致。分离毒对氯仿不敏感。病毒接种于鸭胚成纤维细胞后没有观察到明显的CPE。血清中和试验表明分离病毒能被I型鸭瘟病毒(DHV)标准血清所中和。应用RT-PCR方法对病鸭的肝脏悬液及鸭胚尿囊液进行检测并测序,证明所分离病毒为I型DHV。     

黑龙江省鸭肝炎病毒HD—Ⅰ株的分离与鉴定

从黑龙江省某鸭场疑似鸭病毒性肝炎(DVH)的发病雏鸭肝等组织中分离到1株病毒HD—Ⅰ株。经病理学检查、电镜观察、鸭胚中和试验、雏鸭保护试验、动物回归试验等鉴定为血清Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV)。证实引起该鸭场雏鸭发病和死亡的主要原因为DVH所致。用DHV标准R85952毒株多次强化免疫健康鸡，获得高效价的鸡抗鸭肝炎超免疫抗体。     

新型鸭肝炎病毒流行病学调查及免疫防治试验

本试验通过鸭胚尿囊腔接种，对我国部分省市采集的死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，获得9个病毒分离株。这些分离株对10日龄鸭胚的致死率为100％，人工感染6日龄雏鸭的致死率为0～100％不等。死亡鸭呈角弓反张姿势，剖检可见肝脏肿大，有出血点或出血斑。将9株分离株经鸭胚传至第5代，收集鸭胚尿囊液毒测定这些毒株的ELD50为10^-7.32／0．2ml～10^-3.5／0．2ml不等。用鸡抗1型DHV及新型DHV的血清进行中和试验，结果表明：有7株为新型DHV，有2株为1型DHV。对实验室早期分离的新型鸭肝炎病毒B株经过鸭胚传代致弱后，收集鸭胚尿囊液毒稀释成不同倍数对1日龄雏鸭进行免疫，并于10日龄时用新型鸭肝炎强毒进行攻毒保护试验，结果B20株在20倍稀释时，保护率达100％。采集免疫的雏鸭血清，中和试验测定血清的效价，雏鸭在免疫后可检测到中和抗体，第10天时抗体水平达到高峰，然后呈逐渐下降趋势。结果表明，B株经过鸭胚传代致弱后在毒力下降的同时仍保留一定的免疫原性．可以作为疫苗的候选株。     

雏鸭病毒性肝炎的研究

１９９１年从云南某地疑似鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）的病雏鸭肝脏分离到一株病毒，经鸡胚染试验，电镜形态观察，中和试验鉴定，证明为鸭病毒性肝炎病毒１型（ＤＨＶ－Ｉ）毒株。该病毒对鸡胚高度适应，传递至８０代对雏鸭无致病力，经易感雏鸭连传代毒力无反强现象，故命名为ＤＨＶ－ＫＭ６０株。鸡胚测试其滴度为ＬＤ５０１０６－７．３２／０．２ｍｌ。采用ＤＨＶ－ＫＭ６０制备疫苗，经口服免疫，对１日龄雏鸭的安全性高，免疫原性     

鸭肝炎病毒GD株的分离与RT-PCR鉴定分析

本研究分离了1株鸭肝炎病毒(duck hepatitis virus,DHV),并对其进行了分型研究。取广东某鸭场疑似DHV致死8日龄雏鸭肝脏,肝脏组织处理后经鸭胚接种分离纯化病毒。分离毒株经动物回归试验、ELD₅₀测定、中和试验等确定为血清Ⅰ型DHV,同时通过RT-PCR检测及序列分析,从基因分型角度也验证分离毒株为DHV-Ⅰ,并将该分离毒命名为GD株。     

一株广西新型鸭肝炎病毒的分离与初步鉴定

从广西南宁疑似鸭病毒性肝炎（DVH）的发病鸭群中分离到1株鸭肝炎病毒（DHV）,命名为GX—NN201201株,其鸭胚半数致死量（ELD50）为10-4.5／0．2mL。对分离毒株GXNN201201进行了DHVRT—PCR诊断、部分片段基因的克隆、序列测定与动物回归试验,结果表明：分离病毒的核酸能被韩国新型DHV特异性引物扩增,而不能被DHV-1的特异性引物扩增。GXNN201201分离株与韩国新型DHV及其他类韩国新型DHV之间的核苷酸序列同源性高达94．0％～98．9％,而与DHV-1疫苗毒株及台湾新型DHV之间的同源性则较低。遗传进化关系分析结果进一步表明该分离株与韩国新型DHV分布在同一分支上,并且与国内类韩国新型DHVGD株的遗传关系最近,属于基因C型DHV。人工感染的病死鸭可见典型的DVH临床特征,与临床发病表现相似。因此,初步确定GX—NN201201为广西新型DHV。     

鸭肝炎病毒A66弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养

将鸡胚致弱的鸭肝炎病毒 ( DH V) A6 6 株接种于鸡胚成纤维细胞 ( CEF)进行细胞培养 ,通过对细胞培养物进行病毒滴度测定、鸡胚中和试验和电镜检查 ,证明了 DHV A6 6 毒株能够在 CEF上增殖。试验还表明 ,犊牛血清对 DH V增殖具有明显的抑制作用。此外 ,还根据细胞培养物病毒滴度测定结果绘制出了病毒在 CEF上的生长曲线。     

鸭副粘病毒强毒株的分离和鉴定

采用鸡胚接种法从安徽凤阳某患病肉鸭群中分离到一株病毒。该素株对鸡红细胞具有凝集性，并可被康复鸭鸭血清和NDV阳性抗血清所抑制，而不能被禽流感标准阳性血清抑制，结合血清中和鸡胚接种试验，病毒回归试验和免疫防治效果的研究结果，确认为鸭副粘病毒。参照国际上规定的新城疫病毒毒力判定的标准及其方法，测定该分离株的鸡胚最小致死量平均死亡时间（MDT），1日龄鸡及脑内接种致病指数（ICPI）和6周龄鸡静脉内接种致病指数（IVPI）分别为48.9h,1.80和2．45。表明该鸭副粘病天线离株具有新城疫病毒（NDV）速发型相类似的毒力，属强毒力毒株，并定名为WF00D株。     

鸭肝炎病毒FC64株的全基因组序列测定与分析

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒(DHV)引起的一种鸭的重要传染病,弱毒苗可有效预防该病的发生.从临床上分离获得一株DHV强毒株,经SPF鸡胚传64代后,培育成为弱毒株,命名为FC64.为了对该弱毒疫苗进行遗传背景分析,测定了该毒株的全基因组序列,经分析表明,FC64属于血清1型DHV弱毒株,基因组长度为7 692 bp(未...     

鸭肝炎病毒BD-Ⅰ株的分离鉴定

本试验通过鸡胚尿囊腔接种,对河北省保定地区采集的死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,获得1株病毒,经病理学检查、电镜观察、理化特性试验、中和试验、PCR检测、动物回归试验等鉴定为血清Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV),命名为BD-Ⅰ株.     

鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体的研制及应用

应用雏鸭病毒性肝炎病毒（DHV）弱毒疫苗和DHV油乳剂灭活苗多次免疫产蛋鸡，制备鸡抗鸭病毒性肝炎高免卵黄抗体，自制鸭病毒性肝炎病毒高免卵黄抗体的疗效取决于卵黄抗体的中和效价及治疗的时间。实验室试验及临床应用结果表明，卵黄抗体的中和效价应达2^8以上，并且在感染DHV 24h以内对雏鸭进行肌肉注射，治疗效果最为理想。     

番鸭源鸭肝炎病毒CH12株的分离与全基因组序列分析

从浙江省某疑似鸭病毒性肝炎的发病番鸭群分离到1株鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV）CH12株,分离毒株经动物回归试验、ELD50测定、中和试验等确定为DHV-1（基因A型DHV）。通过RT-PCR方法对DHV CH12株的全基因组序列进行分段扩增并测序。结果表明,CH12株的全基因组长度为7690 bp（不包括PolyA）,包括626 bp的5′UTR,6747 bp的ORF和317 bp的3′UTR。CH12株各基因均与基因A型DHV毒株的序列相似性较高,与基因B型和基因C型DHV毒株的序列相似性较低。全基因组核苷酸、多聚蛋白、VP0、VP3、VP1、2C和3D基因的进化分析均显示,CH12株均与基因A型DHV在同一进化分支上,亲缘关系较近,属于基因A型DHV。     

Ⅰ型鸭肝炎病毒的分离与鉴定

鸭病毒性肝炎(duck virus hepatitis,DVH)是造成养鸭业严重经济损失的传染病之一。作者对松原市某鸭场送检的病死鸭进行病毒分离试验、雏鸭回归试验、DHV分离株ELD₅₀测定、雏鸭保护试验、鸡胚中和试验、鸭胚接种试验和电镜观察等,确诊该病为Ⅰ型鸭病毒性肝炎。试验所分离得到的Ⅰ型鸭肝炎病毒与标准毒株的回归试验病理特征存在一定差异,其基因序列的测定及分析还有待于进一步研究。     

NDV与DHV于鸭胚培育时均无鸡红细胞血凝易忽视两者的混合感染

从雏鸭流行病群的病料,获一分离物。它致死非免鸡胚和无母源NDV抗体一日龄来杭雏鸡100％;免疫中雏,11天后NDVF_(48)E_8强毒攻击得安全结果。也能致死一日龄实验雏鸭50～100％;分别与NDV和DHV阳性血清中和,各自接种10只一日龄雏鸭,前中和组死雏鸭50％,后中和组全健活。最终实验证明该分离物,乃NDV自然弱毒株和DHV强毒株的混合物。发人兴趣的是以上混合毒在鸭胚繁殖时无鸡红细胞血凝,转接鸡胚一代,血凝度为1:16,二代为1:32～64。这一现象当以鸭胚分离时,易导致两者混合感染的忽视。