Study on the Integration of T-DNA into Lilium longiflorum

[Objective] The aim of this study is to obtain transgenic Lilium longiflorum Thumb. [Method] A two-step method of explant and the T-DNA integration technique were employed to transform Lilium longiflorum via Agrobacterium mediated method. [Result] The best infection effect appeared under the OD600 value of Agrobacterium within 0.6-0.8,the addition of 250 mg/L AS could increase the transformation efficiency. The optimal concentration of G418 for screening is 50 mg/L. Some putative transgenic plants of Lilium longiflorum with resistance to G418 showed positive in PCR,preliminarily proving that T-DNA gene had integrated into the genome of lily. [Conclusion] The study may lay a foundation for breeding excellent lily varieties through T-DNA integration technique.     

T-DNA插入麝香百合的研究(英文)

[Objective] The aim of this study is to obtain transgenic Lilium longiflorum Thumb. [Method] A two-step method of explant and the T-DNA integration technique were employed to transform Lilium longiflorum via Agrobacterium mediated method. [Result] The best infection effect appeared under the OD600 value of Agrobacterium within 0.6-0.8,the addition of 250 mg/L AS could increase the transformation efficiency. The optimal concentration of G418 for screening is 50 mg/L. Some putative transgenic plants of Lilium longiflorum with resistance to G418 showed positive in PCR,preliminarily proving that T-DNA gene had integrated into the genome of lily. [Conclusion] The study may lay a foundation for breeding excellent lily varieties through T-DNA integration technique.     

T-DNA插入麝香百合的研究

采用2步外植体法结合比较成熟的农杆菌介导T—DNA插入技术转化麝香百合,为快速选育百合新品种奠定基础。     

T-DNA插入麝香百合的研究

[目的]获得麝香百合转基因植株。[方法]采用2步外植体法和农杆菌介导的T-DNA插入技术转化麝香百合。[结果]菌液浓度OD600值为0.6~0.8时浸染效果好,同时附加250 mg/L的AS可以提高转化效率,50 mg/L G418为抗性筛选最适浓度。对经过抗性筛选的百合转化植株进行PCR分子检测,部分转基因植株呈阳性,初步证明T-DNA已插入到百合基因组中。[结论]该研究为利用T-DNA插入技术筛选优良的百合新品种奠定了基础。     

3类观赏百合试管苗叶片结构及水分特性

1材料与方法 1．1材料试验于2004年6月-2006年6月在青海大学农牧学院农学系植物学及植物组织培养实验室进行。试材：东方百合品种为马克;亚洲百合品种为黄巨人;铁炮百合品种为白狐,取自青海大学农牧学院农学系组培室内培养而得的试管苗叶片。     

百合遗传转化高频直接分化受体系统的构建

以东方百合西伯利亚和索蚌为试材,通过对鳞片分化成苗、小叶离体再生、生根和抗生素敏感性试验等研究,建立了稳定、高效的以无菌苗叶片为外植体的高频直接分化基因转移受体系统。在含有BA2mg/L+ZT1mg/L的MS培养基上,对供试品种无菌苗小叶片进行离体分化培养,再生率达100%,其适宜的生根培养基为MS+NAA0.75mg/L。同时,对小叶片外植体再生体系的抗生素及除草剂筛选浓度进行试验,结果显示:小叶片对G418和PPT较敏感,适宜的G418筛选浓度为80mg/L,PPT筛选浓度为1.75mg/L;而羧苄青霉素适宜浓度范围较宽,为300～400mg/L。     

麝香百合种球大小对鳞茎生长的影响

[目的]解决麝香百合种球的扩繁问题。[方法]根据不同的种球大小和重量,设20个级别处理,研究麝香百合种球大小对鳞茎生长的影响。[结果]结果表明,百合种球大小在50~65 g的处理对鳞茎鲜重、干重、直径和鳞片数量的增加效果明显;鳞茎直径、鲜重和干重与百合种球大小之间存在明显相关,其回归关系式分别为:Y1=40.117 0-22.946 9X1+3.854 5X12,Y2=-12.611 2+0.879 5X2-0.002 059X22和Y3=-10.365 6+2.685 1X3-0.018 91X32。[结论]该研究为麝香百合种球的进一步研究提供依据。     

转叶绿体超氧化物歧化酶基因水稻的获得

[目的]研究转叶绿体超氧化物歧化酶（SOD）基因水稻的获得。[方法]在构建叶绿体超氧化物歧化酶基因转化载体的基础上,采用农杆菌侵染法,使用C418作为筛选剂,经筛选和分化获得转基因植株,并对其进行PCR检测。[结果]确定G418的最佳浓度为200mg／L,采用尽可能短的筛选时间获得了好的转化效果,最终获得237株再生苗;经PCR检测,65株呈阳性,转化率为27％。[结论]确定了G418的筛选效果,为其进一步应用提供科学依据。     

4 种观赏百合的组培快繁技术研究

以观赏百合莫娜、黄天霸、巴巴拉、索邦等4个品种的鳞片为材料进行组培快繁技术研究。结果表明:用75%酒精消毒10 s,0.1%升汞消毒10 min,再用无菌水清洗5次的灭菌效果最好,污染率最低;MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L为最佳诱导培养基;MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L为最佳增殖培养基;MS+IBA 0.5 mg/L为最佳生根培养基;蛭石∶黄心土=1∶1为最佳移栽基质。整套组培快繁技术在莫娜、黄天霸、巴巴拉、索邦等4个观赏百合品种中均适用。     

茎尖培养及热处理技术在百合脱毒中的应用研究

针对目前百合花卉栽培存在病毒侵害、品种退化严重的状况,以东方百合"Tiber"品种经过初代培养的无菌苗为材料,采用茎尖培养结合热处理的脱毒方法进行脱毒试验,并在试验过程中采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测法对百合黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和百合潜隐病毒(Lilysymptomless virus,LSV)进行检测。证明了茎尖培养结合热处理的脱毒技术的可行性。试验结果表明,对于CMV的脱毒,仅用茎尖培养即可达到很好的脱毒效果。对于LSV的脱毒,茎尖培养结合30 min热处理的脱毒效果优于普通组织培养和茎尖培养。     

东方百合茎尖组培技术研究

[目的]研究东方百合索蚌（Sorboune）、元帅（Acapulco）、西伯利（Siberia）茎尖分生组织分化,生产脱毒种苗。[方法]利用MS培养基和外源激素,对东方百合品种进行茎尖组织培养。[结果]鳞片诱导小仔球的最适培养基为MS＋6-BA 1.0mg／L＋NAA 0.2mg/L。茎尖诱导和分化的最适培养基为MS＋6-BA 1.0mg／L＋NAA 0.5mg／L。[结论]在百合种球产业化生产中,该方法是获得百合复壮原种的主要手段。     

龙牙百合在干旱胁迫下的生理变化及耐旱性评价研究

[目的]优化作物耐旱性鉴定的指标体系,探索对龙牙百合进行耐旱性评价的有效方法。[方法]利用不同强度干旱条件对龙牙百合进行胁迫,通过测定几种与植物抗逆性有关的生理指标研究它们在干旱胁迫下的变化规律。[结果]轻度胁迫下,丙二醛含量有所上升,脯氨酸含量变化较小,SOD总活性增加较快。中度胁迫下,丙二醛含量的总体变化趋势为先升后降;脯氨酸含量总体升高,在接近重度胁迫时达到胁迫期间的最高水平。重度胁迫下,丙二醛含量缓慢上升,脯氨酸含量快速下降。致死性胁迫下,丙二醛含量先升后降,脯氨酸含量变化较小。中度、重度及致死性胁迫下,SOD总活性基本维持在较高水平。在整个胁迫过程中,叶绿素含量的变化与胁迫强度呈负相关关系。[结论]只有采用多项指标综合评价才能较准确地反映植物的抗旱特性。     

农杆菌介导的百合遗传转化受体系统的研究

[目的]研究农杆菌介导的百合遗传转化受体系统。[方法]选取改进MS培养基为基本培养基,以百合的鳞片为材料进行外植体再生和抗生素筛选试验,确定农杆菌介导的百合遗传转化受体系统。[结果]MS改进培养基中添加0.5 mg/L2,4-D、1.0 mg/L BA最有利于鳞片不定芽的分化,分化率为59.1%。小叶块在添加0.1 mg/LBA、1.0 mg/L2,4-D的MS改进培养基中的分化率最高,达94.4%,且生根情况较好。以百合的鳞片和小叶块作为农杆菌介导的基因转化的受体材料时,所用头孢霉素的浓度以400 mg/L最好,鳞片和小叶块周围几乎没有农杆菌菌斑。潮霉素筛选鳞茎的亚致死浓度为14 mg/L,潮霉素筛选小叶块的亚致死浓度为18 mg/L。[结论]该研究为百合农杆菌介导的转基因研究奠定了基础。     

百合花器官的组织培养

以帝伯、西伯利亚、铁炮、金百合4个品种的花器官为外植体,进行不同品种花器官及同一品种花器官不同部位的组培难易程度试验。结果表明,品种间诱导率存在差异,从易到难的排序为帝伯、西伯利亚、铁炮、金百合;同一品种不同部位的诱导率也存在差异,从易到难的排序为花丝、花托、子房、花冠、花柱、花药。在初代诱导培养基中,以M S 6-BA 0.5m g/L NAA 0.5m g/L和M S 6-BA 1.0m g/L NAA 0.5m g/L较好;在继代增殖培养基中,帝伯和西伯利亚的最适培养基均为M S 6-BA 1.0m g/L NAA 0.2m g/L,而铁炮百合为M S 6-BA 1.0m g/L NAA 0.5m g/L。     

百合转P5CS-F129A基因的遗传稳定性和耐旱性检测

目的百合是世界上主要的商品花卉之一,具有很高的观赏价值和经济价值,然而目前的主栽东方百合品种耐旱和耐盐碱性较差,对其进行改良是提高百合价值的关键因素。方法对已获得的含抗逆相关基因P5CS-F129A的东方百合‘索邦’单拷贝转化株系L89和双拷贝株系L31进行了4年的组培继代培养和1年的温室栽培,检测了目的基因的稳定性和干旱胁迫处理下的表型和生理指标的变化。经Southern印迹杂交和cDNA检测显示目的基因能够稳定遗传。结果干旱胁迫处理结果表明:两个转基因株系叶片脯氨酸含量均高于普通‘索邦’,其中株系L31的脯氨酸水平最高;虽然干旱胁迫下两个转基因株系和普通‘索邦’叶片相对电导率均有所升高,但转基因株系叶片的相对电导率低于普通‘索邦’,重新灌水后,转基因株系恢复正常水平,普通‘索邦’未恢复;在表型性状等方面,经过胁迫并复水的株系L89和L31总体长势良好,两株系之间长势无显著差异,而普通‘索邦’叶片黄化严重,生长受阻。结论转P5CS-F129A基因植株具有更强的耐旱性和遗传稳定性,对抗逆性百合新品种的培育具有重要意义。      

青岛百合高效离体快速繁殖体系的建立

以青岛百合及麝香百合的鳞片和茎尖为试验材料,研究了外植体的放置方式、鳞片的不同部位、不同的激素浓度及活性炭对百合再分化的影响,成功建立了青岛百合的高频再生体系。结果表明两种百合的最佳外植体部位为中层鳞片的基部,放置方式为凸面接触培养基,青岛百合的最适再生培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L,麝香百合的最佳再生培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L,两种百合的最高再生率均达到100%。     

PP_(333)、GA_3对麝香百合切花品质及叶绿素含量的影响初探

用PP3 3 3 、GA3 溶液分别对麝香百合进行叶面喷施处理 ,试验结果表明 :叶面喷施GA3 对百合花茎长度及花朵数的增加影响最显著的浓度为 2 0 0mg/L ,其次为 5 0 0mg/L ;叶喷PP3 3 3 对茎长增加以浓度 1 0 0mg/L显著 ,而对花朵数增加以 2 0 0mg/L显著。叶绿素含量以GA3 2 0 0mg/L浓度的最高 ,其次为GA3 5 0 0mg/L ,且GA3 处理叶绿素含量总体上高于PP3 3 3 。     

转基因油菜W-4 T-DNA旁侧序列分析与事件特异性检测

W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系.为建立W-4的转基因事件特异性PCR检测技术,应用温度不对称PCR（TAIL-PCR）扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列.其中右边界旁侧序列长度为290 bp,其碱基组成G＋C含量为31.27％、A＋T含量为68.73％;左边界旁侧序列长度为365 bp,其碱基组成G＋C含量为32.6％、A＋T含量为67.4％,表明该T-DNA整合在富含AT区.序列比对结果发现,该转基因事件中,T-DNA左边界序列完全整合到油菜基因组中,仅有1个碱基由G转换成了A.而右边界则缺失了包括RBborder在内的62个碱基.结果表明：转基因高油酸油菜T-DNA的整合是一次无载体序列的整合.依据左、右边界旁侧序列和转基因载体的T-DNA左右边界序列设计了2对特异性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能从W-4基因组DNA中扩增出大小分别为485和405 bp的预期产物,而在其他转基因油菜、非转基因油菜的基因组DNA和空白对照中均无特异性扩增产物,据此建立了W-4的转基因事件特异性PCR检测技术.应用该检测技术可以从含有0.1％ W-4基因组DNA的混合样品中扩增出特异产物,检测灵敏度达0.1％.可对W-4的转基因事件进行特异性检测.     

液体培养基对有斑百合花粉管生长的影响

以有斑百合花粉为试材,通过离体培养,利用单因子试验研究蔗糖、硼酸、以及钙、镁、钾离子对花粉萌发和花粉管生长的影响.并在此基础上进行多因子试验比较了蔗糖、H3 BO3、CaCl2和Ca(NO3)2·4H2O对有斑百合花粉萌发的影响.结果表明:蔗糖、硼和钙对有斑百合花粉萌发影响较大,而钾和镁的影响较小;适宜的花粉培养液为蔗...