Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of potato leafroll virus and potato virus Y in potato tubers after artificial break of dormancy

Summary Conditions necessary for the detection of potato leafroll virus (PLRV) and potato virus Y (PVY) in tubers from primary and secondary infected plants were investigated. Tubers were analysed before and after breaking dormancy by rindite treatment. PLRV was reliably detected indormant tubers whereas PVY was readily detected only when tubers had been rindite-treated and held for two to three weeks at 22°C and high humidity in the dark. PLRV occurred in higher concentration at the heel end than at the rose end of infected tubers and the concentration remained nearly unchanged during the experimental period of 35 days, whereas PVY was found to be more concentrated at the rose end and was rapidly accumulating in the tubers after the break of dormancy. In dormant tubers PVY concentration dropped during storage at 22°C. The use of ELISA for tuber indexing is discussed.     

Purification of potato virus A and its detection in potato by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

Potato virus A (PVA) was purified fromNicandra physaloides by a simple method that omitted organic solvent clarification and consisted of differential centrifugation followed by equilibrium centrifugation in CsCl. An antiserum was produced that specifically detected PVA in potato leaf sap using either the SDS-agar test or enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). No heterlogous reaction of the antiserum with potato virus Y was detected. Purified PVA was highly infectious; it had an A 258/280 nm absorbance ratio of 1.28. The particles had a normal intact appearance in the electron microscope. Detection of PVA in potato sprouts and foliage by ELISA was compared with the local lesion assay onPhysalis angulata L. plants. ELISA was superior over an indicator plant test when sprout tissue was used. PVA antiserum reacted similarly with mild and crinkle isolates.     

Detection of potato virus X in tubers with the enzymelinked immunosorbent assay (ELISA)

Summary Tubers of field-grown plants of ten Dutch potato cultivars, secondarily infected with potato virus X (PVX) or free from this virus were submitted to ELISA after storage at 4°C. About 40 weeks after lifting PVX could be detected reliably. Extinction values with the apical parts of the tubers were slightly higher than those with the basal parts.     

Reaction to the potato leafroll virus (PLRV) in diploid potatoes

Summary Diploid parents with some resistance to PLRV, were intercrossed to give 3 families with 191 clones which were evaluated for reaction to PLRV and yielding ability. After inoculation with PLRV the clones could be separated into those: 1) resistant, 2) susceptible, 3) intolerant, reacting with low virus concentration, 4) tolerant and 5) intermediate in reaction. Both the ELISA test and the evaluation of external disease symptoms were necessary to separate the clones. No correlation was found between resistance to PLRV and tuber yielding ability.     

Use of enzyme-linked immunosorbent assay to detect potato leafroll virus in field grown potato,cv. Russet Burbank

Use of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in detecting potato leafroll infections in field grown potato, cv. Russet Burbank, was studied from 1986 to 1988 at Rosemount, Minnesota. The objective was to determine relative reliability of current season foliage ELISA, tuber tissue ELISA, and tuber progeny foliage ELISA. Serological tests were most accurate when foliage of tuber progenies was tested. ELISA underestimated total leafroll infection when current season foliage from the inoculated plant was used, in those plants inoculated during late tuber bulking stage. Current season foliage ELISA tests using newly expanded terminal leaflets were more reliable than were tests using older leaflets. Leafroll infection was detected in the current season foliage and tuber progenies (tuber tissue as well as tuber progeny foliage) of some plants seven days after inoculation. Most current season foliage infections were detected by day 14–28 depending on year. Differences among years were most likely caused by variation in quality of virus source plants and numbers of vectors used in inoculation. ELISA tests on tuber tissue were almost as effective as ELISA tests on tuber progeny foliage in detecting potato leafroll 20 days after inoculation, but ELISA on tuber tissue substantially underestimated infection if plants were sampled earlier. Maximum percent tuber infection occurred 20 days or more after inoculation. Movement of the virus from the inoculated stem to other stems decreased with increased plant age at inoculation. Percent infected tubers declined with increased plant age at inoculation. Action thresholds developed for aphids in managing potato leafroll virus should take into account the temporal change in percent infected tubers.     

Oxygen and carbon dioxide treatment to break potato tuber dormancy for reliable detection of potato virus Y (PVY) by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

Summary Dormant tubers of the potato cv. Bintje were treated for 7 or 14 days in an atmosphere enriched to either 40% O₂ plus 1% CO₂, or 40% O₂ plus 20% CO₂, or they were stored in closed plastic bags for identical periods. Rindite-treated and untreated tubers served as references. Treatment with 40% O₂ plus 20% CO₂ for 7 days was nearly as efficient as rindite for inducing sprouting. Both the O₂ plus CO₂ treatments, for 7 and 14 days, considerably increased virus concentration in tubers and had an effect similar to that of rindite 40 days after treatment, but the plastic bag treatment was not as efficient. It is concluded that O₂ plus CO₂ enriched atmospheres could be used for breaking tuber dormancy in order to detect reliably PVY in tuber extracts.     

Potato leafroll virus distribution in potato meristem tips and production of virus-free plants

Summary Uridine-H³ was incorporated into meristem tips of both healthy and PLRV-infected potato plants, of the cultivars, Majestic and Primura. Autoradiograms of tips pretreated with actinomycin D showed that 13 of 14 and 11 of 14 respectively, were virus free in the dome and first 4 leaf primordia, 1 and 3 were infected in the 4th leaf primordium, and 1 of Primura also in its 3rd primordium. The highest plantlet yield from cultures in vitro of meristem tips that included 4 leaf primordia (7 to 9 plantlets per meristem), was obtained by growing them in sequence on 3 sequential media, each based on Murashige and Skoog basic medium complemented with various hormones. The 2nd medium, containing benzylaminopurine (0.5 mg/l) and gibberellic acid (0.5 mg/l), elicited callus and the subsequent formation of adventitious buds. Of the plantlets of the cvs Vivaks, Primura and Majestic, 88, 91 and 100 %, respectively, were PLRV-free. Propagation in vitro, by the single-node cutting technique and tuberlet production, were successful.     

The callose test for the detection of leafroll virus in potato tubers

Summary Formation of abnormal callose in the sieve tubes is the basis of a practical test for leafroll virus infection in potato tubers. However, as it has often been stated that the test is not consistent enough, the following features were examined, with standardisation in mind: distribution of affected phloem in the tuber, detectability with different stains, the effect of the ‘Rindite’ treatment for breaking dormancy, and the effects of time and temperature of storage. In early-harvested tubers infected with leafroll virus, sieve tubes near the heel end are the most likely to contain abnormal callose but elements located in the cortex and medulla, as well as those near the cambium, can also be affected. Callose continues to form in early-harvested tubers during at least the first month of storage, but does not appear in tubers infected within a few weeks of harvest. Relatively less callose is formed at 28 C than within the range 4–18 C. The callose test may help in judging the health of a crop but it cannot be made precise enough for more critical purposes.

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Zusammenfassung Obwohl verschiedene Methoden zur Ermittlung von Blattrollvirusinfektion bei Kartoffeln entwickelt worden sind, wird zu ihrem Nachweis im allgemeinen noch immer die Augenstecklingsprüfung angewendet. Im Jahre 1955 wurde der Kallosetest von einigen Forschern eingeführt. Er beruht auf der Tatsache, dass das Blattrollvirus in den Siebr?hren des Phloems der Kartoffelknollen eine abnormale Kallosebildung hervorrufen kann. Wenn Schnittstücke von befallenen Knollen mit einem die Kallose f?rbenden Farbstoff behandelt werden, wird die Kallose sichtbar. Der Vorteil dieser Methode besteht darin, dass die vorhandene Kallose rasch festgestellt werden kann. Aus diesem Grunde wird der Test in verschiedenen L?ndern Europas im Anerkennungsverfahren für Saatkartoffeln angewendet. Ein Nachteil dieser Methode liegt darin, dass nicht das Virus selbst entdeckt wird, sondern nur eine seiner Sekund?rwirkungen. Da die Beurteilung der Testergebnisse weitgehend von den pers?nlichen F?higkeiten des Bearbeiters abh?ngt, k?nnte die gestellte Diagnose angezweifelt werden. Wir haben Versuche durchgeführt, um zu sehen, ob die Zuverl?ssigkeit des Teste verbessert werden k?nnte. Verschiedene Kallose-Farbstoffe, die Stelle der Kallose in der Knolle und Methoden zur F?rderung der Kallosebildung waren Gegenstand unserer Untersuchungen. Es wurden auch Versuche unternommen, um die Zeit zwischen der Infektion der Kartoffelpflanze mit Blattrollvirus und der Kallosebildung in der Knolle zu bestimmen. Bis jetzt ergab Resorzinblau die besten Resultate als F?rbemittel für die Kallose. Kein anderer der untersuchten Farbstoffe erh?hte die Zuverl?ssigkeit des Testes. Tabelle 1 zeigt, dass die Verteilung der Kallose in der Knolle sehr unregelm?ssig ist und dass sie sich haupts?chlich in der N?he des Nabelendes befindet. In Knollen von früh infizierten pflanzen findet man die Kallose auch am Kronenende. In früh geernteten Knollen wird die Kallosebildung durch Lagerung w?hrend 4 Wochen bei einer Temperatur von 10 bis 18 C erh?ht (Tabelle 2). Behandlung mit Rindite regte die Kallosebildung in Knollen der SorteBintje nicht an. Eine eigens aufgestellte Skala wurde verwendet um die beobachtete Kallosemenge zu vermerken. Die gef?rbten Siebr?hren zwischen den Schwarzen Linien in Abb. 1 wurden gez?hlt und die Zahl der gef?rbten Siebr?hren in Cortex und Medulla gesch?tzt. Auf Grund der Ergebnisse in Tabelle 4 wurde beschlossen zu empfehlen, dass auch die in Cortex und Medulla vorhandene Kallose, entgegen den Feststellungen vonWeller undArenz (1957) sowieSchuster undByhan (1958) in Betracht gezogen werden sollte. Dies bedeutet, dass wenn in Cortex und Medulla viel Kallose und in den Siebr?hren nahe beim Xylem keine gefunden wird, die Knolle trotzdem als infiziert betrachtet werden muss. Knollen, die eine Minimalmenge (1T) an Kallose aufweisen, n?mlich eine vollst?ndig mit Kallose gefüllte Siebr?hrenl?nge in der N?he des Kambiums, werden als krank bezeichnet. Die Ergebnisse in Tabelle 3 zeigen, dass Knollen von Pflanzen, die in einem sp?ten Entwicklungsstadium mit Blattrollvirus infiziert werden, nicht mehr Kallose bilden als gesunde Knollen. Daraus wird geschlossen, dass der Kallosetest nicht genügend zuverl?ssig ist, um im Studium des Viruswanderungsproblems von irgendwelchem Wert zu sein.

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Résumé Bien que différentes méthodes de diagnostic du virus de l’enroulement sur pomme de terre se soient développées, la méthode du tuber-test est ordinairement encore utilisée pour cette recherche. Le test de callose a été adopté en 1955 par un nombre de chercheurs. Il est basé sur le fait que le virus de l’enroulement peut produire une callose anormale dans les tubes criblés de phloème du tubercule de pomme de terre. Le trempage dans un colorant de sections de tubercules infectés met en évidence, par coloration, la présence de cals. L’avantage de cette méthode est la détection rapide de la présence de callose. Pour cette raison, ce test figure au programme de production de plants de différents pays d’Europe. Cette méthode a l’inconvénient de mettre en évidence non le virus lui-même, mais un de ses effets secondaires. Comme l’appréciation des résultats issus de ce test dépend pour beaucoup du jugement personnel de l’examinateur, le diagnostic posé peut prêter à discussion. Nous avons effectué des expériences pour voir comment on pourrait augmenter la sécurité du test. Nous avons étudié la variation de la coloration des cals, la localisation des cals dans le tubercule et les moyens de stimuler leur formation. Des essais ont également porté sur la détermination de la période s’écoulant entre l’infection de la plante par le virus de l’enroulement et la formation des cals dans le tubercule. Jusqu’à présent, le bleu de résorcine donne le meilleur résultat comme colorant des cals. Aucun autre colorant n’augmente la sécurité du test. Tableau 1 montre l’irrégularité de la répartition des cals dans le tubercule et leur localisation fréquente piés du talon. Dans des tubercules de plantes infectées précocement, les cals se trouvent également prés de la couronne. La production de cals chez des tubercules récoltés précocement est favorisée par conservation pendant 4 semaines à une température de 10 à 18 C (Tableau 2). Le traitement à la rindite ne stimule pas la formation des cals dans les tubercules de la variétéBintje. Une échelle arbitraire a été utiliséc pour enregistrer la quantité de cals observéc. Lest tubes criblés colorés entre les lignes noires de Fig. 1 sont comptés et le nombre de tubes criblés colorés dans l’écorce et la mo?lle sont estimés. Selon résultats figurant au Tableau 4, il y a lieu de conseiller, contrairement aux conclusions deWeller etArenz (1957) et deSchuster etByhan (1958), de prendre aussi de considération les cals présents dans ces dernières zones. Ce qui signifie que, si on détecte beaucoup de cals dans l’écorce et la mo?lle et aucun cal dans les tubes criblés près du xylème, le tubercule doit néanmoins être considéré comme infecté. Des tubercules montrant une quantité minimale (1T) de cals, c’est-à-dire une section de tube criblé près du cambium complètement remplie de cals, devront être considérés comme malades. Les résultats figurant au Tableau 3 montrent que des tubercules issus de plantes infectées par le virus de l’enroulement dans le dernier stade de développement ne forment pas plus de cals que des tubercules sains En conclusion, le test de callose n’est pas suffisamment sur pour être valable dans l’étude des problémes de translocation de virus.

     

Resistance to powdery dry rot (Fusarium sulphureum) in potato tubers

Summary Fourteen cultivars were tested for resistance to penetration and colonization byF. sulphureum by a point inoculation technique. Differences in resistance to penetration were small when compared with those reported forF. solani var.coeruleum, and were more apparent in one year than another. Tubers grown at different sites gave similar results. The medullary tissue was generally more susceptible than the cortex. There were large differences between cultivars in resistance to colonization and these were consistent between years and sites. A selection derived from a cross between established cultivars was more resistant than its parents.

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Zusammenfassung Um die Resistenz von 14 Kartoffelsorten gegenFusarium sulphureum zu prüfen, wurde eine Punktinokulationsmethode verwendet, die der von Pietkiewicz & Jellis (1975) für Phomaf?ule beschriebenen Methode ?hnelt, das Inokulum bestand aber aus 100 Konidien in 0,01 ml sterilem Wasser und die Inkubation betrug 4 Wochen. Die zu prüfenden Knollen stammten von zwei Herkünften und sieben der Sorten werden in zwei Jahren getestet. Die Eindringungsresistenz wurde durch Bonitur der F?ulen, die mehr als 2 mm über die Verletzungen hinausgingen, erfasst und die Ausbreitungsresistenz in der Rinde durch eine Gesamtbonitur jeder Wiederholung, bei der eine 1–3 Skala verwendet wurde: 1=2–20 mm Durchmesser, 2=20–40 mm, 3=>40 mm. Nicht verwertet wurden F?ulen unter 2 mm im Durchmesser. Insgesamt waren King Edward, Record und Pentland Squire signifikant weniger anf?llig gegenüber der Eindringung als die anderen geprüften Sorten (Tabelle 1) aber keine Sorte besass eine hohe Resistenz. Die Ergebnisse waren zwischen den Herkünften, dem Gewebe und den Jahren vergleichbar, aber die Unterschiede zwischen den Sorten waren in einem Jahr deutlicher als im anderen. Das Markgewebe war im allgemeinen gegen die Eindringung anf?lliger als die Rinde. Die Rangfolge für die Ausbreitungsresistenz war zwischen den Herkünften konstant und wenn auch geringer, zwischen den Jahren (Tabelle 2). Sorten mit Eindringungsresistenz hatten geringe Boniturwerte für die Ausbreitung, aber das umgekehrte stimmte nicht immer. Erste Prüfungen von selektiertem Zuchtmaterial zeigten, dass in der Familie B31, die aus (Pentland Crown x Maris Piper) x Pentland Squire gezüchtet wurde (Tabelle 3a), Resistenz vorhanden sein k?nnte. Ein Wiederholungstest im folgenden Jahr best?tigte, dass der Klon B31/46 eine deutlich h?here Eindringungsresistenz in der Rinde aufwies als King Edward und erfolgreiche Inokulationen ergaben nur kleine Faulzonen (Tabelle 3b). Daraus wurde geschlossen, dass es erfolgversprechend ist, auf Resistenz gegenFusarium sulphureum zu züchten unter Verwendung der in den britischen Sorten vorhandenen genetischen Variabilit?t.

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Résumé Une technique d'inoculation par pointe a été appliquée sur 14 variétés de pommes de terre, afin d'étudier leur résistance àFusarium sulphureum. Cette technique est semblable à celle décrite par Pietkiewicz & Jellis (1975) pour la gangrène, mais la concentration d'inoculum est de 100 conidies par 0,01 ml d'eau stérile et l'incubation est de 4 semaines. Les tubercules testés proviennent de 2 régions et 7 variétés ont été étudiées pendant 2 années. La pénétration du parasite est évaluée en notant la proportion de pourritures se développant sur plus de 2 mm au-delà de la blessure, la surface du sympt?me est notée pour chaque répétition à partir d'une échelle de 1 à 3∶1= diamètre de 2 à 20 mm; 2=20 à 40 mm et 3= supérieur à 40 mm. Les pourritures d'un diamètre inférieur à 2 mm ne sont pas notées. Dans tous les cas, King Edward, Record et Pentland Squire sont significativement moins sensibles à la pénétration que les autres variétés testées (tableau 1), bien qu'aucune variété ne soit hautement résistante. Les résultats sont sensiblement comparables suivant les endroits, les tissus et les années, mais les différences entre les variétés sont plus nettes d'une année sur l'autre. Le tissu médullaire est en général plus sensible à la pénétration que le cortex. L'ordre de résistance au parasite est conforme suivant les endroits et sensiblement le même suivant les années (tableau 2). Les variétés présentant une certaine résistance à la pénétration ont des notes faibles au développement du sympt?me, mais l'inverse n'est pas toujours vrai. Des tests initiaux sous-abri à partir des sélections de plants ont montré une bonne résistance pour la famille B31, croisement de (Pentland Crown x Maris-Piper) x Pentland Squire (tableau 3a). Un test répété l'année suivante a confirmé la forte résistance à la pénétration dans le cortex du cl?ne B31/46 par rapport à King Edward et des inoculations réussies n'ont donné que de petites pourritures (tableau 3b). En conclusion, il est possible de sélectionner, en vue d'une résistance àF. sulphureum, à partir des variabilités génétiques disponibles au sein de variétés anglaises.

     

Reactivity of monoclonal antibodies to potato virus A in various types of enzyme-linked immunosorbent assay

Summary A panel of mouse monoclonal antibodies (MAbs) was prepared against potato virus A (PVA) and their reactivity was tested in various types of ELISA. The type of ELISA as well as the methods of MAbs purification played an essential role. All monoclonal antibodies reacted with PVA antigen in IDAS-ELISA but MAbs used in DAS₁-ELISA and in DAS₂-ELISA, in combination with polyclonal antibodies, showed different reactivity. The reactivity of MAbs in DAS-ELISA was dependent on the individual MAb used as a coating or as a conjugate. Two MAbs showed highest reactivity as coating antibodies but only one of them as a conjugate. The results demonstrate the importance of using different type of ELISA in selecting MAbs for routine diagnosis.     

Nachweis des Kartoffel-Y-Virus (PVY) in sekundärinfizierten Kartoffelpflanzen mit ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)

Zusammenfassung In einem Gef?ssversuch unter Gew?chshausbedingungen wurde die Erfassbarkeit des Y-Virus (PVY) in sekund?rinfizierten Pflanzen über einen Zeitraum von 11 Wochen geprüft. Untersucht wurden Bl?tter, Stengel, Stolonen, Wurzeln, die eingelegte Mutterknolle sowie neugebildete Tochterknollen. Mit Ausnahme der Mutterknolle konnte PVY in allen Pflanzenteilen mindestens zu einem Untersuchungszeitpunkt mit ELISA nachgewiesen werden. über den gesamten Untersuchungszeitraum nahmen die Viruskonzentrationen stets einen nichtlinearen Kurvenverlauf, mit einem absoluten H?hepunkt meistens zwischen dem 42. und 49. Tag nach dem Auspflanzen. Eine relativ hohe Viruskonzentration konnte in neugebildeten Knollen nur zu Beginn der Knollenbildung ermittelt werden.

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Summary The detection of PVY and the concentration of the virus in the various parts of the plant was checked weekly in the glasshouse over a period of 77 days. Under field conditions this would be equivalent to the period from planting to the death of the haulm. All leaves, stems, stolons, roots and residual mother tubers were examined as also were the newly formed daughter tubers. The presence of PVY could be demonstrated by ELISA in all plant parts with the exception of the mother tuber, at least at one test date, as can be seen in Tables 1 and 2. In both leaves and stems ELISA showed the presence of PVY at practically every test date, only at the first test date (14 days after planting) was the extinction value of the sixth leaf not significantly different to that of the healthy controls (Table 1). With ELISA, at least under glasshouse conditions, the presence of PVY can be established in every leaf and in the stem during the whole vegetative period, something which was not always possible with earlier methods of testing (Vulic & Arenz, 1963). The highest virus concentrations were found in the leaves, followed by the stems, stolons, newly formed tubers and roots respectively. As can be seen in Fig. 1, the virus concentration follows a non-linear curve with the highest point between the 42nd and 49th day (leaves) and the 35th and 42nd day (stems and stolons) after planting respectively. The concentration rose markedly for the first time again in the senescent phase (last test date) in all the plant parts examined (Fig. 1). The extinction value (=virus concentration) of the stolons was at all times lower than that of the leaves and stem following, however, the same curve form. The daughter tubers, which could only be tested from day 35 after planting, showed a steady fall in virus concentration, a slight increase being exhibited for the first time at the last test date (Fig. 1). Difficulty in demonstrating PVY in the newly formed tubers has also been described by Gugerli (1979). Further investigation is necessary to determine how these difficulties in the routine testing of tubers can be overcome. According to Gugerli (1979), presprouting the tubers led to an improvement in the demonstrability of PVY. Difficulty in demonstrating PVY in the roots, the presence of which could only be established with certainty at the end of the second and fourth week of age (Table 2), is the opposite of results obtained in our experiments on PVM infected plants (Hunnius & Daniel, 1979) as well as in experiments by Casper (1977) who in the case of PLRV even found the highes virus concentration in the roots. The spread of viruses in the tissues and their concentration in the roots appears to depend on the virus involved. That the presence of PVY in the mother tubers could not be established can have several explanations but is probably due to both the low initial concentration and the movement of the virus to newly formed parts of the plant. In serial testing with ELISA it is obvious that the recognition of PVY in the above ground parts of the plant is without problems, on the other hand, in newly formed daughter tubers much depends on the age of the tubers. In retrospect, further work is necessary on the serial testing of tubers, particularly with regard to the period after harvest, in order to extend the use of ELISA.

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Résumé La détection ainsi que la concentration virale du PVY ont été testées pendant 77 jours hebdomadairement, sur différentes parties de plantes cultivées en serre. Rapporté aux conditions de plein champ, cela représente la période entre la plantation et la maturité des plantes de pommes de terre. Les organes ciaprès ont été analysés: feuilles, tiges, stolons, racines, tubercules-mères ainsi que les tubercules-fils. Comme il ressort des tableaux 1 et 2, le PVY a été décelé sur tous les organes au moins lors d'un prélèvement, sauf sur le tubercule-mère. Sur les feuilles et les tiges, le PVY est pratiquement décelé lors de chaque prélèvement, mis à part pour le premier test (14 jours après plantation), les valeurs d'extinction de la 6ème feuille n'était pas significativement différentes de celles du contr?le sain (tableau 1). Le test ELISA a l'avantage de pouvoir déceler le PVY sur chaque feuille et sur la tige, pendant toute la période de végétation pour des conditions de serre; cela n'était pas le cas avec les tests habituels (Vulic & Arenz, 1963). La concentration virale la plus élevée a été trouvée sur les feuilles, ensuite dans la tige, les stolons, les tubercules nouvellement formés et sur les racines. Selon la figure 1, la concentration du virus n'évolue pas linéairement, le maximum absolu est attein entre le 42ème et le 49ème jour après plantation dans les feuilles, et entre le 35ème et 42ème jour dans les tiges et stolons. Le taux de virus a augmenté une nouvelle fois sur tous les organes de la plante (plus ou moins fortement) pendant la phase de maturation (fig. 1), comme cela a été observé lors du dernier prélèvement. L'extinction (concentration de virus) a été plus faible sur les stolons pour chaque prélèvement que sur les feuilles et tiges, l'évolution était en revanche semblable. Sur les tubercules-fils, dont le test peut avoir lieu 35 jours après plantation, la concentration diminuait régulièrement pour n'accro?tre qu'au dernier prélèvement (fig. 1). La problématique de détection du virus PVY sur les tubercules jeunes a également été décrite par Gugerli (1979). D'autres recherches seront indispensables afin de pouvoir surmonter ce problème pour les tests de routine. Selon Gugerli (1979), la prégermination permet d'améliorer le résultat du test. Les difficultés rencontrées pour la déction du PVY dans les racines, ce qui n'a été possible qu'à la fin de la 2ème et 4ème semaines après plantation (tableau 2), sont en discordance avec nos résultats obtenus sur des plantes contaminées de PVM (Hunnius & Daniel, 1979), et Casper (1977) qui avait observé dans les racines le taux le plus élevé de PLRV. La dissémination des virus et leur concentration dans les racines semblent être spécifiquement liées aux virus. Il y a plusieurs raisons pour que le PVY n'ait pu être décelé dans le tubercule-mère. Probablement, cela est lié à la très faible concentration au départ, ainsi qu'à la migration des virus dans les parties de la plante nouvellement formées. Il faut noter pour le test ELISA de routine que le PVY peut être décelé sans problème sur les parties sériennes des plantes. En revanche, sur les tubercules-fils le résultat dépend fortement de l'age de ces derniers. Il s'agira de poursuivre les essais avec ELISA, en tenant particulièrement compte du temps d'attente nécessaire après la récolte, pour que le test soit fiable et opérationnel.

     

Simplified extraction method for ELISA and PCR detection of potato leafroll luteovirus primary infection in dormant potato tubers

This report describes a simple, rapid and inexpensive procedure for sampling large numbers of dormant tubers for analysis of potato leafroll luteovirus (PLRV) infection. The procedure uses a common electric drill to simultaneously remove and macerate tuber-eye samples for detection of PLRV by the enzyme-linked immunosorbant assay (ELISA) and the polymerase chain reaction (PCR). By using these sampling and analysis approaches, 19 of 20 different PLRV isolates were detected in dormant tubers from plants with primary infections. Results from the dormant tuber analysis, were verified by planting the tubers and testing leaf tissue by ELISA and PCR. Similar sampling and testing done on healthy dormant tubers and sprouts from the tubers consistently gave negative results as expected.     

Transmission of potato leafroll virus to or from tuber slices by aphids feeding through a membrane

Summary Eye-bearing slices, cut from healthy potato tubers and placed between Parafilm membranes, were inoculated with potato leafroll virus (PLRV) byMyzus persicae. PLRV was detected by ELISA and by transmission tests in tuber slices and in plants grown from the slices of the susceptible cv. Désirée, but not in those of the resistant cv. Arkula. These results suggest that PLRV replication and transport within tuber phloem is controlled by specific mechanisms of resistance.M. persicae was also able to acquire and transmit PLRV toPl floridana from slices cut from tubers of infected plants. The aphids effectively transmitted PLRV from slices cut from the sprouting rose end but they failed to transmit it from slices cut from the heel end of tubers.     

Detection of viable and non-viable cells ofErwinia carotovora var.atroseptica in inoculated tubers of var. Bintje with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

Summary The ELISA technique was unable to distinguish between viable an non-viable cells (killed with ethanol) ofErwinia carotovora var.atroseptica in inoculated tubers during 8 weeks storage at C. The use of this technique to determine latent infections is questioned.     

Detection of potato leafroll virus by visual inspection,direct tissue blotting and ELISA techniques

Greenhouse-grown Russet Burbank and Russet Norkotah plants were tested for potato leafroll virus (PLRV) by visual examination, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and direct tissue-blotting assay (DTBA). Visibly infected and healthy plants were obtained from excised eyes of tubers submitted for winter certification tests. Each plant was sectioned into leaf, petiole, stem, root, seed piece, and tuber portions. Tissues were blotted on a nitrocellulose membrane for DTBA and then homogenized for use in a double-antibody sandwich ELISA system. Agreement between the two serological detection methods and with visual readings was high for petioles and stems, but lower for leaf, tuber and root tissues. Comparison of DTBA with ELISA and with visual plant symptoms suggest that DTBA can be used with the same accuracy as ELISA for detecting PLRV in stems and petioles     

Potato leafroll virus and potato virus Y in seed potatoes used to plant the North Carolina crop

Incidence of potato leafroll virus (PLRV) and potato virus Y (PVY) was determined in seed potatoes (Solatium tuberosum) from Canada, Maine, Minnesota, New York, North Dakota, Nebraska, Pennsylvania, and Wisconsin used to plant the North Carolina crop in 1977, 1978 and 1979. Incidence of PLRV ranged from 0–5.2% (X = 0.57%) and for PVY from 0-5.6% (X = 0.62%) from all sources (112 seed lots). All PVY isolates (177) tested from potato caused a very mild veinbanding and mottling onNicotiana tabacum cultivars NC 95 and NC 2326. No serological difference was detected between these isolates and the common strain of PVY from tobacco in North Carolina. Essentially no spread of PVY occurred in three potato fields observed each year of the study.     

Effect of time of inoculation with potato leafroll virus on development of net necrosis and stem-end browning in potato tubers

The Green Mountain cultivar was used in field tests to determine the effects of inoculating potato plants at various times with the potato leafroll virus (PLRV) on development of internal necrosis of tuber tissue. Viruliferous apterae of the green peach aphid,Myzus persicae (Sulz.), were placed on each stem in all hills to be inoculated in each 3.0 m single-row plot. Planting and inoculation dates were varied in all field experiments and, in one, several vine-killing dates were also included. All harvested tubers were stored for approximately four months at 10°C to enhance development of internal necrosis prior to examination. Similar but smaller greenhouse studies involving both apterous and alate green peach aphids were also conducted using Green Mountain, Irish Cobbler, and Russet Burbank cultivars. All results showed that as inoculation was delayed relative to plant development, more net necrosis (NN) occurred. Conversely, when plants were inoculated early, stem-end browning (SEB) rather than NN predominated. A high percentage of naturally occurring SEB tubers (cv. Russet Burbank) were found by ELISA to contain PLRV. Plants produced by these tubers only rarely developed leafroll symptoms. These findings suggest a previously unsuspected causal relationship between SEB and PLRV. Implications of this apparent relationship on the epidemiology of potato leafroll in Maine are discussed.