鸡传染性喉气管炎弱毒活疫苗生产工艺的优化及改进试验

《中华人民共和国兽用生物制品规程》规定,在生产鸡传染性喉气管炎弱毒活疫苗时,采用鸡胚尿囊腔接种和人工气室绒毛尿囊膜接种工艺生产成品。由于人工气室绒毛尿囊膜接种早死胚多,而且工艺比较繁琐,所以我国大多数生产企业在生产中多采用尿囊腔接种方法,但尿囊腔接种后病毒繁殖时间要比人工气室绒毛尿囊膜接种后延长1~2 d,增加了孵化成本,而且绒毛尿囊膜病变(增厚、水肿等)也不如人工气室绒毛尿囊膜接种后产生的病变严重(膜重)。为此,借鉴了鸡痘鹌鹑化弱毒活疫苗的新生产工艺———鸡胚绒毛尿囊膜渗透法[1],并将此方法用于鸡传染性喉气管炎…     

不同日龄鸡胚接种不同浓度病毒对鸽新城疫病毒PB9601株鸡胚适应毒产毒量比较

利用不同浓度的鸽新城疫病毒（NDV）PB9601株在不同日龄的鸡胚上繁殖，观察鸡胚的死亡时间、尿囊液的收获量，并分别测定尿囊液中HA滴度和ELD50值，比较结果表明，以1：500稀释液0．1ml接种9日龄SPF鸡胚或1：100稀释液0．1ml接种10日龄胚产毒量最高。     

鸡减蛋综合征油乳剂灭活苗的研制

采用鸡减蛋综合征(EDS76)K-11株细胞毒为种毒，通过鸭胚连续盲传5代，使其扩增，收获尿囊液作为基础种子毒。基础种子毒在非免疫健康鸭胚上增殖动态的试验结果表明，EDS76病毒在羊水、尿囊膜(包含羊膜)、尿囊液中含量较高，增殖动态趋于一致；接种病毒后120h为最佳收毒时间，突破了传统的只收集尿囊液作为病毒材料的做法，使收获的病毒材料由原来的每胚5．2ml增加到每胚49．4ml，显著降低了研究费用和制苗成本。确定了0．1％甲醛在20℃条件下48h灭活病毒为最佳灭活方法。成功地研制出尿囊膜、羊膜、羊水、尿囊液四元材料混合的EDS76油乳剂灭活疫苗。此疫苗在甘肃省推广试用80万羽份，安全可靠，免疫持续期长，能有效地预防和控制EDS76的发生和流行。     

白喉型鸡痘病毒Gibbs株免疫特性研究

白喉型鸡痘病毒Gibbs株能在鸡胚绒毛尿囊膜上良好增殖，接种后１２０小时，绒毛尿囊膜明显水肿，且淡黄色痘斑，其毒价达到１０^5.25-10^5.83EID50/0.2ml。用１０倍稀释的病毒悬液肌肉注射１３日龄雏鸡，无任何不良反应。用１００倍稀释病毒液皮下刺种免疫１４－４０日龄鸡，接种后３－６天，接种局部出现痘痂，接种后１４天，用１０倍稀释的Ｇibbs株病毒液二次皮下刺种或用鸡痘野毒株经腿部毛作擦，免疫未见任何局部反应或其它异常，保护率达１００％。，免疫后１６５天，保护率仍达８０％，试验结果证实该毒株具有良好的免疫原性和安全性。     

鸡新城疫与鸡痘二联活疫苗的研究

目前,我国各兽药生物制品厂所生产的鸡痘活疫苗一般分为两种,一种是鸡痘组织苗,即在鸡胚绒毛尿囊膜上接种鸡痘种毒,接种后120小时收获其增厚、水肿和有痘斑的全部绒毛尿囊膜制备的鸡痘苗,另一种则是鸡痘细胞苗,在免疫原性上前者要好于后者.鸡胚在接种鸡痘种毒后,不但绒毛尿囊膜产毒,而且其尿囊液和出现充血的胎儿中也会有很高浓度的鸡痘病毒.而制造鸡新城疫疫苗主要是收取尿囊液.     

鸡传染性法氏囊病的实验室诊断

采集病死鸡法氏囊经处理后绒毛尿囊膜途径接种5枚SPF鸡胚,接种胚均于接种后48~96 h死亡,死亡胚病变特征为体表和皮下出血,胚水肿,肾脏出血,肝脏有坏死灶,心肌苍白。琼扩试验结果显示法氏囊样品孔、绒毛尿囊膜样品孔与标准血清孔间均可出现明显的沉淀线,说明样品中含有传染性法氏囊病病毒。根据实验室检查情况,诊断为鸡传染性法氏囊病。     

鸡传染性喉气管炎病毒和肾型支气管炎病毒同胚增殖的研究

将鸡传染性喉气管炎(ILT)病毒悬液和鸡传染性支气管炎(IB)病毒悬液，采取不同浓度，不同时间在同一个鸡胚上进行接种，可使两种病毒之间互不干扰，并能在同一鸡胚上共同增殖。取鸡胚绒毛尿囊膜检测传染性喉气管炎病毒(ILTV)，其EID50为10^55/0.2ml，取尿囊液检测传染性支气管炎病毒(IBV)，其EID50为10^63/0．2ml。与单项接种对照组相同；用同胚增殖的绒毛尿囊膜和尿囊液按一定比例混合，制造二联油乳剂灭活苗，免疫后30d和6个月后分别用ILT、IB强毒进行攻毒试验，结果免疫后30d，ILT和IB的保护率均为100％，免疫后6个月，ILT和IB的保护率分别为95.3％、86．7％。本试验结果表明，用此方法增殖病毒，既降低了成本，又保证了免疫效果，为今后制造二联苗提供了科学的依据。     

鸡传染性支气管炎H株和D株疫苗比较研究

鸡传染性支气管炎是严重危害养鸡业的疾病之一，在广东对本病的主要兽医防疫措施是接种H株或D株疫苗。本文对这两株疫苗及其应用效果进行比较，现将结果报告如下。1试验材料1．1鸡传染性支气管炎疫苗病毒（IBV）H120株（自中国兽药监察所）、D41株（自广东兽医研究所）和B1系新城疫毒（自南京药械厂），种毒原液均10倍稀释后经尿囊腔接种SPF鸡胚0．2ml／只，37℃培养36小时，收取尿囊液备用。1．2鸡胚蛋购自中国兽药监察所（SPF蛋）和仲凯农技学院（非免疫蛋）。1．3试验小鸡为非免疫1日龄石歧杂黄鸡，购自广州市郊。2方法和结果2．1…     

鹅副粘病毒冻融前后EID50比较

病毒在分离培养过程中,常需要冻融使病毒从组织中充分释放,但反复冻融可能使许多病毒很快灭活。为此,本人利用鹅副粘病毒分离株进行了冻融前后效价对比,以探索其变化规律,现报告如下:1材料和方法1.1种毒鹅副粘病毒YG97株,由扬州大学畜牧兽医学院王永坤教授惠赠。1.2SPF鸡胚本中心SPF鸡场提供。1.3鸡胚半数感染量的测定YG97种毒1押1000稀释,尿囊腔接种10日龄SPF鸡胚,每胚0.1ml,37℃继续孵化,分别收集正常死亡鸡胚的尿囊液、尿囊膜和胚体作为试验材料。每种试验材料均分成2组,第一组冻融一次,第二组不冻融,然后按常规方法,每种材料10倍…     

新型鸭肝炎病毒流行病学调查及免疫防治试验

本试验通过鸭胚尿囊腔接种，对我国部分省市采集的死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，获得9个病毒分离株。这些分离株对10日龄鸭胚的致死率为100％，人工感染6日龄雏鸭的致死率为0～100％不等。死亡鸭呈角弓反张姿势，剖检可见肝脏肿大，有出血点或出血斑。将9株分离株经鸭胚传至第5代，收集鸭胚尿囊液毒测定这些毒株的ELD50为10^-7.32／0．2ml～10^-3.5／0．2ml不等。用鸡抗1型DHV及新型DHV的血清进行中和试验，结果表明：有7株为新型DHV，有2株为1型DHV。对实验室早期分离的新型鸭肝炎病毒B株经过鸭胚传代致弱后，收集鸭胚尿囊液毒稀释成不同倍数对1日龄雏鸭进行免疫，并于10日龄时用新型鸭肝炎强毒进行攻毒保护试验，结果B20株在20倍稀释时，保护率达100％。采集免疫的雏鸭血清，中和试验测定血清的效价，雏鸭在免疫后可检测到中和抗体，第10天时抗体水平达到高峰，然后呈逐渐下降趋势。结果表明，B株经过鸭胚传代致弱后在毒力下降的同时仍保留一定的免疫原性．可以作为疫苗的候选株。     

鸡胚绒毛尿囊膜渗透法在鸡新城疫活疫苗(Ⅰ系株)生产中的应用试验

与传统尿囊腔接种方法相比，用绒毛尿囊膜渗透接种的方法感染鸡胚，收获胚液制备疫苗，解决了接种后部分鸡胚在规定时间内不死的问题，可明显提高鸡胚利用率和降低生产成本。     

藏药“十三味红花丸”对鸡新城疫病毒鸡胚复制抑制试验

选用 10日龄SPF鸡胚 ,对藏药“十三味红花丸”进行了人工感染鸡新城疫病毒 (NDV)的抑制试验。结果显示 :藏药药液 ( 1g/mL)用 2倍、 4倍和 6倍稀释 ,对鸡胚感染NDV的保护率分别达 10 0 %、 90 %和 80 % ,比NDV强毒对照组分别提高 80、 70和 6 0个百分点。NDV强毒接种组的鸡胚尿囊液NDV血凝效价明显高于NDV强毒 +藏药药液组的鸡胚尿囊液NDV血凝效价     

雏鸭病毒性肝炎的诊治

取疑似雏鸭病毒性肝炎病死鸭肝脏制成1:1匀浆,分别接种9日龄鸡胚和11日龄鸭胚,鸡、鸭胚均于接种后24～36小时全部死亡,取鸡胚尿囊膜制成1:2匀浆接种11日龄鸭胚,鸭胚于接种后64小时死亡,取鸡胚尿囊液回归4日龄雏鸭进行人工发病雏鸭于24～96小时全部死亡;用已知抗鸭肝病毒卵黄液对发病鸭群紧急被动免疫注射,病鸭群于注射后3天全面停止死亡,取鸡、鸭胚尿囊液制成油乳剂免疫产蛋鸡,免疫后21天的鸡卵黄经3倍稀释,1ml可抵抗10~(-2)0.5ml鸡胚尿囊液对2日龄樱桃谷鸭的致病性,获100％保护,而对照鸭的发病率为100％,致死率为66.7％,从而确诊某鸭群为雏鸭病毒性肝炎,用鸭肝病毒无需灭活制成油乳剂免疫产蛋鸡以制取抗鸭肝病毒鸡源性卵黄抗体防治雏鸭病毒性肝炎,取材方便,制作简单,疗效显著,值得推广和应用。     

蛋鸭常用疫苗的选择和使用

1 雏鸭肝炎弱毒疫苗 本品用于预防雏鸭肝炎．采用雏鸭肝炎鸡胚化或鸭胚化弱毒株,接种12～14日龄鸭胚尿囊腔或9～10日龄鸡胚尿囊腔,收获48-96h内死亡胚的尿囊液,加入5％蔗糖脱脂乳,经冷冻真空干燥制成。呈乳白色海绵状疏松团块,加稀释液后迅速溶解。     

鸡胚和雏鸡接种ALV-J相关急性纤维肉瘤浸出液的致病性比较

为了比较鸡胚接种ALV-J相关急性纤维肉瘤浸出液对胚体及雏鸡的致病性,将含ALV-J相关病毒的肉瘤浸出液分别经5日龄胚卵黄囊、11日龄胚绒毛尿囊膜、1日龄雏鸡腹腔接种,比较不同接种方式对SPF鸡胚及雏鸡的致病性.结果表明,5日龄卵黄囊接种的鸡胚在18～22日龄死胚率为14/30,肿瘤发生率为8/14; 11日龄绒毛尿囊膜接种的鸡胚在18～22日龄引起鸡胚死亡率为17/30,肿瘤发生率为6/17.对雏鸡的致病性比较表明,绒毛尿囊膜接种的13只出壳雏鸡全部死亡,有11只出现肿瘤.结果提示,绒毛尿囊膜接种的致病性不仅高于卵黄囊接种,也高于1日龄雏鸡接种.绒毛尿囊膜接种不仅肿瘤发生率高,且发生得更早、更快,可作为这种急性纤维肉瘤进一步作人工造病的实验模型.     

湖南省鸵鸟新城疫病毒的分离及生物学特性测定

湘南某鸵鸟养殖场饲养的鸵鸟发生一起疫病 ,疑似鸵鸟新城疫 ,为了准确迅速地对其进行确诊 ,用 SPF鸡胚进行病毒的分离 ,进行了HA、HI、病毒中和试验及生物学特性测定。结果最初接种的 SPF鸡胚 48～ 96h全部死亡 ,其尿囊液 HA效价为 2 3,死亡胚充血、出血 ,将尿囊液继续传代至第 3代时 ,死亡胚尿囊液 HA在收稿日期 :2 0 0 3- 0 4 - 0 9基金项目 :湖南省林业厅资助 (97- 2 4 )作者简介 :刘振湘 (1971- ) ,男 ,湖南耒阳人 ,湖南环境生物职业技术学院讲师。主要从事预防兽医学的教学与科研工作。2 5～ 2 6 ;其 ND HI试验为阳性 ;鸡胚中和试验结果接种经 ND标准阳性血清处理的病料未见死亡 ,HA效价为 2 0 ,而接种未经处理病料的鸡胚于 2 6～ 3 8h后全部死亡 ,HA效价为 2 6～ 7;其生物学特性测定结果 ICPI为 1 .62 ,IVPI为 1 .0 ,MDT为 45h,对氯仿和酸敏感 ,NHAT为慢 ,HOT为 1 5min。结果表明该分离毒为 NDV并表现出与鸡 NDV相同的特性。     

鸡新城疫病毒抗原制备参数优化相关性研究

本试验主要以NDV弱毒株为试验对象探讨了几种培养因素对鸡胚尿囊液收量和血凝效价的影响。试验选择9、10、11日龄非免疫鸡胚以3个接种剂量分别接种NDV Lasota株病毒液于鸡胚尿囊腔中。结果表明,选用10日龄鸡胚接种剂量为0.1ml/枚时获得尿囊液量和血凝效价为最高。     

禽流感病毒H9亚型灭活油乳剂疫苗的免疫试验

以低致病性禽流感病毒（AIV）H9N2亚型株的鸡胚适应毒经尿囊腔接种10日龄鸡胚，从24h后死亡胚及96h后4℃致冷死亡胚收集尿囊液，尿囊液的血凝价约7log2，每毫长约含10^8.6个ELD50的病毒。将尿囊液经0.1%福马林灭活后，用超滤器将尿囊液浓缩5倍后分别制成双联灭活疫苗。对4周龄SPF鸡肌肉注射0.5ml或0.3ml单联H9亚型AIV灭活苗，在接种后2、3、4、5周后，血清中对H9亚型AIV的血凝抑制（HI）抗体效价分别是5.1、7.2、8.3、10log2或3.8、6.5、6.3、8.31log2。注射0.5ml的H9亚型AIV和NDV二联油乳苗的鸡，在接种后2、3、4、5周对H9亚型AIV及Lasota株NDV的HI滴度分别是4.6、5.6、6.7、8log2及7、7.6、6.7、7log2。显然，二联苗对H9亚型AIV及NDV均产生了理想的免疫效果。     

冻干种毒在制备鸡传染性喉气管炎和鸡痘活疫苗生产中的应用

生产设苗制备能长期保存且稳定性好、高滴度的生产种毒(种毒批 )是生产的关键。笔者结合生产实际 ,制备了鸡传染性喉气管炎和鸡痘冻干种毒 (种毒批 ) ,实践应用效果很好 ,现介绍给同行以供参考。1　材料和方法1.1　生产种毒鸡痘基础种子由中国兽医药品监察所提供的冻干鸡痘鹌鹑化弱毒Ｆ2 82Ｅ4株。经ＳＰＦ鸡舍提供的ＳＰＦ鸡胚绒毛尿囊膜传代 ,作为生产种毒 ,于 - 2 0℃保存。鸡传染性喉气管炎基础种子由广东生物药厂提供的Ｋ3 17株。经黑龙江省生物制品一厂ＳＰＦ舍提供ＳＰＦ鸡胚绒毛尿囊膜传代 ,作为生产种毒 - 2 0℃保存。1.2　鸡胚由…     

应用鸡胚培养试验检验鸡病毒病(Ⅲ)

4.5 鸡传染性支气管炎病料呼吸道分泌物,有病变的气管、肺。制成5—10倍悬液。接种途径经绒毛尿囊膜接种8—10日龄鸡胚。培养结果检查即便病料中含有鸡传染性支气管炎病毒,初次接种鸡胚时,亦缺乏显著病痕。然而,当用接种鸡胚尿囊液,经鸡胚连续继代2～3次后,再接种鸡胚时,便可出现本病特征性病变。鸡胚的死亡率,随继代次数的增加而增高,死亡时间亦随着提前。本病在鸡胚的特征性病变为,出现僵胚(侏儒胚)其大小有时仅为正常胚的