口蹄疫病毒O型、亚洲I型二价灭活疫苗的研究

对O型口蹄疫病毒OHM/02株和亚洲I型口蹄疫病毒Asia I-KZ/03株进行了部分生物学特性分析,结果表明它们对牛的毒力较强,传代后毒力稳定,OHM/02株半数感染量(ID50)在107.5～108.25/0.2mL,Asia I-KZ/03株半数感染量(ID50)在106.75～107.5/0.2mL之间,适合做检验用毒;同时该2株毒易感染乳鼠,适应BHK21细胞,对乳鼠毒的半数致死量(LD50)OHM/02株毒在107.0～109.0/0.2mL,Asia I-KZ/03株毒在107.0～108.5/0.2mL;通过攻毒保护试验证实,病毒的免疫原性良好,制备的细胞毒灭活疫苗均达到3个以上的PD50.通过病毒大规模生产工艺的探索(转瓶培养和悬浮培养)、疫苗佐剂的研究、免疫持续期的监测和安全性等试验,成功研制了口蹄疫病毒O型、亚洲I型二价灭活疫苗,获农业部新兽药注册证书.     

口蹄疫病毒O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗的研究

对O型口蹄疫病毒OHM/02株和亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒AsiaⅠ-KZ/03株进行了部分生物学特性分析,结果表明它们对牛的毒力较强,传代后毒力稳定,OHM/02株半数感染量(ID50)在107.5～108.25/0.2mL,AsiaⅠ-KZ/03株半数感染量(ID50)在106.75～107.5/0.2mL之间,适合做检验用毒;同时该2株毒易感染乳鼠,适应BHK21细胞,对乳鼠毒的半数致死量(LD50)OHM/02株毒在107.0～109.0/0.2mL,AsiaⅠ-KZ/03株毒在107.0～108.5/0.2mL;通过攻毒保护试验证实,病毒的免疫原性良好,制备的细胞毒灭活疫苗均达到3个以上的PD50。通过病毒大规模生产工艺的探索(转瓶培养和悬浮培养)、疫苗佐剂的研究、免疫持续期的监测和安全性等试验,成功研制了口蹄疫病毒O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗,获农业部新兽药注册证书。     

通过检测非结构蛋白抗体评价口蹄疫疫苗纯度的研究

为探索通过检测非结构蛋白(NSPs)抗体的方法评价口蹄疫疫苗纯度的可行性,用不同纯化工艺制备口蹄疫O型、亚洲1型、A型三价灭活疫苗,重复免疫牛至少3次后,定期检测NSPs的ELISA抗体并统计分析抗体情况。结果显示,高度纯化疫苗组的NSPs抗体阴性率远高于普通纯化疫苗组,表明通过检测NSPs抗体评价口蹄疫疫苗纯度可以作为质量控制的一种方法。     

不同方法检测猪O型口蹄疫疫苗抗体效价与攻毒保护相关性研究

为评价不同检测方法检测的口蹄疫疫苗抗体效价与免疫保护率的相关性,使用O型液相阻断ELISA、正向间接血凝试验、VP1结构蛋白抗体ELISA三种检测方法对免疫不同类型O型口蹄疫疫苗的60头猪进行血清抗体跟踪测定,免疫21 d后,分别用OZK/93和O/(XJ/10-11/MYA/98)毒株进行攻毒保护实验.数据统计和分析结果显示,0型液相阻断ELISA试验测定的抗体效价与攻毒保护率存在着极显著的正相关性(P＜0.01),相关系数为0.75;正向间接血凝试验测定的抗体效价以及VP1结构蛋白抗体ELISA法测定的S/P值与攻毒保护率之间均不存在线性相关关系(P＞0.05).试验表明,O型液相阻断ELISA抗体检测方法可作为田间猪O型口蹄疫疫苗免疫效果的评价方法.     

O型口蹄疫抗体金标试纸盒检测免疫动物抗体效价与攻毒保护关系

本研究目的在于用O型口蹄疫金标试纸条研究免疫动物抗体效价与攻毒保护之间的对应关系以及免疫牛抗体消长规律.用金标试纸条检测了口蹄疫O型疫苗质量标准规定的牛、羊和猪免疫和攻毒血清抗体效价及不同免疫程序的牛血清效价.结果显示,当牛、猪和羊免疫血清稀释≥1∶8时,试纸条是阳性结果,表示有99％的被免疫动物属于抗体水平保护范围;被检测血清稀释≤1∶2时,是阴性结果,表示被免疫动物抗体水平属于不保护范围;血清稀释1∶2～1∶8时,是阳性结果,表示有50％的被免疫动物属于抗体水平保护范围.牛在首次免疫8周后加强免疫可以获得良好的保护率和保护时间.通过本试验确定了金标试纸条检测免疫动物抗体效价与攻毒保护之间的关系及牛加强免疫最佳的时间.     

规模猪场不同日龄仔猪O型和A型口蹄疫母源抗体消长规律及免疫效果监测

猪O型口蹄疫是政府强制免疫的动物疫病之一,而A型口蹄疫也明确规定根据各省的评估结果进行自行免疫。对猪场进行科学免疫是防控猪口蹄疫病毒感染的重要途径,为确定猪场口蹄疫疫苗的首免时间,以及掌握猪口蹄疫O/A二价灭活苗(O/HB/HK/99株+AF/72株)的免疫效果及应用,试验采用口蹄疫病毒O型/A型特异性抗体固相竞争ELISA(SPCE)检测试剂盒对不同日龄阶段仔猪母源抗体进行检测。结果显示:猪O型口蹄疫在7日龄后抗体水平可达到有效保护,21日龄左右达到最高水平,持续到50日龄左右抗体阳性率下降到50%;猪A型口蹄疫的母源抗体变化规律同O型,但同一日龄抗体水平均低于O型,在43日龄左右抗体阳性率便下降到了50%。结合两种母源抗体检测情况,在45日龄左右进行首免比较合适。同时通过对免疫后抗体水平的检测显示,90日龄后两种抗体阳性率均持续在77.8%以上,但口蹄疫O型在58～70日龄抗体阳性率只有66.7%,可能是该场首免时间太早,因此建议将该场首免时间调整到45日龄,同时3次免疫可确保猪对猪口蹄疫O型和A型野毒的抵抗力,能较好防止口蹄疫疫情的发生。     

猪口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失灭活疫苗不同首免日龄对免疫效果影响测定

为评价猪口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失灭活疫苗不同首免时间对免疫效果的影响,选择二组不同日龄试验猪只进行免疫接种,接种疫苗当天采集试验猪血样测定母源抗体水平,并分别在首免和二免后不同间隔时间采集血样,分别用口蹄疫液相阻断ELISA和非结构蛋白抗体ELISA方法检测猪O型、A型口蹄疫抗体和非结构蛋白抗体水平。结果显示：40日龄首免的猪只,一免后31 d, A型和O型口蹄疫抗体阳性率分别为94.12%和100%,二免后60 d,分别为31.58%和36.84%;70日龄首免的猪只,一免后30 d, A型和O型口蹄疫抗体阳性率均为100%,二免后54 d,均为97.96%。表位缺失疫苗免疫后,两个试验猪群口蹄疫非结构蛋白抗体均为阴性。结果表明：70日龄首免的猪群,其口蹄疫O型和A型抗体阳性率较同期40日龄首免的猪群高,说明母源抗体水平低的仔猪对该疫苗的免疫应答水平更高。     

猪O型口蹄疫合成肽疫苗及猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫效果对比试验

使用猪O型口蹄疫合成肽疫苗与猪O型口蹄疫高效灭活疫苗免疫30-40日龄商品猪,免疫采用正向间接血凝试验、液相阻断ELISA及VP1结构蛋白抗体ELISA检测免疫前和首次免疫后14d、28d、35d、42d、56d及二次免疫后7d、14d、28d抗体水平。同时,对接种疫苗的实验猪进行免疫应激观察。结果显示:注射合成肽疫苗试验猪未出现不良免疫副反应;采用正向间接血凝试验检测,两种疫苗免疫抗体合格率差异不显著;运用液相阻断ELISA及VP1结构蛋白抗体ELISA进行检测,注射合成肽疫苗试验猪二免7d后抗体水平快速上升,抗体检测合格率达到73%-100%。与注射高效灭活苗组比较表明:合成肽疫苗临床使用的安全性较高,免疫抗体合格率明显优于猪O型口蹄疫高效灭活苗。     

口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失灭活疫苗免疫安全性和抗体消长规律研究

为摸清口蹄疫O型、A型二价3B蛋白表位缺失灭活疫苗免疫安全性和抗体消长规律,对试验猪群进行免疫,观察其健康状况,采用口蹄疫非结构蛋白ELISA检测非结构蛋白抗体,采用液相阻断ELISA检测O型和A型口蹄疫抗体。结果显示,疫苗免疫后,猪群健康状况良好,各时间点口蹄疫非结构蛋白抗体均为阴性;免疫前、一免后29 d、61 d、95 d、123 d,二免后30 d、64 d、92 d,A型口蹄疫抗体阳性率分别为7.14%、100%、100%、100%、100%、100%、100%和100%,O型口蹄疫抗体阳性率分别为0、100%、100%、100%、100%、100%、100%和100%。表明该疫苗免疫猪只后,安全性好,不会诱导动物机体产生口蹄疫非结构蛋白抗体,诱导产生的高水平A型、O型口蹄疫抗体可以维持较长时间,实施一免可维持至少4个月,实施二免可维持至少3个月。     

不同厂家的猪O型口蹄疫疫苗对口蹄疫流行毒株保护性的研究

为了探索不同厂家疫苗对猪O型口蹄疫流行毒株的保护情况,选用当前政府采购的A、B灭活疫苗厂家和C合成肽疫苗厂家生产的猪O型口蹄疫疫苗,按照农业部推荐免疫程序对试验猪分别进行二次免疫后90天,用OZK/93和O/(XJ/10-11/MYA/98)进行攻毒,观察其各自保护率。结果显示,A、B两个厂家的灭活疫苗对OZK/93株的攻毒保护率分别为60%、80%,对O/(XJ/10-11/MYA/98)株的攻毒保护率分别为100%、100%;合成肽疫苗对OZK/93株的保护率为100%,对O/(XJ/10-11/MYA/98)株保护率为60%。说明试验用的3个厂家的猪O型口蹄疫疫苗对毒株的保护有差异。     

O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法的建立

本研究建立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法,确立了O型口蹄疫病毒固相竞争ELISA抗体检测方法检测O型口蹄疫血清阴阳性判定标准：抗体效价大于或等于1：32时判为O型口蹄疫抗体阳性;1：16～1：32时判为O型口蹄疫抗体可疑。检测131份阴性血清、口蹄疫亚洲1型阳性血清和A型阳性血清,固相竞争ELISA方法和液相阻断ELISA方法的特异性分别是95．5％,84．7％。固相竞争ELISA方法检测口蹄疫亚洲1型、口蹄疫A型阳性血清时,无交叉反应,O型口蹄疫病毒感染牛、免疫牛和感染猪血清的阳性检出率均为100％,免疫猪检出率为86．7％。     

O型口蹄疫疫苗免疫牛抗体消长动态的LPB-ELISA检测

分别按一次免疫、首免后第15d加强免疫和首免后第60d加强免疫程序，对3组试验牛（每组牛20头）用O型口蹄疫疫苗进行了免疫。免疫后不同时间点用液相阻断ELISA（LPB-ELISA）测定了免疫牛O型口蹄疫抗体效价。结果，首免后第15d加强免疫牛和第60d加强免疫牛抗体水平较高，50％保护牛所占比例分别为56．3％和63．1％，完全受保护的牛所占比例分别为34．3％和29．5％。第60d加强免疫牛的保护率要高于第15d加强免疫牛和一次免疫牛的保护率。结果表明，首免后第60d加强免疫是最理想的免疫程序。     

口蹄疫灭活疫苗与合成肽疫苗免疫效果对比试验

使用猪O型口蹄疫高效灭活疫苗与猪O型口蹄疫合成肽疫苗免疫28~35日龄商品猪,采用正向间接血凝试验和VP1结构蛋白抗体ELISA检测免疫前和首次免疫后14 d、28 d、35 d、42 d、56 d及二次免疫后7 d、14 d、28 d抗体水平。同时,对接种疫苗的实验猪进行免疫应激观察。结果显示:注射两种疫苗试验猪未出现不良免疫副反应;采用正向间接血凝试验检测,两种疫苗免疫抗体合格率差异不显著;运用VP1结构蛋白抗体ELISA进行检测,注射合成肽疫苗试验猪二免7 d后抗体水平快速上升,抗体检测合格率达到73%~94.12%。O型口蹄疫灭活免疫抗体不适宜用此检测方法。     

免疫增强剂提高猪口蹄疫灭活疫苗免疫效力的研究

为评价免疫增强剂CVC1302对猪口蹄疫疫苗的免疫增强效力,本研究以50日龄断奶仔猪为研究对象,将不同浓度的CVC1302添加到口蹄疫疫苗中免疫仔猪,免疫后28 d采血,液相阻断ELISA (LPB-ELISA)检测免疫猪抗体水平,以筛选CVC1302最佳使用剂量;采用LPB-ELISA监测最佳使用剂量下疫苗对免疫仔猪的免疫持续期;免疫后28 d对所有猪以1000倍半数感染量(PID50) O型口蹄疫病毒(FMDV) MYA98株攻毒评价疫苗的保护效力。同时评价免疫增强剂CVC1302对现有商品化疫苗(O型灭活疫苗、O/A/Aisa-1型三价灭活疫苗及合成肽疫苗)的免疫增强效力。结果表明,高、中、低3个剂量的CVC1302均能够极显著提高口蹄疫疫苗的特异性抗体水平约3个滴度(p0.01),并且中剂量的CVC1302效果最佳。CVC1302可以延长口蹄疫疫苗的合格抗体持续期达6个月,并可以将灭活疫苗的攻毒保护力(PD50)从6.9提升至15.59。将CVC1302添加到商品化疫苗中能够极显著提高口蹄疫疫苗的免疫效力(p0.01)。结果表明,免疫增强剂可以较大幅度增强口蹄疫疫苗的免疫效力,具有较为广阔的应用前景。本研究为提高口蹄疫疫苗的免疫效果提供了新的选择。     

最新4种猪口蹄疫O型灭活疫苗及O型-A型二价灭活疫苗免疫效果评估

试验选用政府招标的2家公司生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗及猪口蹄疫O型-A型二价灭活疫苗共4种疫苗对健康仔猪按免疫程序进行试验,采用ELISA方法检测不同阶段抗体水平,以期评估不同猪口蹄疫疫苗的免疫效果。试验结果表明,2种O型疫苗免疫21 d后,其抗体阳性率就达70%,二免后抗体效价可达8log2～9log2,抗体合格率高达100%,抗体保护力持久;O型-A型二价灭活苗需2次以上免疫,才能产生较好的抗体保护力度。政府招标购买的疫苗均能产生较好的免疫效果,O型灭活苗免疫效果优于O型-A型二价灭活苗;建议口蹄疫免疫实行二次免疫,间隔28～30 d,必要时进行三免。     

猪O型口蹄疫合成肽疫苗免疫效力的研究

为了解猪O型口蹄疫合成肽疫苗免疫28 d后是否能够增强对易感仔猪的免疫效力,本研究将猪O型口蹄疫合成肽抗原乳化后按1头份、1/3头份和1/9头份三组剂量分别免疫易感仔猪。在免疫第28 d检测仔猪血清中的中和抗体滴度及攻毒保护试验检测PD_(50)。结果显示:1头份剂量组VP1抗体滴度最高达1:45,且显著高于其他剂量组VP1抗体滴度(P0.05);1/3头份剂量组VP1抗体滴度最高达1:22,1/9头份剂量组VP1抗体滴度均为1:16,该两组间无显著差异(P0.05)。猪O型口蹄疫合成肽疫苗能够有效抵抗O/GX/09-7毒株和JMS毒株的侵袭,增强了易感仔猪对该两种病毒的免疫保护力。     

猪瘟、蓝耳病及猪O型口蹄疫母源抗体消长规律

为了研究猪瘟、猪高致病性蓝耳病和猪O型口蹄疫母源抗体的消长规律,制定科学合理的免疫程序。本试验利用ELISA抗体检测试剂盒,对仔猪0、7、14、21、28、35、42、49、56日龄的猪瘟、猪高致病性蓝耳和猪O型口蹄疫母源抗体分别进行检测。结果表明仔猪猪瘟、猪高致病性蓝耳病和猪O型口蹄疫哺乳前抗体水平均与阴性对照相当,抗体为0,7日龄时各疾病抗体均达到最高水平;猪瘟抗体水平在28日龄时明显下降;猪高致病性蓝耳病35日龄时抗体水平明显下降;仔猪O型口蹄疫14日龄抗体明显下降。猪瘟、猪高致病性蓝耳和猪O型口蹄疫的母源抗体具有不同消长规律,为临床制定合理的首免日龄提供科学依据。     

O型口蹄疫疫苗对关岭牛的免疫效果血清学调查

为确定O型口蹄疫疫苗对关岭牛的免疫效果,在春防期间对关岭县12个乡镇定点、定时免疫90头适龄健康关岭牛,28天后采集血清,用牛羊O型口蹄疫抗体ELISA检测试剂盒进行免疫抗体检测,评价疫苗的免疫效果。结果:O型口蹄疫免疫抗体阳性率为82.22%,达到农业部规定≥70%的要求,表明O型口蹄疫疫苗能够诱导关岭牛产生较高水平的免疫抗体,具有良好的免疫保护效果。     

沈阳地区A型口蹄疫免疫抗体的监测报告

应用液相阻断ELISA试验方法对沈阳地区应用口蹄疫A型灭活疫苗对5个奶牛场进行了免疫抗体跟踪监测。结果显示,一免后A型口蹄疫抗体免疫合格率只有在14～28d之间能达到保护水平,抗体下降速度较快;二免后14dA型口蹄疫抗体平均合格率达到高峰,为97%,之后缓慢下降,直至二免后90d还能达到保护水平。表明对于A型口蹄疫疫苗的免疫,首免后1个月必须进行加强免疫,达到三次免疫的效果最好,以后4个月免疫1次。     

猪O型口蹄疫母源抗体测定及疫苗免疫效果评价

为科学评价猪O型口蹄疫灭活疫苗的免疫效果,并合理制定猪群O型口蹄疫免疫程序,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对猪群母源抗体及疫苗免疫抗体进行了检测与分析。结果显示,仔猪42日龄时母源抗体回落近临界值,猪群首次免疫后28 d抗体水平达到高峰,42～49 d抗体水平下降至临界值;二次免疫后21～28 d抗体水平达到高峰,随后抗体水平逐渐下降,120 d抗体水平下降至临界值。根据上述试验结果,建议免疫程序如下:仔猪40日龄首免O型口蹄疫灭活疫苗,首免后45 d进行二免,以后每4个月加强免疫1次。